血涂片的制備與染課件

血涂片的制備與染色

血涂片血涂片的顯微鏡檢查是血液細胞學(xué)檢查的基本方法血片制備和染色不良,常使細胞鑒別發(fā)生困難,甚至導(dǎo)致錯誤結(jié)論血涂片血涂片的顯微鏡檢查是血液細胞學(xué)檢查的基本方法血涂片的制備與染色實驗?zāi)康模赫莆掌胀ㄊ止ぶ苽溲科姆椒ㄕ莆杖鹗先玖系奶匦院腿旧椒叭鹗?吉姆薩復(fù)合染色方法

血涂片的制備與染色血涂片的制備實驗器材：

EDTA-K2抗凝血、推片、載玻片（25mm*75mm,厚度為0.8～1.2mm)

血涂片的制備載玻片的清潔要求：清潔、干燥、中性、無油膩新載玻片用1mol/LHCL浸泡24小時→用清水徹底沖洗→烘干備用。用過的玻片放入肥皂水或洗衣粉水中煮沸20分鐘，再用熱水將肥皂和血膜洗凈，用清水反復(fù)沖洗后烘干備用。

載玻片的清潔要求：清潔、干燥、中性、無油膩制作血涂片的標(biāo)本末梢血EDTA-K2抗凝靜脈血制作血涂片的標(biāo)本操作1.采血2.推片左手持載玻片，右手持推片，在玻片近一端1/3處，加一滴（約0.05ml)充分混勻的血液，握住另一張邊緣光滑的推片，以30°～45°角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩(wěn)地推動推片至載玻片的另一端。3.干燥將推好的血涂片在空中晃動，使其迅速干燥

操作1.采血血涂片的制備

將推片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。血涂片的制備將推片向1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推片的寬度一張良好的血涂片要求厚薄適宜頭體尾明顯邊緣整齊，兩側(cè)留有空隙一張良好的血涂片要求厚薄適宜頭體尾明顯邊緣整齊，兩側(cè)留有空隙血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件血涂片的制備與染課件注意事項1.載玻片應(yīng)清潔、干燥、中性、無塵、無油脂，表面平而光滑。新購置的載玻片常帶有游離堿質(zhì)，必須用約1mol/LHCL浸泡24小時后，再用清水沖洗，干燥后備用。2.推片與血液接觸的邊緣要光滑、整齊，推片使用后要及時把血擦干凈。3.推好的血涂片應(yīng)在空氣中晃動，使其盡快干燥。天氣寒冷或潮濕時，應(yīng)與37℃恒溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小。4.血涂片應(yīng)在1小時內(nèi)染色或在1小時內(nèi)用無水甲醇（含水量﹤3%)固定后染色。注意事項1.載玻片應(yīng)清潔、干燥、中性、無塵、無油脂，表面平而注意事項5.血涂片影響因素主要有：血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快則血膜厚，反之則血膜薄。所以針對不同的患者應(yīng)有的放矢，對紅細胞比積高、血黏度高的患者應(yīng)采用小血滴、小角度、慢推；而貧血患者則采用大血滴、大角度、快推。注意事項5.血涂片影響因素主要有：血滴大、血黏度高、

血涂片染色

血涂片的制備與染課件常用的染色方法瑞氏（Wright）染色法：

對胞漿染色效果好，特別是中性顆粒，對核著色較差。瑞氏-姬姆薩（Wright-Giemsa)復(fù)合染色法：

即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液?；蛳扔萌鹗先旧ㄈ旧?，再用稀釋吉姆薩復(fù)染。

常用的染色方法瑞氏（Wright）染色法：瑞氏染色法原理

瑞氏染色法使細胞著色既有化學(xué)親和反應(yīng)，又有物理吸附作用。各種細胞由于其所含化學(xué)成分不同，對染料的親和力也不一樣，因此，染色后各種細胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。瑞氏染色法原理瑞氏染色法試劑1.瑞氏染液：（1）瑞氏染料0.1g

（2）甲醇60ml

（3）中性甘油2～3ml2.PH6.8磷酸鹽緩沖液瑞氏染色法試劑瑞氏染液（1）瑞氏染料：由酸性染料伊紅和堿性染料美蘭的氧化物（天青）組成。（2）甲醇：作為一種有機溶劑可使瑞氏染料保持在解離狀態(tài)（M+E-）；同時甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定為一定形態(tài)并使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)沉淀，形成顆粒狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細胞與染料接觸的表面積，提高對染料的吸附作用，增加染色效果。（3）甘油：防止染色中染料過早揮發(fā)，并可使細胞著色清晰。瑞氏染液（1）瑞氏染料：由酸性染料伊紅和堿性染料美蘭染色方法1.用蠟筆在血膜兩頭畫線，然后將血片平放在染色架上2.加瑞氏染液數(shù)滴，覆蓋整個血膜，固定細胞約1分鐘3.滴加等量或加倍的緩沖液，用洗耳球吹，使之與染液充分混勻，并染色5－10分鐘4.清水在玻片無血膜處沖去染液，待干后鏡檢染色方法1.用蠟筆在血膜兩頭畫線，然后將血片平放在染色架上染色結(jié)果

血膜外觀成紫紅色,

紅細胞呈粉紅色，細胞核呈紫紅色，嗜酸性顆粒呈桔紅色，嗜堿性顆粒呈紫黑色。染色結(jié)果血涂片的制備與染課件注意事項1.pH值對細胞染色有影響由于細胞中各種蛋白質(zhì)均為兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定。對某一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境pH﹤pI(蛋白質(zhì)的等電點），則該蛋白質(zhì)帶正電荷，即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易于酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅；相反，則易于美蘭天青結(jié)合，染色偏藍。為此，應(yīng)使用清潔中性的載玻片，稀釋染液必須用pH6.8緩沖液。沖洗玻片必須用流水。注意事項1.pH值對細胞染色有影響偏酸合適偏堿偏酸合適偏堿注意事項2.未干透的血膜不能染色，否則染色時血膜會脫落。3.染色時間與染液濃度、染色時溫度成反比；而與細胞數(shù)量成正比。4.沖洗時不能先倒掉染料，應(yīng)用流水沖去，以防染料沉淀在血膜上。5.如血膜上有染料顆粒沉積，可加少許甲醇溶解，但需立即用水沖掉甲醇，以免脫色。注意事項注意事項6.染色過淡，可以復(fù)染。復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好的染色環(huán)境，而后加染液，或加緩沖液與染液的混合液，不可先加染液。7.染色過深，可用水沖洗或浸泡水中一定時間，也可用甲醇脫色。8.染色偏堿或染色偏酸，均應(yīng)更換緩沖液再重染。注意事項6.染色過淡，可以復(fù)染。復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色法

姬姆薩染色原理與瑞氏染色相同，但提高了噻嗪染料的質(zhì)量，加強了天青的作用，對細胞核著色效果較好，但對中性顆粒著色較瑞氏染色差。因此，瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色法可取長補短，使血細胞的顆粒及胞核均能獲得滿意的染色效果。瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色法姬姆薩染色原理與瑞氏染色相染色方法

珠海貝索生物技術(shù)有限公司試劑盒方法：

1.滴加瑞氏-姬姆薩A液（約0.5ml～0.8ml）于涂片上，并讓染液覆蓋整個標(biāo)本涂片染色1分鐘。

2.再將瑞氏-姬姆薩B液滴加于A液上面（滴加之量為A液的

2～3倍），以嘴或洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪狀，使兩液充分混勻，染色（3～10）分鐘。

3.水洗（沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖去，以防有沉渣沉淀在標(biāo)本上），干燥、鏡檢。染色方法珠海貝索生物技術(shù)有限公司試劑盒

白細胞分類計數(shù)血涂片的制備與染課件白細胞分類計數(shù)實驗?zāi)康模赫莆诊@微鏡白細胞分類計數(shù)的方法及各種白細胞的正常形態(tài)白細胞分類計數(shù)白細胞分類計數(shù)原理

將血液制成血涂片，用瑞氏-姬姆薩染液染色，根據(jù)各類細胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細胞區(qū)別并進行計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占的百分率。白細胞分類計數(shù)白細胞分類計數(shù)實驗用品：

顯微鏡、香柏油、擦鏡紙等已制備好的血涂片白細胞分類計數(shù)分類計數(shù)方法1.低倍鏡觀察白細胞的數(shù)量、分布和染色情況觀察全片，包括白細胞的分布和染色情況2.選擇血涂片體尾交界處染色良好的部位，用油鏡分類100－200個細胞3.記錄五種白細胞的細胞數(shù)分類計數(shù)方法1.低倍鏡觀察白細胞的數(shù)量、分布和染色情況血涂片的觀察

鏡檢部位：一般體積小的細胞分布在頭部和體部比較多；而尾部和兩側(cè)以中性粒細胞和單核細胞較多，異常大的細胞在片尾末端出現(xiàn)，所以在體尾交界處觀察細胞。血涂片的觀察鏡檢部位：血涂片的觀察

經(jīng)染色后的血涂片先用低倍鏡觀察：1.染色情況(滿意、偏酸、偏堿）2.觀察細胞分布情況，選擇細胞分布均勻之處轉(zhuǎn)浸油鏡進行白細胞分類計數(shù)。油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計數(shù)。李四123血涂片的觀察經(jīng)染色后的血涂片先用低倍鏡觀察：李四123血涂片的觀察血涂片的觀察記錄方法（1）手工完全記錄法：將所見的白細胞按其分類用“正”或“++++”的方法記錄至所需總數(shù)（2）手工半記錄法：用上法記錄除中性粒細胞以外的各種白細胞，同時默記總數(shù)至所需細胞數(shù)（3）分類記數(shù)器法記錄方法（1）手工完全記錄法：將所見的白細胞按其分類用參考值參考值外周血中白細胞形態(tài)白細胞中性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞淋巴細胞單核細胞外周血中白細胞形態(tài)白細胞中性粒細胞淋巴細胞

中性分葉核粒細胞中性桿狀核粒細胞嗜堿性粒細胞嗜酸性粒細胞淋巴細胞單核細胞中性分葉核粒細胞中性桿狀核粒細胞嗜堿性粒細胞嗜酸性粒細胞淋中性桿狀核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍胞質(zhì)豐富，粉紅色，含較多細小均勻的紫紅色中性顆粒細胞核染色質(zhì)粗糙不勻，排列緊密，為深紫紅色中性桿狀核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍

中性分葉核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍胞質(zhì)豐富，粉紅色，含較多細小均勻的紫紅色中性顆粒細胞核染色質(zhì)粗糙不勻，排列緊密，為深紫紅色標(biāo)準(zhǔn)：核徑最窄處小于最寬處1/3為分葉核核徑最窄處大于最寬處1/3為桿狀核中性分葉核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩嗜酸性粒細胞細胞圓形，直徑14-16um胞漿內(nèi)充滿粗大、整齊、均勻、排列緊密、有立體感的桔紅色嗜酸性顆粒，偶見少許淡藍或無色胞漿嗜酸性粒細胞容易破碎，顆粒可分散于細胞周圍嗜酸性粒細胞細胞圓形，直徑14-16um

嗜堿性粒細胞

細胞圓形，直徑14-16um胞漿少，常呈淡紅或淡紫紅色，含少量粗大、不均勻、排列不規(guī)則的紫黑色嗜堿性顆粒，常蓋于核上，及細胞邊緣

嗜堿性粒細胞

細胞圓形，直徑14-16um淋巴細胞小淋巴細胞：細胞圓形，直徑6-10um，胞漿很少，有的僅在核的一側(cè)出現(xiàn)一線藍色胞漿，甚至完全沒有。細胞核圓形，偶見凹陷，染色質(zhì)粗糙致密，可有塊狀。大淋巴細胞：體積較大，直徑10-15um，胞漿豐富，呈透明藍色，常有少量粗大、大小不均的紫紅色嗜天青顆粒。細胞核染色質(zhì)疏松淋巴細胞單核細胞細胞圓形或不規(guī)則形，為外周血中最大的細胞，直徑15-25um胞漿豐富，染淡藍或灰藍色，呈毛玻璃樣半透明，含有大量細小、灰塵樣嗜天青顆粒，可見空泡細胞核大，呈不規(guī)則圓形、腎形、馬蹄形或不規(guī)則分葉，有時折疊扭曲染色質(zhì)細致、疏松如網(wǎng)狀單核細胞細胞圓形或不規(guī)則形，為外周血中最大的細胞，直徑15-

白細胞分類計數(shù)

白細胞分類計數(shù)概念

外周血中五種類型白細胞的

相對百分比和絕對計數(shù)一般情況計數(shù)100個白細胞，并計算出各種白細胞所占的比例。同時觀察各種細胞的形態(tài)（大小、外形、胞質(zhì)、胞核）有無變化。概念外周血中五種類型白細胞的血常規(guī)檢驗流程樣品采集靜脈采血 毛細血管采血自動化血細胞分析儀WBC手工分類計數(shù)血常規(guī)檢驗流程樣品采集紫色真空采血管抗凝劑：EDTA-K21.5-2.0mg/ml樣品采集紫色真空采血管HemocytometerHemocytometer試驗原理Wright-Giemsa:甲醇:將細胞固定在玻片上美蘭染液與RNA,DNA結(jié)合===藍色/紫色伊紅與血紅蛋白，嗜酸性顆粒結(jié)合===粉色/紅色磷酸鹽緩沖液的pH值非常重要試驗原理Wright-Giemsa:血涂片的制備與染課件血涂片制作：推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（?。┮粡垵M意的血涂片應(yīng)厚薄均勻頭體尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B123血涂片制作：推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄試驗步驟血涂片的制備：推片角度30-40度血涂片的厚薄的影響因素：推片角度推片速度血樣的粘滯度試驗步驟血涂片的制備：lowHCTsmallanglelowHCTsmallangle

尾體頭尾體頭血涂片染色Wright’sGiemsa染色:1-2min磷酸鹽緩沖液:15min蒸餾水沖洗干凈染色時間受染液濃度和室內(nèi)溫度影響血涂片染色Wright’sGiemsa染色:1-2mi血涂片染色勿沖洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后將Ⅰ液和Ⅱ液充分混允靜置10分鐘直接流水沖洗3-5分鐘（切勿先到掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡分類計數(shù)100個白細胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆蓋整個血膜1分鐘血涂片染色勿沖洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后將Ⅰ液和Ⅱ液充分混顯微鏡鏡檢10倍鏡:觀察血涂片的質(zhì)量、血細胞是否凝集、是否有寄生蟲。100倍油鏡：觀察紅細胞形態(tài)進行白細胞分類計數(shù)。顯微鏡鏡檢血涂片的觀察：

經(jīng)染色后的血涂片先用低倍鏡觀察：1.染色情況(滿意、偏酸、偏堿）2.觀察細胞分布情況，選擇細胞分布均勻之處轉(zhuǎn)浸油鏡進行白細胞分類計數(shù)。油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計數(shù)。李四123血涂片的觀察：經(jīng)染色后的血涂片先用低倍鏡觀察：李四123血涂片的制備與染課件外周血中白細胞形態(tài)白細胞中性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞淋巴細胞單核細胞外周血中白細胞形態(tài)白細胞中性粒細胞淋巴細胞

血涂片的制備與染課件中性桿狀核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍胞質(zhì)豐富，粉紅色，含較多細小均勻的紫紅色中性顆粒細胞核染色質(zhì)粗糙不勻，排列緊密，為深紫紅色中性桿狀核粒細胞胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍血涂片的制備與染課件Segmentedneutrophil胞體圓形，直徑10-15um，為紅細胞的兩倍胞質(zhì)豐富，粉紅色，含較多細小均勻的紫紅色中性顆粒細胞核染色質(zhì)粗糙不勻，排列緊密，為深紫紅色標(biāo)準(zhǔn)：核徑最窄處小于最寬處1/3為分葉核核徑最窄處大于最寬處1/3為桿狀核Segmentedneutrophil胞體圓形，直徑10-血涂片的制備與染課件Eosinophil細胞圓形，直徑14-16um胞漿內(nèi)充滿粗大、整齊、均勻、排列緊密、有立體感的桔紅色嗜酸性顆粒，偶見少許淡藍或無色胞漿嗜酸性粒細胞容易破碎，顆粒可分散于細胞周圍Eosinophil細胞圓形，直徑14-16um血涂片的制備與染課件Basophil細胞圓形，直徑14-16um胞漿少，常呈淡紅或淡紫紅色，含少量粗大、不均勻、排列不規(guī)則的紫黑色嗜堿性顆粒，常蓋于核上，及細胞邊緣Basophil細胞圓形，直徑14-16um血涂片的制備與染課件Lymphocyte小淋巴細胞：細胞圓形，直徑6-10um，胞漿很少，有的僅在核的一側(cè)出現(xiàn)一線藍色胞漿，甚至完全沒有。細胞核圓形，偶見凹陷，染色質(zhì)粗糙致密，可有塊狀。大淋巴細胞：體積較大，直徑10-15um，胞漿豐富，呈透明藍色，常有少量粗大、大小不均的紫紅色嗜天青顆粒。細胞核染色質(zhì)疏松Lymphocyte小淋巴細胞：細胞圓形，直徑6-10um，血涂片的制備與染課件Monocyte細胞圓形或不規(guī)則形，為外周血中最大的細胞，直徑15-25um胞漿豐富，染淡藍或灰藍色，呈毛玻璃樣半透明，含有大量細小、灰塵樣嗜天青顆粒，可見空泡細胞核大，呈不規(guī)則圓形、腎形、馬蹄形或不規(guī)則分葉，有時折疊扭曲染色質(zhì)細致、疏松如網(wǎng)狀Monocyte細胞圓形或不規(guī)則形，為外周血中最大的細胞，直血涂片的制備與染課件中性分葉核嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞中性桿狀核淋巴細胞單核細胞中性分葉核嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞中性桿狀核淋巴細胞單核細胞參考值正常參考值

中性粒細胞50-70%嗜酸性粒細胞0.5-5%嗜堿性粒細胞0-1%單核細胞