菊花的組織培養(yǎng)（給力的課件）

菊花的組織培養(yǎng)（給力的ppt課件）1菊花的組織培養(yǎng)（給力的ppt課件）2課題一菊花的組織培養(yǎng)課題一菊花的組織培養(yǎng)3有絲分裂受精卵細(xì)胞分化

在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過(guò)程。1、細(xì)胞分化的概念一、知識(shí)回顧有絲分裂受精卵細(xì)胞分化在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或4黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細(xì)胞，始終保持為上皮細(xì)胞，而不會(huì)變成其他類(lèi)型的細(xì)胞。2、穩(wěn)定性3、不可逆性細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。1、持久性2、細(xì)胞分化的特點(diǎn)造血干細(xì)胞原紅細(xì)胞早幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞死亡4、普遍性黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)30多代后仍能合成黑色素；離體培5

細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？

遺傳物質(zhì)沒(méi)有改變，不同組織的細(xì)胞共同來(lái)源于受精卵，經(jīng)有絲分裂產(chǎn)生。細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的改變？63、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABEDCAB基因在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，不同細(xì)胞中遺傳信息的執(zhí)行情況不同即基因的選擇性表達(dá)的過(guò)程3、細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)ABDCEEDCABEDCABEDCABE7

紅細(xì)胞合成血紅蛋白(不合成肌動(dòng)蛋白)肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白基因開(kāi)啟合成肌動(dòng)蛋白(不合成血紅蛋白)肌動(dòng)蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開(kāi)啟試一試:現(xiàn)在你能解釋這些現(xiàn)象了嗎?4、細(xì)胞分化的結(jié)果

細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能紅細(xì)胞合成血紅蛋白(不合成肌動(dòng)蛋白)肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白基8愈傷組織胚狀體1958，美國(guó)，斯圖爾德

植物組織培養(yǎng)離體二、基礎(chǔ)知識(shí)愈傷組織胚狀體1958，美國(guó)，斯圖爾德離體二、基礎(chǔ)知識(shí)9（一）植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞：外植體、脫分化、再分化、愈傷組織在無(wú)菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成完整的植株。又稱(chēng)：植物離體培養(yǎng)（一）植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞：在無(wú)菌和人工控制條件下10脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過(guò)程。外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。愈傷組織：細(xì)胞排列疏松、無(wú)規(guī)則、高度液泡化的無(wú)定形的薄壁細(xì)胞。脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的11切取形成層無(wú)菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（二）植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程切取無(wú)菌接種誘導(dǎo)愈傷組織試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化（12植物組織培養(yǎng)過(guò)程離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光植物組織培養(yǎng)過(guò)程離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素13（三）植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)---細(xì)胞全能性概念：高度分化的植物細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能?；A(chǔ)：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。表達(dá)條件：離體條件

無(wú)菌操作適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（植物激素）適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

溫度、酸堿度、光照等條件的控制（三）植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)---細(xì)胞全能性概念：高度分化的14思考這個(gè)試驗(yàn)說(shuō)明了已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能對(duì)比：多利羊的誕生動(dòng)物細(xì)胞有沒(méi)有這種能力？思考這個(gè)試驗(yàn)說(shuō)明了已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？高度分化的動(dòng)15已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。細(xì)胞全能性思考為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育所需要的全套基因植物組織培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物的克隆技術(shù)已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。細(xì)胞全能性思考161、培育無(wú)病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法（受體細(xì)胞為植物細(xì)胞）（四)植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：

3、人工種子（解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題）1、培育無(wú)病毒植株2、大規(guī)模培養(yǎng)愈傷組織（提取紫草素，治療燙17三、影響植物組織培養(yǎng)的因素1、材料的種類(lèi)、年齡及保存時(shí)間長(zhǎng)短等2、營(yíng)養(yǎng)3、植物激素4、PH、溫度、光照等條件三、影響植物組織培養(yǎng)的因素1、材料的種類(lèi)、年齡及保存時(shí)間長(zhǎng)短181、植物材料的選擇

---直接關(guān)系實(shí)驗(yàn)的成敗

①不同植物的組織培養(yǎng)難度不同eg：煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易

枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難

菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝②同一種植物材料，材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短等也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1、植物材料的選擇①不同植物的組織培養(yǎng)難度不同192、營(yíng)養(yǎng)---MS培養(yǎng)基A、大量元素:C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、SB、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、CoC、有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖D、植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等

Ｎ、Ｐ主要影響蛋白質(zhì)、核酸的合成；

K、Ca、Mg、S主要影響酶的活性。無(wú)機(jī)鹽蔗糖既是碳源也是調(diào)節(jié)滲透壓的物質(zhì)；維生素能促進(jìn)細(xì)胞分裂和誘導(dǎo)器官分化；甘氨酸是蛋白質(zhì)的組成成分，也是有機(jī)氮源。2、營(yíng)養(yǎng)---MS培養(yǎng)基A、大量元素:C、H、O、N、P、20MS固體培養(yǎng)基成分及比例MS固體培養(yǎng)基成分及比例討論：你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專(zhuān)題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類(lèi)。討論：你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專(zhuān)題2中微生物培養(yǎng)基的22常用植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素

生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈加強(qiáng)的趨勢(shì)激素的使用順序、使用的量及比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向3、植物激素的影響常用植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素3、植物激素的影響23生長(zhǎng)素類(lèi)：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。細(xì)胞分裂素類(lèi)：激動(dòng)素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）等。赤霉素類(lèi)：赤霉酸（GA3）等作用：2，4－D有利于愈傷組織的生長(zhǎng)；IAA、NAA、IBA有利于器官分化。作用：促進(jìn)細(xì)胞的分裂與分化，其中KT能明顯促進(jìn)芽的分化而抑制根的形成。作用：促進(jìn)不定芽和幼株伸長(zhǎng)。生長(zhǎng)素類(lèi)：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IA24生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)激素的使用順序、使用量及比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向：生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素＝有利于25思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問(wèn)題？生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素高利于根的形成適中利于愈傷組織的形成思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問(wèn)題？生長(zhǎng)素/細(xì)胞分26供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度均為0.5mg／Ｌ２、誘導(dǎo)菊花從芽：在MS培養(yǎng)基中加入BA和NAA，質(zhì)量濃度分別為2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3、誘導(dǎo)菊花生根：在MS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAA或IAA，質(zhì)量濃度均為0.1mg／Ｌ供參考的配方1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：274．溫度、光照、pH的影響光照：菊花每日用日光燈照射12h。溫度：

大多數(shù)植物組織培養(yǎng)控制在23～27℃，低于15℃時(shí)植物組織會(huì)表現(xiàn)生長(zhǎng)停止；高于35℃時(shí)對(duì)植物生長(zhǎng)不利。

菊花的組織培養(yǎng)控制在18～22℃。pH：

不同植物對(duì)培養(yǎng)基最適pH的要求不同，大多數(shù)控制在5～6.5。

菊花的組織培養(yǎng)控制在5.8左右。4．溫度、光照、pH的影響光照：菊花每日用日光燈照射12h。28制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培四、實(shí)驗(yàn)操作移栽沖洗—酒精—無(wú)菌水沖洗—氯化汞—無(wú)菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽29（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4℃保存配制好的培養(yǎng)基母液來(lái)制備1、配制各種母液①無(wú)機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類(lèi)、維生素類(lèi)以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)302、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養(yǎng)液②調(diào)PH③

培養(yǎng)基的分裝

由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①311、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗③消毒液處理取出后用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液1、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒32（三）接種污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺(tái)并用紫外線(xiàn)照射20分鐘。1、接種室消毒2、無(wú)菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種

將消過(guò)毒的菊花莖段在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切成0.5～1cm的小段，用鑷子夾取菊花莖段接種。（三）接種污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至33菊花的組織培養(yǎng)（給力的ppt課件）344、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和光照條件③插入時(shí)應(yīng)注意方向，形態(tài)學(xué)上端朝上，形態(tài)學(xué)下端朝下，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為735正常苗污染苗正常苗污染苗361、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶37思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒(méi)有被雜菌污染。思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或38（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)溫度控制在18-22℃每日用日光燈光照12h（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期39（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日。一般放置在20～25℃的遮蔭環(huán)境中，適應(yīng)5～7d。試管苗不萎蔫，有新生長(zhǎng)的趨勢(shì)，便可移栽。1、打開(kāi)封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間3、移栽幼苗長(zhǎng)壯后，移栽到土壤中（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的40固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培珍珠巖,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。蛭石是一種天然、無(wú)毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會(huì)膨脹的礦物。它是一種比較少見(jiàn)的礦物，屬于硅酸鹽。固體基質(zhì)型，含水量高、珍珠巖,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔41（六）栽培幼苗移栽后，每天觀(guān)察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開(kāi)花（六）栽培幼苗移栽后，每天觀(guān)察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況421、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、