免疫學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)點(diǎn)

第一章概論免疫學(xué)是研究免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能，并通過(guò)對(duì)其在免疫應(yīng)答過(guò)程中所產(chǎn)生的免疫保護(hù)與免疫損傷機(jī)制的研究，探討有效的免疫措施，實(shí)現(xiàn)以防病、治病為目的的一門(mén)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)學(xué)科。免疫學(xué)技術(shù)對(duì)推動(dòng)免疫學(xué)的發(fā)展及基礎(chǔ)與臨床免疫學(xué)的結(jié)合起了重要作用。學(xué)習(xí)免疫學(xué)的基本概念，了解臨床免疫學(xué)的理論基礎(chǔ)，掌握免疫技術(shù)的檢測(cè)原理是學(xué)習(xí)和研究臨床免疫學(xué)與免疫技術(shù)的重要保障。第一節(jié)免疫學(xué)簡(jiǎn)介免疫（）是機(jī)體識(shí)別和排斥抗原性異物的一種生理功能。免疫系統(tǒng)與機(jī)體的其他系統(tǒng)相互配合，相互制約，共同維持機(jī)體在生命過(guò)程中的生理平衡。一、免疫學(xué)概念與免疫應(yīng)答宿主體內(nèi)的免疫系統(tǒng)能識(shí)別并清除從外環(huán)境中侵入的病原生物及其產(chǎn)生的毒素、內(nèi)環(huán)境中因基因突變產(chǎn)生的腫瘤細(xì)胞、自身衰老殘損的組織細(xì)胞或自身變性抗原，實(shí)現(xiàn)免疫防御、免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)視。免疫防御一一指機(jī)體排斥外源性異物的能力。免疫自穩(wěn)一一指機(jī)體識(shí)別和清除自身衰變殘損的組織細(xì)胞的能力，以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。免疫監(jiān)視一一指機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞的能力，以監(jiān)視和抑制惡性腫瘤在體內(nèi)生長(zhǎng)。免疫應(yīng)答反應(yīng)（）：是指機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應(yīng)，并以排出或分解該抗原為目的的反應(yīng)過(guò)程。免疫應(yīng)答的過(guò)程主要分為：識(shí)別階段（）一一抗原識(shí)別處理傳遞信息活化階段（）一一免疫細(xì)胞活化增殖產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞、分子效應(yīng)階段（）一一執(zhí)行效應(yīng)功能免疫應(yīng)答效應(yīng)大多為生理性，是機(jī)體對(duì)外來(lái)抗原或自身變性抗原的清除效應(yīng)。免疫應(yīng)答反應(yīng)過(guò)強(qiáng)時(shí)，可致機(jī)體組織或器官發(fā)生病理?yè)p傷，出現(xiàn)臨床疾病。功能名稱(chēng)生理功能病理表現(xiàn)免疫防御清除病原微生物及其它抗原性異物超敏反應(yīng)（強(qiáng)）免疫缺陷病（弱）免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老細(xì)胞自身免疫性疾病免疫監(jiān)視清除突變或畸變細(xì)胞，防止腫瘤發(fā)生、殺傷病毒感染細(xì)胞腫瘤或病毒持續(xù)性感染、免疫組織與器官免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成。淋巴組織及免疫細(xì)胞分布于機(jī)體全身，執(zhí)行免疫防衛(wèi)功能，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境正常的生理功能及動(dòng)態(tài)平衡。免疫器官按功能不同，分為中樞免疫器官和外周免疫器官。中樞免疫器官是免疫細(xì)胞產(chǎn)生、分化和成熟的場(chǎng)所。外周免疫器官是免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)及淋巴循環(huán)，進(jìn)出于外周淋巴組織及淋巴器官，形成機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)免疫網(wǎng)絡(luò)，免疫細(xì)胞能及時(shí)到達(dá)機(jī)體各臟器及皮膚粘膜的病原微生物入侵部位，又能將機(jī)體各部位的抗原成分經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞攜帶至相應(yīng)淋巴組織及淋巴器官，活化淋巴細(xì)胞與淋巴細(xì)胞，執(zhí)行特異性免疫應(yīng)答功能。（一）中樞淋巴器官：骨髓（）是造血干細(xì)胞生成、分化發(fā)育的場(chǎng)所；（）是功能性細(xì)胞分化成熟的唯一場(chǎng)所；（）提供各種免疫細(xì)胞的前體細(xì)胞；細(xì)胞分化成熟的場(chǎng)所胸腺細(xì)胞分化成熟的場(chǎng)所（二）外周淋巴器官：淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān)淋巴組織（扁桃體、闌尾等）（三）淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢淋巴細(xì)胞在全身器官組織及體液中的循環(huán)，可擴(kuò)大與病原異物抗原接觸的機(jī)遇，并將被抗原激活的淋巴細(xì)胞引流入局部淋巴組織及器官，在細(xì)胞、細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞間發(fā)揮協(xié)同的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的效應(yīng)淋巴細(xì)胞定向地遷移于病原異物部位，發(fā)揮免疫效應(yīng)功能。外周免疫器官及外周淋巴組織既是淋巴細(xì)胞再循環(huán)的起點(diǎn)和中途站，也是淋巴細(xì)胞歸巢的終點(diǎn)。淋巴細(xì)胞在發(fā)揮免疫效應(yīng)的同時(shí)，被歸巢受體引導(dǎo)回該類(lèi)細(xì)胞的原定居處，進(jìn)行修整、增殖和發(fā)育，以提高該類(lèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，這是保證淋巴細(xì)胞功能健全的重要環(huán)節(jié)。三、免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞：凡參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為免疫細(xì)胞，按免疫細(xì)胞在體內(nèi)的作用不同分為三大類(lèi)。淋巴細(xì)胞一一細(xì)胞、細(xì)胞、細(xì)胞（能增殖分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)）免疫輔助細(xì)胞一一吞噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞（）（參與輔助淋巴細(xì)胞的活化）免疫應(yīng)答細(xì)胞一一中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞（參與免疫應(yīng)答的某一環(huán)節(jié)）不同淋巴細(xì)胞及功能T細(xì)胞翊胞NK細(xì)胞主要功能抗原識(shí)別抗原識(shí)別細(xì)胞毒性細(xì)胞免疫體液免疫免疫監(jiān)視免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)分布外周血液70%?75%10%?15%<10%淋巴結(jié)70%?75%20%?25%很少脾臟30%?50%50%?65%W5%四、免疫分子免疫分子是由一些免疫活性細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)及小分子多肽物質(zhì)組成，它們參與機(jī)體的免疫反應(yīng)或免疫調(diào)節(jié)。主要的免疫分子：免疫球蛋白（）、補(bǔ)體系統(tǒng)（）、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子（）、白細(xì)胞分化抗原（）第二節(jié)臨床免疫學(xué)臨床免疫學(xué)是將免疫學(xué)基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學(xué)疾病與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機(jī)制、診斷與鑒別診斷、評(píng)價(jià)治療效果和判斷愈后的多個(gè)分支學(xué)科的總稱(chēng)。第三節(jié)臨床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn)免疫學(xué)檢驗(yàn)（）是研究免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的重要學(xué)科。免疫檢驗(yàn)涉及的主要技術(shù)患放射免疫技術(shù)<化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)患熒光免疫技術(shù)率流式細(xì)胞免疫技術(shù)速酶聯(lián)免疫技術(shù)<免疫印跡技術(shù)器速率散射免疫技術(shù)等單克隆抗體技術(shù)第二章抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。物質(zhì)基礎(chǔ)①抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合②抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合③抗原抗體之間的結(jié)合力④親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體抗原抗體結(jié)合力：靜電引力、范德華引力作用最小、氫鍵最具特異性、疏水作用力作用最大。親和力：抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力。親合力d抗體結(jié)合部位與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度。親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體：抗原+抗體＞抗原抗體復(fù)合誕暨可見(jiàn)反應(yīng)（親水膠體親水膠體）（疏水膠體）抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：⑴特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專(zhuān)一性，分子基礎(chǔ)一一抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性⑵可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性，影響因素：①抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力一親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離；②環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響一、離子強(qiáng)度。⑶比例性：抗原與抗體發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系，前帶z抗體過(guò)量后帶：抗原過(guò)量等價(jià)帶：抗原抗體比例合適⑷階段性：第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見(jiàn)第二階段：反應(yīng)可見(jiàn)階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象。交叉反應(yīng)（）:兩種不同的抗原分子具有部分相同或類(lèi)似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。影響抗原抗體反應(yīng)的因素：⑴抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素：①抗原理化性狀、表位種類(lèi)和數(shù)目②抗體來(lái)源、特異性、親和性、效價(jià)⑵環(huán)境因素：①電解質(zhì)生理鹽水或緩沖液②酸堿度?③溫度1?0,7最適標(biāo)記免疫技術(shù)：用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記物對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量分析⑴按實(shí)際用途分為①免疫組織化學(xué)技術(shù)②免疫測(cè)定⑵按測(cè)定反應(yīng)體系的物理狀態(tài)分為①均相免疫測(cè)定）②非均相免疫測(cè)定

⑶按檢測(cè)現(xiàn)象分為①放射免疫技術(shù)②熒光免疫技術(shù)③酶免疫技術(shù)④化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)⑤金免疫技術(shù)第四節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的類(lèi)型反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察蠲案現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀第三章免疫原和抗血清的制備第一節(jié)免疫原的制備免疫原是能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體并能與抗體發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)。類(lèi)型：①顆粒性抗原一細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)②可溶性抗原一蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸顆粒性抗原的制備細(xì)胞抗原：綿羊紅細(xì)胞細(xì)菌抗原：菌體抗原、鞭毛抗原寄生蟲(chóng)體抗原：蟲(chóng)卵可溶性抗原的制備和純化⑴可溶性抗原的制備①組織細(xì)胞抗原的制備：高速搗碎法一組織搗碎機(jī)搗碎研磨法一用玻璃勻漿器或乳缽研磨②組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備：反復(fù)凍融法一℃凍結(jié)，然后室溫融化超聲破碎法一超聲波（?）自溶法一自身酶系酶處理法一溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶表面活性劑處理法一、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴⑵免疫球蛋白片段的制備：非共價(jià)鍵解離法一改變、利用強(qiáng)變性劑共價(jià)鍵解離法一氧化法和還原法溴化氰裂解法酶解法一木瓜酶、胃蛋白酶可溶性抗原的純化⑴超速離心法：差速離心法一低速和高速離心交替進(jìn)行密度梯度離心法一區(qū)帶離心法⑵選擇性沉淀法：核酸去除法一氯化錳、硫酸魚(yú)精蛋、鏈霉素鹽析法一硫酸銨、硫酸鈉有機(jī)溶劑沉淀法一乙醇、丙酮聚合物沉淀法一聚乙二醇⑶凝膠過(guò)濾法：利用凝膠的分子篩作用，對(duì)分子量不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離⑷離子交換層析法：利用蛋白質(zhì)帶電荷不同進(jìn)行分離⑸離子交換劑：離子交換纖維素、離子交換凝膠、離子交換樹(shù)脂親和層析法：利用生物大分子之間具有的專(zhuān)一性親和力親和層析支持物的選擇：①非特異性吸附低；②液體流速快；③在各種和高濃度鹽溶液中穩(wěn)定；④有合適豐富的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)或其它化合物結(jié)合；⑤有豐富的微孔，以增加結(jié)合容量。最常用的支持物是配體的選擇條件：①抗原或抗體必須單一特異性；②抗原與抗體必須具有較高的親和力；③配體必須有一個(gè)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團(tuán)。抗原或抗體與支持物的結(jié)合：①活化：溴化氰；②接“手臂”：帶“手臂”瓊脂糖有氨基瓊脂糖、羧基瓊脂糖、溴乙酰瓊脂糖、重氮鹽衍生物瓊脂糖、疏基瓊脂糖。親和層析條件的選擇：①封閉活性基團(tuán)：用無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)或三乙醇胺過(guò)柱；②除去未結(jié)合和結(jié)合不牢的蛋白：先用洗脫，再用解脫劑處理；解脫劑：硫氰酸鉀（或鈉）、甘氨酸緩沖液電泳法：利用分子量和電荷量不同進(jìn)行分離（二）純化抗原的鑒定蛋白含量測(cè)定：紫外吸收法、雙縮脲法、酚試劑法分子量測(cè)定：、凝膠過(guò)濾純度鑒定：醋酸纖維膜電泳、、毛細(xì)管電泳、等電聚焦、高效液相層析免疫活性鑒定：雙向免疫擴(kuò)散、免疫電泳、三、半抗原性免疫原的制備半抗原：僅有抗原性而無(wú)免疫原性的物質(zhì)如多肽、甾體激素、核苷、某些藥物等。載體r賦予半抗原以免疫原性的物質(zhì)（一）載體①蛋白質(zhì)：牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白牛甲狀腺球蛋白血藍(lán)蛋白②多肽聚合物：多聚賴(lài)氨酸（）③大分子聚合物：羧甲基纖維素聚乙烯吡咯烷酮（）（二）半抗原與載體的連接方法①物理方法：利用通過(guò)電荷和微孔吸附半抗原吸附的載體有、V硫酸葡聚糖等②化學(xué)方法：利用某些功能基團(tuán)將半抗原連接到載體上帶有游離氨基或羧基以及兩種基團(tuán)都有的半抗原：碳二亞胺法戊二醛法混和酸酐法過(guò)碘酸氧化法不帶氨基和羧基的半抗原：用化學(xué)方法使其轉(zhuǎn)變?yōu)閹в杏坞x氨基或游離羧基的衍生物，再與載體連接（三）半抗原性免疫原的鑒定一個(gè)載體分子至少要連接個(gè)以上的半抗原分子半抗原與載體的比例測(cè)定：吸收光譜分析法放射性核素標(biāo)記半抗原滲入法第二節(jié)免疫佐劑免疫佐劑（）：預(yù)先或與抗原同時(shí)注入體內(nèi)，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答的類(lèi)型的物質(zhì)稱(chēng)為免疫佐劑簡(jiǎn)稱(chēng)佐劑（v一、佐劑的種類(lèi)化合物氫氧化鋁、明礬、礦物油、吐溫、弗氏不完全佐劑以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸：、脂質(zhì)體生物制劑處理改造的細(xì)菌及代謝產(chǎn)物，如卡介苗、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌及、和類(lèi)脂、胞壁酰二肽等；細(xì)胞因子及熱休克蛋白用于人體的佐劑：氫氧化鋁、明礬、：、胞壁酰二肽、細(xì)胞因子、熱休克蛋白常用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的佐劑：弗氏佐劑'弗氏佐劑：弗氏完全佐劑一羊毛脂與液體石蠟的混合物弗氏不完全佐劑一弗氏完全佐劑加卡介苗乳化方法：研磨法和攪拌混合法二、佐劑的作用機(jī)制改變抗原物理性狀，延緩其降解和排除，更有效刺激免疫系統(tǒng)。刺激單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)其處理和提呈抗原的能力。刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化。第三節(jié)抗血清的制備抗血清的制備是將制備好的免疫原按照一定的免疫程序接種給所選擇的動(dòng)物，該動(dòng)物在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內(nèi)多個(gè)細(xì)胞克隆被激活并產(chǎn)生針對(duì)某一抗原多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體。多克隆抗體：天然抗原刺激多種淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的多種抗體的混合物一、免疫動(dòng)物的選擇抗原來(lái)源與動(dòng)物種屬的關(guān)系種屬差異越遠(yuǎn)，免疫原性越強(qiáng)動(dòng)物個(gè)體的選擇適齡、健康、體重符合要求抗原的性質(zhì)二、免疫程序免疫原的劑量中間劑量范圍內(nèi)，免疫原劑量增加可獲得高效價(jià)抗體免疫間隔時(shí)間第一次和第二次間隔?天，三次及以后間隔?天免疫途徑皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結(jié)三、動(dòng)物采血法頸動(dòng)脈采血法：家兔、綿羊、山羊心臟采血法：家兔、豚鼠、大鼠、雞靜脈采血法：家兔、山羊、綿羊第四節(jié)抗血清的鑒定和保存一、抗血清的鑒定抗體特異性的鑒定：雙向免疫擴(kuò)散法抗體效價(jià)的鑒定：凝集試驗(yàn)、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、抗體純度的鑒定：、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳抗體親合力