南昌大學(xué)基因工程雙語教學(xué)課件

Basicbiologyofplasmidandphagevectors載體(vector)LOGOo目的基因進(jìn)入原核或真核細(xì)胞并高效復(fù)制和表達(dá)蛋白質(zhì),需要裝入載體才能實(shí)現(xiàn)。作為基因工程載體所需具備的基本條件1能自我復(fù)制,并具一定的拷貝數(shù)2帶有便于檢測(cè)的遺傳標(biāo)記,便于篩選和鑒定。3在適當(dāng)?shù)奈恢糜袉蚊盖形稽c(diǎn),便于重組操作。4帶有強(qiáng)啟動(dòng)子,驅(qū)動(dòng)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)。5、具有較高的遺傳穩(wěn)定性基因工程載體的種類和用途依據(jù)基本組成元件的來源分LOGO1細(xì)菌質(zhì)粒:最常用的用于目的基因克隆或表達(dá)的載體。2酵母質(zhì)粒:用于在酵母中表達(dá)目的蛋白。3噬菌體:主要用于構(gòu)建基因組DNA或cDNA文庫4.粘粒用于克隆大片段DNA。5.M13噬菌體:專用于Sanger雙脫氧DNA測(cè)序6病毒包括人或哺乳動(dòng)物病毒、昆蟲病毒及植物病毒。用于在真核細(xì)胞中表達(dá)目的蛋白7、人工染色體載體LOGOo依據(jù)功能分:克隆載體:用于在宿主細(xì)胞中克隆和擴(kuò)增外源片段2、表達(dá)載體:用于在宿主細(xì)胞中獲得外源基因的表達(dá)產(chǎn)物。LOGO質(zhì)粒載體的一般特征BasicbiologyofplasmidLOGO◎發(fā)現(xiàn):細(xì)菌,偶見于鏈霉菌和酵母◎獨(dú)立于染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳,又依賴于宿主編碼的酶和蛋白質(zhì)來進(jìn)行復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。o比病毒還簡(jiǎn)單的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),一旦離開寄主細(xì)胞則無法繁殖。結(jié)構(gòu)特征LOGOo大多數(shù)質(zhì)粒是以雙鏈環(huán)狀DNA分子的形式存在的、共價(jià)閉環(huán)DNA(CccDNA):可分為超螺旋的和松弛的兩種2、開環(huán)DNA(OCDNA)LOGO分子量:小于1×10到大于200×10都有質(zhì)粒與染色體的不同1、離心:密度不同2、agarose電泳:分子量大小3、電鏡觀察:1umdSDNA=3000bp4、再轉(zhuǎn)化LOGObacteriumplasmidBacterialchromos表型效應(yīng)致育性LOGOF因子(ertilityfactor):是在某些大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的一種最有代表性的接合型質(zhì)粒。是雄性決定因子有三種存在方式:F+、F、線性形式接合作用(conjugation):在合適的條件下,將雄性細(xì)胞和雌性細(xì)胞混合培養(yǎng),由于性須的作用,形成雌雄細(xì)胞配對(duì)的過程叫細(xì)菌的接合作用。質(zhì)粒分為接合型(