真菌檢驗(yàn)技術(shù)-真菌的形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)（微生物檢驗(yàn)課件）

真菌的常規(guī)檢驗(yàn)法實(shí)驗(yàn)室檢查：標(biāo)本采集分離培養(yǎng)直接鏡檢生化反應(yīng)染色鏡檢免疫學(xué)試驗(yàn)以直接鏡檢和分離培養(yǎng)最重要。一、臨床標(biāo)本的采集

1．皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)：毛發(fā)、指(趾)甲、皮屑等。

2．各種分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、糞便、尿液等。

3．血液和體液：體液包括胸水、腹水、腦脊液、淋巴穿刺液等。

4．膿汁及滲出物。

1.采集的標(biāo)本要適宜

不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨床標(biāo)本。

2.在用藥前采集標(biāo)本

一般真菌標(biāo)本須在用藥前采集，對(duì)已用藥者則需停藥一段時(shí)間后再采集標(biāo)本。二、采集標(biāo)本注意事項(xiàng)

3.采集的標(biāo)本量要足血液和腦脊液標(biāo)本5ml，胸腔液20ml，皮屑標(biāo)本兩塊，活體組織兩份(一份送病理科檢查，一份作鏡檢和培養(yǎng))。4.嚴(yán)格無菌操作并進(jìn)行消毒處理，尤其是采集血液和腦脊液標(biāo)本，要避免污染雜菌。5.采集標(biāo)本立即送檢深部真菌標(biāo)本最長(zhǎng)不得超過2h。（一)直接鏡檢直接鏡檢對(duì)真菌病的診斷較細(xì)菌更為重要。許多真菌標(biāo)本不需染色即可直接鏡檢，如癬病標(biāo)本多用KOH濕片檢查法，即取病發(fā)或病損部位皮屑、甲屑置于載玻片上，加1滴10％-20％KOH液，然后加蓋玻片并微微加熱，使標(biāo)本組織溶解透明，在顯微鏡下可觀察到真菌的孢子和菌絲。

三、標(biāo)本直接檢查

常用的封固液：①KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的材料（如毛發(fā)、指甲、鱗屑等）。②墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌（如新型隱球菌等）。③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力較強(qiáng)，只限于不透明的標(biāo)本。④生理鹽水：為觀察真菌的出芽現(xiàn)象可用生理鹽水代替氫氧化鉀溶液。（二）染色標(biāo)本檢查：1、革蘭氏染色：各種真菌均為革蘭氏陽性，為深藍(lán)色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子絲菌、諾卡菌及組織胞漿菌等。2、乳酸酚棉藍(lán)染色3、糖原染色：菌體均染成紅色。用于標(biāo)本直接涂片及組織病理切片染色。4、嗜銀染色（GMS）：染成黑色。

5、墨汁染色：主要用于新型隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細(xì)胞壁呈紅色，細(xì)胞核呈黑色。6、熒光染色：主要使用吖啶橙和氫氧化鉀來染直接涂片、培養(yǎng)涂片及組織切片。

新型隱球菌直接鏡檢的意義直接鏡檢陽性表示：①有診斷意義，如淺部真菌病等；②看到的就是真菌的形態(tài)，可確定某些致病性真菌的屬或種,如假絲酵母菌的厚膜孢子等；③判斷某些真菌種的致病性等,如皮膚癬菌、曲霉等。直接鏡檢