免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-抗原抗體反應(yīng)

知識(shí)目標(biāo)掌握：抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)（重難點(diǎn)）。熟悉：影響抗原抗體反應(yīng)因素（難點(diǎn)）。了解：抗原抗體反應(yīng)原理（難點(diǎn)）、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識(shí)等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素。抗原抗體反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)二三四目錄一抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型抗原抗體在體內(nèi)體外能發(fā)生特異性結(jié)合。由于抗原理化性狀和抗體類型不同，抗原抗體結(jié)合后表現(xiàn)出不同的反應(yīng)類型，可用于疾病的診斷、病原鑒定、藥物分析等檢測(cè)。如何利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)準(zhǔn)確的進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)是一個(gè)重要內(nèi)容。前言基本概念抗原抗體反應(yīng)

抗原與抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)的原理和物質(zhì)基礎(chǔ):抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合在極短距離內(nèi)才能發(fā)生一抗原抗體反應(yīng)原理一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力：又稱庫(kù)倫引力指帶電離子基團(tuán)（如：—NH3+和COO-）之間的引力，距離越近引力越大。范德華引力：

原子與原子、分子與分子相互接近時(shí)分子極化作用發(fā)生的一種吸引力，其決定分子空間構(gòu)型。能量小于靜電引力。氫鍵：由分子中H原子與電負(fù)性大的O和N原子等相互作用形成的引力，結(jié)合力較范德華力強(qiáng)，因?yàn)樾枰軞潴w和供氫體之間的互補(bǔ)形成氫鍵，因此更具有特異性。疏水作用：疏水集團(tuán)相互排斥水分子而趨于聚集的力。作用力最強(qiáng)，占總結(jié)合力的50%。

二、抗原抗體親和力和合力親和力(affinity)抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間的結(jié)合強(qiáng)度，用平衡常數(shù)K值表示，K值越高抗原抗體結(jié)合越牢固親合力(avidity)

一個(gè)完整的抗體結(jié)合部位與若干個(gè)抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度。三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體形成可見(jiàn)抗原抗體反應(yīng)抗原/抗體結(jié)合水化層變薄，失去親水性電解質(zhì)中和膠體粒子表面電荷，使各疏水膠體進(jìn)一步靠攏疏水膠體知識(shí)目標(biāo)掌握：抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)（重難點(diǎn)）。熟悉：影響抗原抗體反應(yīng)因素（難點(diǎn)）。了解：抗原抗體反應(yīng)原理（難點(diǎn)）、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識(shí)等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素?？乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理二抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型二抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)

特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性。分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性。交叉反應(yīng)：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。缺點(diǎn)：影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性優(yōu)點(diǎn)：協(xié)助檢測(cè)一、特異性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性（非共價(jià)鍵結(jié)合）影響因素：抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力：親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離。環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響：pH（破壞離子間的靜電引力）、離子強(qiáng)度（破壞離子間的靜電引力）二、可逆性前帶(prezone)：抗體過(guò)量后帶(postzone)：抗原過(guò)量等價(jià)帶(equivalencezone)：抗原抗體比例合適三、比例性

免疫學(xué)檢測(cè)時(shí)，由于帶現(xiàn)象的干擾，導(dǎo)致假陰性結(jié)果?？贵w的兩個(gè)Fab段分別結(jié)合兩個(gè)Ag分子，相互交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚合物，（可見(jiàn)）。二者比例合適過(guò)剩方的結(jié)合價(jià)得不到飽和，大多數(shù)游離存在，只形成小分子復(fù)合物（不可見(jiàn)）。由此可知：確定

的濃度非常重要，即在實(shí)驗(yàn)中需對(duì)Ag/Ab進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/p>

，調(diào)整二者的比例，產(chǎn)生可見(jiàn)反應(yīng)。

一般原則：固定

含量（Ag/Ab）的濃度，稀釋

含量的(Ab/Ag)。

一般可溶性Ag稀釋

，顆粒性Ag，稀釋

。Ag/Ab稀釋低高AgAb第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見(jiàn)（數(shù)秒或數(shù)分鐘內(nèi)完成）。第二階段：反應(yīng)可見(jiàn)階段，反應(yīng)慢（數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)或數(shù)日）），出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象。受電解質(zhì)、溫度和酸堿度影響。四、階段性知識(shí)目標(biāo)掌握：抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)（重難點(diǎn)）。熟悉：影響抗原抗體反應(yīng)因素（難點(diǎn)）。了解：抗原抗體反應(yīng)原理（難點(diǎn)）、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識(shí)等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素。抗原抗體反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一二三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型三抗原抗體反應(yīng)的影響因素一、自身因素抗原：抗體來(lái)源：

驢和馬免疫血清：等價(jià)帶較窄（H型抗體）兔：等價(jià)帶較寬（R型抗體）

濃度：比例合適出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)親合力

可溶性抗原＋相應(yīng)抗體→沉淀顆粒性抗原＋相應(yīng)抗體→凝集單價(jià)抗原－－不凝集或沉淀二、環(huán)境因素知識(shí)目標(biāo)掌握：抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)（重難點(diǎn)）。熟悉：影響抗原抗體反應(yīng)因素（難點(diǎn)）。了解：抗原抗體反應(yīng)原理（難點(diǎn)）、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識(shí)等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素?？乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一二三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型四抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上抗原-抗體反應(yīng)的類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)