通用性配體親和層析法課件

人的差異在于業(yè)余時間通用性配體親和層析法通用性配體親和層析法人的差異在于業(yè)余時間通用性配體親和層析法第七章親和層析般用于純化蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)的方法的主要依據(jù)是各種大分子物質(zhì)之間理化特性的差異性XNY缺點由于這種差異性較小,因此要得到一種純度稍高的物質(zhì),常常需要繁瑣的操作,經(jīng)歷較長的時間,但最終收得率卻甚低◆1967年Axen等用溴化氰活化多糖凝膠偶聯(lián)肽和蛋白質(zhì)的方法,并成功地制備了固定化酶。Y這種利用大分子物質(zhì)具有的特異的生物學性質(zhì)進行純化的方法,于20世紀70年代就有了驚人的發(fā)展,并逐步得到了廣泛的應用。這使酶類等大分子物質(zhì)的純化過程變得較簡單、迅速和高效(見表7-1)眾所周知，函數(shù)圖像具有直觀性、形象性的特點，我們可以利用函數(shù)模型來分析生活實例，這種具有直觀效果的函數(shù)模型不僅會加深學生的理解和記憶，提高學習效率，而且通過對材料的對比理解，學生會發(fā)現(xiàn)各類變化事物中類似事物的共同點和本質(zhì)特點，把函數(shù)應用到實際生活中，使學生掌握基本的函數(shù)概念和基本的函數(shù)原理，進一步加深對函數(shù)的認識。一、函數(shù)的簡單介紹函數(shù)是一個數(shù)學模型，他主要用來研究客觀事物的運動變化，一般是從數(shù)量的角度來反映變量之間的對應關(guān)系。初中函數(shù)主要學習比較簡單的一次函數(shù)、反比例函數(shù)和二次函數(shù)，其中函數(shù)的變化與對應思想是中學教學中最基本的思想，函數(shù)中最常見的幾個術(shù)語是：常量、自變量、變量，學習函數(shù)要注意分析這些變量之間的關(guān)系，通過一些實際的函數(shù)實例的分析來引出函數(shù)的定義，再回到實例中運用這些實例對定義加以理解和分析。二、函數(shù)的教學方法1.通過生活實例引入函數(shù)概念函數(shù)原理寓于生活之中，要想對函數(shù)概念有充分的認識，就要結(jié)合生活實例，因為抽象的概念只有通過具體、形象的事物做支撐才能獲得更好的認識。函數(shù)的學習要以學生的認知水平和知識經(jīng)驗為基礎(chǔ)。例如在講授函數(shù)中常量、自變量、變量等函數(shù)關(guān)系時，先給出如下生活實例：（1）公共汽車平均每小時運行60千米，路程s與時間t的關(guān)系。（2）農(nóng)夫賣的黃瓜每斤2元，農(nóng)夫的總收入y與賣出的斤數(shù)x的關(guān)系。（3）平行四邊形面積S與邊長d的關(guān)系。（4）彈簧長度l與所掛重物質(zhì)量m的關(guān)系。這些例子都充分體現(xiàn)了為使學生更好地學習函數(shù)，必須以真實的、生活化的、大量的生活材料為基礎(chǔ)，把學科知識與函數(shù)原理結(jié)合起來，這樣學生就對函數(shù)有了基本概念，以此來進一步掌握函數(shù)原理。2.善于利用函數(shù)圖像引導學生當有一道問題非常抽象難懂時，就迫切需要一個直觀形象作支撐，研究表明：動作思維與形象思維的相互結(jié)合對抽象思維的發(fā)展有著重要作用，使學生理解深刻，所以，可以把師生一起畫圖像的教學方法貫穿始終，學生通過自己畫圖像來領(lǐng)悟函數(shù)關(guān)系式，以及函數(shù)的有關(guān)性質(zhì)，再通過圖像分析、解決問題，這樣，學生才能更深地理解函數(shù)。運用圖像來研究函數(shù)不僅能正確運用可數(shù)形結(jié)合的思想，還把函數(shù)自變量、函數(shù)值的取值范圍形象直觀地展現(xiàn)出來，就以二次函數(shù)圖像與一元二次不等式的關(guān)系為例，可以根據(jù)所給方程先大體畫出二次函數(shù)的草圖，再從圖像中看出不等式的取值范圍例如有如下不等式：（1）x2-5x+6>0（2）x2-5x+6≤0首先，把x2-5x+6>0轉(zhuǎn)化為（x-3）（x-2）>0從這里我們可以看出該不等式是一個關(guān)于x的二次函數(shù)，且該函數(shù)的Δ>0，所以該函數(shù)圖像與x軸有兩個交點，設這兩個交點分別為M、N，兩個交點的坐標分別是M（3，0）；N（2，0）；且由二次項系數(shù)為正可得該函數(shù)圖像拋物線開口向上，所以，圖像在x軸上方的部分即為正值，也就是x2-5x+6>0；相反，圖像在x軸下方的部分即為負值，也就是x2-5x+6≤0的部分，對應的x2-5x+6>0的x取值范圍為：（-∞，2）∪（3，+∞）；則x2-5x+6≤0的取值范圍為[2，3]學生通過畫二次函數(shù)的圖像可以清晰地看出不等式的取值范圍，簡單又形象。所以，教師一定要鍛煉學生畫函數(shù)圖像的能力，養(yǎng)成善于畫圖的好習慣，運用數(shù)形結(jié)合思想解決問題。3.加強對材料的對比分析學生對比同類事物材料，會發(fā)現(xiàn)各種變化事物的同類事物的相似點或本質(zhì)特征，長方體的體積與長方體的邊長的關(guān)系，圓柱的體積與圓柱的高的關(guān)系，雖然是兩個不同的問題，但是他們有一個共同之處，那就是前者是后者的二次函數(shù)。這樣通過對比具有相似特點的不同類事物，學生才會理解不同事物間的差別，這就形成了概念，可見綜合與概括是在分析比較的基礎(chǔ)之上的。4.運用動態(tài)觀點來研究函數(shù)函數(shù)是兩個變量相互依存的關(guān)系，變量會隨著自變量的運動而變化，二者相互影響、相互制約、共同變化，表面靜止的概念間存在著運動的關(guān)系，所以，在函數(shù)教學中，教師要教育學生善于運用聯(lián)系、發(fā)展的數(shù)學理念看問題，在動態(tài)的思維方式中學會函數(shù)知識。例如實際生活中的例子：“一個城市物價的水平隨著當?shù)亟?jīng)濟發(fā)展水平的變化而變化”或者“圓柱體積會隨著其高度的變化而變化”等等，通過這種方式，學生會迅速理解變量之間的關(guān)系，并能在動態(tài)的思維環(huán)境中分析問題，解決問題。初中函數(shù)是一個非常重要的科目，因為函數(shù)是與多個知識項目相關(guān)聯(lián)的知識點，學好它會為以后的知識學習打下基礎(chǔ)，同時函數(shù)與生活密切相關(guān)，學好函數(shù)可以積極利用它解決現(xiàn)實生活中的問題，但是，要想學好函數(shù)，教師必須掌握有效的教學方法，使學生產(chǎn)生學習函數(shù)的興趣，善于運用數(shù)形結(jié)合的方法解決實際問題，充分發(fā)揮函數(shù)的作用。一、培養(yǎng)學生積極的學習心理首先，由于傳統(tǒng)教育思想的影響，很多學生的學習心理都處于比較被動消極的狀態(tài)，這種學習心理造成了學生在日常的學習當中，處于一種被動的接受狀態(tài)，在這種狀態(tài)下，學生對自己的學習、奮斗目標不是很明確。因此，在對學生的學習心理進行培養(yǎng)的過程中，要著重培養(yǎng)和樹立學生積極的學習心理，引導他們要懂得"為什么而學、學習為了什么"，還要在具體的學習當中讓學生自己確立某一階段的學習目標，用學習目標指導他們的行動，在培養(yǎng)學生樹立學生積極的學習心理的過程中，應該注意使學生的學習心理與社會責任聯(lián)系起來，作到某一階段的目標與積極的學習心理培育充分的結(jié)合起來。其次，培養(yǎng)學生積極的學習心理，還要注意對學生學習興趣的培養(yǎng)，對學生來說，學習的興趣是動力，是學習產(chǎn)生熱情的凝集，是學生行為向正確方向發(fā)展的指標。但是從根本來說，學生學習的興趣不是天生的，而是在教師的培養(yǎng)、實踐活動中不斷培養(yǎng)、鍛煉而得來的，因此作為教師而言，應該善于發(fā)現(xiàn)學生感興趣的方面，幫助學生努力培養(yǎng)學生的學習興趣。二、培養(yǎng)學生學習的自信心對一些學生來說，由于學習基礎(chǔ)比較差，所以對學習的自信心明顯存在不足，這種心理的存在給這些學生造成了，學習成績差--學習自信心不足--學習成績更差--自信心更加不足的惡性循環(huán)，所以，對于教師來說，對這部分學生要注重學習自信心的培養(yǎng)，幫助他們總結(jié)學習失敗的原因，使他們盡快的從惡性循環(huán)當中走出來，從根本上來說，學生自信心不足產(chǎn)生的重要原因是他們對短期學習的效果不滿意，而對長期又缺乏耐心所造成的，所以教師應該幫助他們樹立穩(wěn)固學習的信念，告戒他們要戒驕戒躁，要從簡單的、根本的知識著手，穩(wěn)步的、扎實的進行學習，不能急于求成，同時，還要避免他們與其他學生在學習成績方面產(chǎn)生攀比的心理，教師應該盡量把這些學生表現(xiàn)出色的一面展示給他們，比如與上次相比，他們某項成績所取得的進步要讓他們自己進行對比，使他們看到自己學習所取得的成績，告訴他們只要付出努力就會取得學習成績的進步，增加他們對學習的自信心。三、培養(yǎng)學生學習要虛心從一些學習的學習中，我們還可以時常看到這樣一些現(xiàn)象，有些學生學習成績不錯，但因為學習不虛心，平?？荚嚨某煽儾⒉焕硐耄踔劣捎趯W習不虛心而導致學習成績的倒退，對待這種現(xiàn)象，教師要對學生從心態(tài)上予以教育，讓他們從根本上樹立"虛心使人進步，驕傲使人落后"的思想，要讓他們在學習上樹立學習態(tài)度認真，不浮躁的心理，比如教師可以適當?shù)膶⑺麄兛荚囍谐霈F(xiàn)的、比較容易的一些試題給他們看，讓他們從中找出考試出現(xiàn)失誤的原因，讓他們充分認識到，有些知識不是他們自己不會，不是他們自己沒有掌握，而是由于缺乏虛心的態(tài)度而造成的。同時，教師也可以通過讓同學之間通過互相學習的方法，讓學生知道學習要虛心，通過學生之間的相互學習，不僅僅可以彌補學生相互之間的不足，更能使他們充分懂得"三人行，必有我?guī)?的道理，樹立虛心學習的態(tài)度。四、培養(yǎng)學生學習的平常心很多學生對自己的學習成績很看中，特別是每次考試之后，學生對自己在班級甚至在學校的排名都非常在意，從一定程度上來說，這種現(xiàn)象有利于激發(fā)學生的學習熱情，在學生之中形成追、趕、超的學習氛圍，但也應該看到，這種現(xiàn)象不利于學生學習平常心的培養(yǎng)，使學生的學習心態(tài)趨向于一種扭曲，比如在這種心態(tài)下，學生把考試、升學看得過于重大，只片面的強調(diào)知識對自身的重要性，而對其他應具備的素質(zhì)視而不見，以至于使自己的價值觀、人生觀發(fā)生了很大的變化。從長期來看，這種心態(tài)是與素質(zhì)教育不相符合的。因此，在學生學習平常心的培養(yǎng)方面，教師要不斷的進行加強，教師要讓學生從根本上端正自己的學習動機，使他們充分認識到學習只是對知識的不斷積累、對自身素質(zhì)的不斷完善，但就學習成績而言，它并不能代表求學的全部，對于學生來說，即使沒有取得繼續(xù)深造的機會，但還可以通過其他途徑比如自學考試等方式來完成自己的成材之路。總之，在素質(zhì)教育推行的過程中，學生健康的學習心理培養(yǎng)將成為越來越受到重視，對學生健康學習心理的培養(yǎng)不僅僅是我國全面實施素質(zhì)教育的一個重要課題，更是解決目前學生學習存在弊端的重要突破口，因此，教師在對學生進行健康的學習心理培養(yǎng)的過程中，不但要從長期的、實行素質(zhì)教育的任務目標進行著手，更應該從具體的、實際的情況出發(fā)，使每一種健康學習心理的培育都能夠達到實際的效果。第七章親和層析般用于純化蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)的方法的主要依據(jù)是各種大分子物質(zhì)之間理化特性的差異性XNY缺點由于這種差異性較小,因此要得到一種純度稍高的物質(zhì),常常需要繁瑣的操作,經(jīng)歷較長的時間,但最終收得率卻甚低◆1967年Axen等用溴化氰活化多糖凝膠偶聯(lián)肽和蛋白質(zhì)的方法,并成功地制備了固定化酶。Y這種利用大分子物質(zhì)具有的特異的生物學性質(zhì)進行純化的方法,于20世紀70年代就有了驚人的發(fā)展,并逐步得到了廣泛的應用。這使酶類等大分子物質(zhì)的純化過程變得較簡單、迅速和高效(見表7-1)表7-1親和層析純化人血清中a-抗胰蛋白酶步驟總活性比活性回收率%純化倍數(shù)硫酸銨分級°DEAE-Sephadex01ConA-Sepharose16,6抑制蛋白酶的四數(shù);抑制蛋白酶的馮數(shù)/A-吸收值;含有0.5g蛋白質(zhì)相當于10ml血清;和收集最高峰的活性部分。第一節(jié)基本原理◆M-L-S復合物欲分離的大分子物質(zhì)S與相對應的專一物質(zhì)L(配體)以次級鍵結(jié)合(親和能生成一種可解離的絡合物LS,其中的L又能與活化的基質(zhì)M以共價鍵首先結(jié)合,Y而形成ML復合物。人·親和吸附劑配體L以共價的方式固化到含有活化基團的基質(zhì)M上,制成親和吸附劑ML,或者叫做固相載體親和層析法根據(jù)LS之間能可逆地結(jié)合與解離的原理發(fā)展起來的層析方法,稱為親和層析法affinitychromatography)o親和層析的原理(見圖7-1)每對反應物之間都有一定的親和力正如在酶與底物的反應中,特異的底物S)才能和一定的酶(E)結(jié)合,產(chǎn)生3復合物(ES)樣在親和層析中是特異的配體j+8才能和一定的生命大分子之間具有親和力,圖71親和層析的原理示意圖并產(chǎn)生復合物1.酶與底物反應產(chǎn)生酶底復合物;2.活性基質(zhì)與配體結(jié)合產(chǎn)生親和吸附劑3.親和吸附劑與樣品中有效成分(S)結(jié)合產(chǎn)生偶聯(lián)復合物和未結(jié)合的物質(zhì)(雜質(zhì))4.偶聯(lián)復合物經(jīng)解離后,得到純有效成分(S)層析分離過程:樣品過柱時,樣品中對配體有親和力的物質(zhì)S就可借助靜電引力、范德瓦爾力,以及結(jié)構(gòu)互補效應等作用吸附到固相載體上無親和力或非特異吸附的物質(zhì)則被起始緩沖液洗滌出來,并形成了第一個層析峰;然后,恰當?shù)馗淖兤鹗季彌_液的pH值、或增加離子強度、或加入抑制劑等因子,即可把物質(zhì)S從固相載體上解離下來,并形成了第二個層析峰(見圖7-2B)。0.Imol/L酸鹽pH10t29x=A=6FB0.1molL姍酸鹽p10圖7-2E,coli提取液在Sepharose4B(A)和對氨基苯-P-D-硫代吡喃半乳糖苷-Sepharose.柱(B)的層析l對氨基苯-p-D-硫代吡喃半乳糖苷是阝半乳糖苷酶底物的類似物。柱平衡液為0.05ml/LTes-lCI緩沖液,pH.5;洗脫液為0.1mol/L硼酸鈉鹽溶液,pH105;抽提液20ml加在1.5cm×22cm柱上,23℃,流速80m/h,每管收集0.8ml;B圖中左和右柱狀圖分別為A圖中第40管和B圖中第95管收集液的PAC圖譜如果樣品液中存在兩個以上的物質(zhì)與固相載體具有親和力(其大小有差異)時,刂采用選擇性緩沖液進行洗脫,也可以將它們分離開。使用過的固相載體經(jīng)再生處理后,可以重復使用?！羯厦娼榻B的親和層析法亦稱特異性配體親和層析法配體,一般為復雜的生命大分子物質(zhì)(如抗體、受體和酶的類似底物等),它具有較強的吸附選擇性和較大的結(jié)合