各類化學(xué)成分的提取、分離與檢識技術(shù)-黃酮類（中藥化學(xué)課件）

中藥化學(xué)技術(shù)黃酮類化合物-理化性質(zhì)理化性質(zhì)酸堿性性狀溶解性交叉共軛體系交叉共軛體系1.性狀

多為結(jié)晶性固體，少數(shù)為無定形粉末多呈黃色，且顏色與分子中的交叉共軛體系(發(fā)色團(tuán))及助色團(tuán)有關(guān)黃酮苷均有旋光性，且多為左旋。游離黃酮若C環(huán)有手性碳則具旋光性。在紫外光燈下普遍具有熒光性狀交叉共軛體系的存在:能形成交叉共軛體系的黃酮類化合物，常有明顯的黃色，并且共軛程度大小、共軛鏈的長短決定了顏色的深淺。黃酮本身其色原酮部分并無顏色，但當(dāng)2位引入苯基后，即形成交叉共軛體系，且能通過電子的轉(zhuǎn)移和重排使共軛鏈連續(xù)地延長，而呈現(xiàn)出顏色。助色團(tuán)對顏色的影響：

助色團(tuán)（-OH、-OCH3等）能使顏色加深，但主要指助色團(tuán)處于7或4′位時，由于能形成p-π共軛，可促使電子的轉(zhuǎn)移和重排而形成交叉共軛體系，從而使顏色明顯加深，但-OH、-OCH3引入其他位置時，對顏色的影響較小。有顏色交叉共軛體系無顏色游離黃酮一般難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中?；ㄉ疹愐噪x子形式存在，水溶度較大。黃酮苷

黃酮苷的水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于熱水、甲醇、乙醇、吡啶及稀堿溶液中，而難溶于乙醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑。

溶解性

水甲醇乙醇乙酸乙酯氯仿乙醚稀堿++++---+★黃酮類化合物溶解性（極性）規(guī)律:

三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元3-O-糖苷>7-O-糖苷（平面性分子）花色素(平面性分子,離子型)>非平面性分子>平面性分子★黃酮苷(親水性)

7，4′-2OH＞7-或4′-OH＞一般酚羥基>5-OH

7，4′-2OH者，由于P-π共軛效應(yīng)，使酸性增強(qiáng)而溶于碳酸氫鈉水溶液。

7-或4′-OH者，只溶于碳酸鈉水溶液，不溶于碳酸氫鈉水溶液。具有一般酚羥基者只溶于氫氧化鈉水溶液。僅有5-OH者，因可與C4=O形成分子內(nèi)氫鍵，故酸性最弱。因此，可用pH梯度萃取法來分離黃酮類化合物。

酸性:黃酮類化合物因分子中具有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶和甲酰胺等中。其酸性強(qiáng)弱與酚羥基數(shù)目的多少和位置有關(guān)。酸堿性3.酸堿性堿性:因母核中γ-吡喃酮環(huán)上的1位氧原子有未共用電子對，故表現(xiàn)出微弱的堿性?？扇苡跐饬蛩帷恹}酸等強(qiáng)無機(jī)酸生成鹽，該鹽極不穩(wěn)定，加水后即分解。中藥化學(xué)技術(shù)黃酮類化合物-提取與分離提取與分離技術(shù)提取

分離pH梯度萃取法溶劑萃取法柱色譜法HPLC色譜法溶劑提取法

溶劑法關(guān)鍵溶劑的選擇選擇依據(jù)黃酮類成分的存在狀態(tài)（游離、苷）及溶解性

溶劑的溶解性能

提取方法（煎煮法、滲漉法、回流法等）的選擇

溶劑提取原理游離黃酮黃酮苷備注

乙醇溶解范圍廣++（甲醇）苷、苷元均可溶（90~95%）(60%）甲醇毒性大沸水多糖苷溶于水+成本低、安全,水溶性雜質(zhì)多

堿水或稀氫氧化鈉溶出能力強(qiáng)

堿性乙醇酚羥基的酸性 ++石灰水除雜質(zhì)效果好1.提取方法—溶劑法依據(jù)成分之間的極性（分配系數(shù)K）差異。依據(jù)游離黃酮類化合物的酸性差異。常用聚酰胺和硅膠色譜。依據(jù)成分與吸附劑形成的作用力不同。溶劑萃取法pH梯度萃取法柱色譜法

常用反相HPLC色譜固定相：ODS流動相：水-乙腈不同比例。HPLC色譜2.分離方法中藥化學(xué)技術(shù)黃酮類化合物-檢識技術(shù)檢識技術(shù)

反應(yīng)類型鑒別特征鑒別意義備注鹽酸-鎂粉黃酮、二氫黃酮紅～紫紅黃酮類特征性假陽性反應(yīng)黃酮醇、二氫黃酮醇紅～紫紅鑒別反應(yīng)（花色素）查耳酮、橙酮（-）兒茶素類、異黃酮（-）

四氫硼鈉二氫黃酮、二氫黃酮醇紅～紫紅二氫黃酮（醇）類特有反應(yīng)其它黃酮類（－）

1.還原反應(yīng)反應(yīng)類型鑒別特征及鑒別意義備注

鋯鹽枸櫞酸

鋯鹽-枸櫞酸

3-OH或5-二OH黃色黃色不褪

PC黃色褪去氨性氯化鍶(SrCl2)鄰二酚羥基綠、棕乃至黑色三氯化鐵(FeCl3)酚羥基紫、藍(lán)、綠三氯化鋁3-OH，4-C=O黃色（AlCl3）5-OH，4-C=O鮮黃色熒光PC\TLC

鄰二酚羥基（4’或7，4’黃酮醇，天藍(lán)色熒光）2.金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)中藥化學(xué)技術(shù)黃酮類化合物槐花米為豆科植物槐（SophorajaponicaL.）的花蕾。其主要有效成分為蕓香苷（蘆?。?。查閱蕓香苷的理化性質(zhì)。任務(wù)導(dǎo)入槐米主要有效成分為蕓香苷（又稱蘆?。?，有維生素P樣作用，能保持和恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性，臨床上常作為治療高血壓的輔助藥和毛細(xì)血管脆性所致出血的止血藥?；泵椎闹饕行С煞质|香苷（蘆?。辄S酮類化合物。蕓香苷又稱蘆丁，其苷元為槲皮素它們的結(jié)構(gòu)式如下：

蕓香苷

淺黃色粉末或細(xì)針晶，在冷水中溶解度為1：8000，熱水為1：200，冷乙醇為1：650，熱乙醇為1：60，可溶于吡啶及堿性溶液，幾乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚中。槲皮素黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇），溶于乙醇、甲醇、、丙酮、乙酸乙酯、吡啶與堿性溶液等，不溶于水、苯、石油醚、乙醚與氯仿等。以槐米為藥材，設(shè)計(jì)其有效成分蕓香苷的提取分離工藝對蕓香苷進(jìn)行酸水解，分離得到其水解產(chǎn)物槲皮素選擇合適的方法對提取產(chǎn)物蕓香苷和槲皮素進(jìn)行化學(xué)和色譜鑒別實(shí)訓(xùn)操作

方法一：槐米中蕓香苷的提取分離槐米粗粉濾液藥渣石灰乳調(diào)Ph8-9，煮沸20min，紗布過濾放冷，濃鹽酸調(diào)pH3-4，析晶，濾過濾液沉淀蕓香苷粗品室溫晾干

方法二：槐米中蕓香苷的提取分離1.提取前應(yīng)將槐米略搗碎，使蕓香苷易于被熱水溶出2.如用堿溶酸沉法提取，加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的目的，又可除去槐米中所含大量粘液質(zhì)，但應(yīng)嚴(yán)格控制堿性，不可超過pH10。3.提取過程中，可加入硼砂保護(hù)鄰二酚羥基不被氧化破壞，又可避免鄰二酚羥基與鈣離子絡(luò)合。實(shí)訓(xùn)要點(diǎn)選擇合適的溶劑加熱溶解趁熱過濾放冷析晶結(jié)晶法操作步驟知識鏈接抽濾裝置—布氏漏斗蕓香苷粗品濾液殘?jiān)麴s水煮沸溶解，趁熱抽濾靜置析晶，抽濾濾液結(jié)晶精制蕓香苷室溫晾干精制方法參考蕓香甘的溶解需要加熱溶解加熱溶解后的過濾需要趁熱過濾放冷析晶以自然放冷析晶效果最好乙醇也可作為結(jié)晶溶劑，但就成本來講不及水提取的成本低。實(shí)訓(xùn)要點(diǎn)蕓香苷的水解濾液沉淀加2%硫酸加熱回流，至沉淀不再增加為止氫氧化鋇中和，過濾硫酸鋇沉淀濾液糖供試品濃縮，乙醇溶解精制蕓香苷槲皮素蕓香苷與槲皮素的檢識反應(yīng)Molish反應(yīng)鹽酸