醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南

醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南〔2023 版〕結(jié)果判定及檢驗人員業(yè)務力氣等因素直接影響產(chǎn)品質(zhì)量和平安。作為無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無菌檢驗工作應由本企業(yè)獨立完成。導和標準全市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗過程控制水平監(jiān)視檢查工作，同時，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)〔以下簡稱生產(chǎn)企業(yè)〕在無菌檢驗過程治理要求供給參考和依據(jù)。當國家相關法規(guī)、標準、檢查要求發(fā)生變化時，應重修訂本指南。一、 適用范圍核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場檢查、醫(yī)療器械質(zhì)量治理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量治理標準檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)視等各項涉無菌檢驗檢查。二、檢査內(nèi)容平進展客觀檢查和評價。1、了解產(chǎn)品待性及生產(chǎn)企業(yè)選擇無菌檢驗方法。常見產(chǎn)品無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當建立產(chǎn)品無菌檢查方法時，生產(chǎn)企業(yè)應進展方法驗證，以證明所承受方法能夠給出正確結(jié)果。假設該產(chǎn)品組分或原檢驗條件發(fā)生轉(zhuǎn)變時，檢查方法應重驗證。驗證時，應按供試品無菌檢查規(guī)定及有關要求進展操作。對藥典規(guī)定2、了解檢驗人員專業(yè)背景、培訓狀況及工作經(jīng)受?？赏ㄟ^查看學歷證書、培訓無菌技術培訓。310000級下局部干凈度100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)〔如在萬級干凈間內(nèi)配置超凈工作臺等〕中進展，其全過程必需嚴4、現(xiàn)場觀看無菌試驗所需設備和器具。其中，用生物平安柜〕主要器具有：試管及試管架、酒精燈、75%乙醇棉、滅菌刻度吸管〔lml>滅菌平皿〔9cm〕、錐形瓶、三角燒瓶、滅菌剪刀、銀子等。內(nèi)121°C30分鐘，或置電熱枯燥箱內(nèi)160°C2小時。器具滅菌后必需做好標識，標明滅菌時間和使用有效期。器皿在滅菌后，最多1周即用完。檢查時還應留意清點培育皿個數(shù)，和試驗記錄中反映培育基個數(shù)是否全都。5員當場操作或口述無菌檢驗過程?！?〕培育基制備2°C25°C、避光環(huán)境，假設保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；假設保存于密閉容器中，一般1年內(nèi)使用?！?〕供試品無菌檢查濾法。供試品無菌檢查所承受檢查方法和檢驗條件應和驗證方法一樣。無菌試驗過程中，假設需使用外表活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應證明其有效性，且對微生物無毒性。內(nèi)有確定真空度，可用適宜無菌器材〔如帶有除菌過濾器針頭〕向容器內(nèi)導入無菌空氣，再按無菌操作起開容器取出內(nèi)容物。〔3〕培育及觀看14如在參與供試品后、或在培育過程中，培育基消滅渾濁，培育14推斷有無微生物生長，可取該培育液適量轉(zhuǎn)種至同種穎培育基中，細菌培育2天、真菌培育3天，觀看接種同種穎培育基是否再消滅渾濁；或取培育液涂片，染色，鏡檢，推斷是否有菌。培育條件不能支持微生物生長〔促生長試驗〕；在無菌試驗中，產(chǎn)品中釋放出了殺菌或微生物電解物質(zhì)〔消退抑菌物質(zhì)〕；從滅菌處理到培育有確定時間間隔〔確定滅菌后產(chǎn)品儲存條件及儲存時間〕。〔4〕結(jié)果推斷生產(chǎn)企業(yè)應依據(jù)如下標準進展推斷：管不得有菌生長，否那么試驗無效。環(huán)境微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法要求；②回憶無菌試驗過程，覺察有可能引起微生物污染因素；③供試品管中生長微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用物品和〔或〕無菌操作技術不當引起。菌生長，判供試品符合規(guī)定；假設有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。6、查閱試驗記錄。完整試驗記錄應明確包含以下兒類信息：〔1〕樣地點、取樣方式、取樣人、原始試驗記錄序號?！?〕滅菌物品制作記錄①培育基：培育基名稱、培育基批號、培育基用量@〕、蒸館水用量〔ml〕、培育基分裝數(shù)量、滅菌日期、滅菌實際溫度和壓力、滅菌時間、制作人、培育基存放地點和有效期等。作人、器具存放地點、有效期等。〔3〕性標識〔例如：樣品號〕、樣品規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品數(shù)量、取樣E1期、日觀看結(jié)果〕、試驗結(jié)論、檢測人、復核人等?！?〕滅菌時間和壓力、經(jīng)辦人、處理日期等。三、其它應留意問題1、生產(chǎn)企業(yè)應確保樣品具有代表性：試驗樣品應從常規(guī)產(chǎn)品中能夠代表加工過程和條件批中選擇。選擇樣品是隨機。試驗樣品選擇和處理技術應明確，以免對樣品中不合格產(chǎn)品，它們應當代表這個生產(chǎn)批加工程序和條件。用于試驗不合格產(chǎn)品應不會影響無菌測試有效性。2、生產(chǎn)企業(yè)對于供試品選取、轉(zhuǎn)移過程要實行防止污染措施，確保試驗結(jié)果可包裝樣品。進入無菌檢驗室樣品假設有兩層〔或兩層以上〕包裝，需將外包裝在傳遞窗〔或緩沖間〕撤除后，傳入試驗室。3子〕。4、進入無菌操作室全部培育基、供試品等外表都應承受適用方法進展消毒處理〔如：紫外燈照耀不少于30分鐘〕，以防止將外包裝污染微生物帶入無菌檢驗室。出具試驗結(jié)果后，全部培育物須經(jīng)121°C高壓滅菌30分鐘處理。5、由于無菌檢驗時間跨度較長，因此過程記錄應能夠完整表達試驗全過程,對于在試驗過程中消滅各種狀況，均應在記錄中客觀反映。1、滅菌：殺滅或除去特定環(huán)境或物品中一切微生物過程。目前國際上規(guī)定,滅菌1〔T及以下。2、微生物：在顯微鏡下才能看到微小實體，包括細菌、真菌、原生動物和病毒。3干擾一4、無菌操作：是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械進展檢驗過程中，能防止微生物污染和干擾一種常規(guī)操作方法。56、需氧菌：在代謝中，有氧條件下才能生存微生物。7、厭氧菌：在代謝中，沒有氧條件下才能生存微生物。8、抑細菌/抑霉菌試驗：用選定微生物來演示某些物質(zhì)存在能夠抑制這些微生物生殖。9、促生長試驗：用于證明生長培育基能夠支持微生物生長技術操作。10、

假陰性：實際陽性無菌試驗結(jié)果被變成了陰性。假陽性：實際陰性無菌試驗結(jié)果被變成了陽性。生物指示物：對特定滅菌工藝有確定抗力，可供使用微生物檢驗器材。多個預定工藝參數(shù)上顯示變化指示器材。14、無菌保證水平〔SAL〕:滅菌后產(chǎn)品上存在單個活微生物概率。參考資料二：無菌室空氣中菌落數(shù)檢查無菌室在消毒處理完畢后，應檢查空氣中菌落數(shù)。方法如下：取直徑約90mm培20mL,30°C?35°C48小時證明無菌后，取3只培育皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置翻開上蓋，暴露30分鐘后蓋好，置30°C?35°C培育48小時后取出檢查，3只雙碟上生長菌落數(shù)平均不得超過1個。無菌試驗過程中應檢查空氣中菌落數(shù)，方法同上。在試驗開頭進展時翻開平皿蓋，至試驗完畢蓋好照上法培育，應符合上述要求。參考資料三：XIIIB1231、表2、表3中最少檢驗數(shù)量不包括陽性比照試驗供試品用量。一般狀況下，供試品無菌檢查假設承受薄膜過濾法，應增加1/2最小檢驗數(shù)量作陽性比照用；假設承受直接接種法，應增加供試品1支〔或瓶〕作陽性比照用。執(zhí)行GB/T14233.2供試品數(shù)量應滿足同一批號3?11個單位供試品。檢驗量是指一次試驗所用供試品總量〔g或ml〕。除另有規(guī)定外，每份培育基接種供試品量按表2、表3規(guī)定。假設每支〔瓶〕供試品裝量按規(guī)定足夠接種兩份培育內(nèi)容物過濾。1批出廠產(chǎn)品最少量檢驗數(shù)量供試品N〔個〕每種培育基最少檢驗數(shù)量注射劑W10010%4個〔取較多者〕OlOOml〕100VNW500 10個>5002%20個〔取較少者〕眼用及其他非注射產(chǎn)品W2002%10個〔取較少者〕5%2個〔取較多者〕>20010個桶裝固體原料W4每個容器4VNW50>50醫(yī)療器具 10W100100VNW500>500

20%4個容器〔取較多者〕2%10個容器〔取較多者〕10%4件〔取較多者〕10件2%20件〔取較少者〕注:假設每個容器中裝量缺乏接種兩種培育基，那么表中檢驗數(shù)量應加倍2上市抽驗樣品〔液體制劑〕最少檢驗量供試品量V 每支樣品接入每管培育

最少檢驗數(shù)量W11<V<55WV<2020WVV5050WVV100

(ml)

全量半量2ml5ml10ml

基最少樣品量

〔瓶或支〕20①1010101050WV<100〔靜脈給藥〕100WVW500V>500

半量 10半量 6500ml 610支供試品.3上市抽驗樣品〔固體制劑〕最少檢驗量供試品裝量M〔瓶或支〕每支樣品接入每管培育基最少樣品量最少檢驗數(shù)量〔瓶或支〕M<50mg全量20?50mgWM<300mg半量10300mgWMV5g150mg10M^5g500mg10一次性使用含藥產(chǎn)品整個產(chǎn)品1010支供試品4個包裝參考資料四：培育基制備培育應留意培育條件：硫乙醇酸鹽流體培育基30?35°C14天；改進馬丁培養(yǎng)基23?28°C14菌。1、硫乙醇酸鹽流體培育基酪陳〔胰酶水解〕15.0g、酵母浸出粉5.0,葡萄糖、氯化鈉、L-胱氨酸、配制0.1%1.0ml0.5g〔或硫乙醇酸0.3ml〕、瓊脂0.75g、水1000mlpH為弱堿性,煮沸，濾清，參與葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)整PH值使滅菌后為7.。分裝至適宜容器中，其裝量和容器高度比例應符合培育完畢后培育基氧化層〔粉紅色〕不超過培育基深度1/2。滅菌。在供試品接種前，培育基氧化層高度不得超過培育基深度1/5，否那么，須經(jīng)100°C水浴加熱至粉紅色消逝〔不超過20分鐘〕，快速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。30°C?35°C培育。2、改進馬丁培育基2.0g＞20.0g、水1000ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)整pH值約為6.8,煮沸，加入葡萄pH6.4+0.2,分裝，滅菌。23°C?28°C培育。3、選擇性培育基用前參與適宜中和劑、滅活劑或外表活性劑，其用量同驗證試驗。4、養(yǎng)分肉湯培育基10.Og3.Og.1000ml取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)整pH為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)整pH值使滅7.2±0.2,分裝，滅菌。5、養(yǎng)分瓊脂培育基按上述養(yǎng)分肉湯培育基處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值使滅菌后為7.2±0.2,分裝，滅菌。6、改進馬丁瓊脂培育基按改進馬丁培育基處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值使滅菌后為6.4±0.2,分裝，滅菌。參考資料五：培育基適用性檢查1514天，應無菌生長。2、靈敏度檢查菌種：培育基靈敏度檢查所用菌株傳代次數(shù)不得超過5代(從菌種保存中心獲得冷凍枯燥菌種為第0代)，試驗用菌種應承受適宜菌種保存技術進展保存，以保證試驗菌株生物學特性。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26003)銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)(CMCC(B)10104)枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)(CMCC(B)63501J生泡梭菌(Clostridiumsporogenes)(CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉(Aspergillusniger)(CMCC(F)98003)3、菌液制備30°C?35°C培育18小時?24小時；接種白色念珠菌穎培育物至改進馬丁培育基中或改進馬丁瓊脂培育基上，23?28°C24?48小時，上述培育物用0.9%無菌氯化lml100cfu(菌落形成單位)菌懸液。接種黑曲需穎培育物至改進馬丁瓊脂斜面培育基上，23?28°C培育5?7天，3?5ml0.05%(v/v)800.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后，0.05%(v/v)800.9%無菌氯化1mllOOcfuffl子懸液。菌懸液在室溫下放置應在2小時內(nèi)使用，假設保存在2?8°C可在24小時內(nèi)使2?8°C,在驗證過貯存期內(nèi)使用。4、培育基接種取每管裝量為12ml硫乙醇酸鹽流體培育基9支，分別接種小于lOOcfu金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽泡桿菌、生抱梭菌各2支，另1支不接種作為空白比照39ml5lOOcfu白色念215天。逐日觀看結(jié)果。5、結(jié)果判定規(guī)定。參考資料六：方法驗證試驗1、菌種及菌液制備除大腸埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102)芽砲桿菌、生砲梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培育基靈敏度檢查。大腸埃希菌菌液制備同金黃色葡萄球菌。2、薄膜過濾法中參與小于lOOcfu入等量試驗菌，3?5天，各試驗菌同法操作。3、直接接種法取符合直接接種法培育基用量要求硫乙醇酸鹽流體培育基8管，分別接入小于lOOcfu金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽抱桿菌、生砲梭菌各2管，取符合直接接種法培育基用量要求改進馬丁培育基4管，分別接入小于lOOcfu白色念珠菌、211管作為比照,按置規(guī)3?5天。4、結(jié)果推斷和比照管比較，如含供試品各容器中試驗菌均生長良好，那么說明供試品該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以無視不計，照此檢查方法和檢查條件進展供試品無菌檢查。如含供試品任一容器中試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，那么說明供試品該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，可承受增加沖洗量、增加培育基用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消退供試品抑菌作用，并重進展方法驗證試驗。參考資料七：供試品處理及接種培育基不得大于培育基體積10%,同時，硫乙醇酸鹽流體培育基每管裝量不少于15ml,改進馬10mlo別將100ml硫乙醇酸鹽流體培育基及改進馬丁培育基參與相應濾筒內(nèi)。如承受一般薄350ml硫乙醇酸鹽流體培育基及改進馬丁培育基容器中，其中一份做陽性比照用。0.