艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置和質(zhì)量管理

艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

和質(zhì)量管理xxx艾滋病檢測(cè)工作管理辦法?實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室:中國(guó)CDC艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室:省CDC艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室:地(市)級(jí)CDC艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室另外，在沒有檢測(cè)條件的偏遠(yuǎn)地區(qū)因工作需要建立的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)點(diǎn)。艾滋病檢測(cè)工作管理辦法實(shí)驗(yàn)室必備條件?人員條件

?國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室:略

?艾滋病確認(rèn)中心和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室至少由5名醫(yī)技人員組成,高級(jí)衛(wèi)生技術(shù)人員至少1名、中級(jí)2名或以上,負(fù)責(zé)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的人員需具有3年以上從事HIV抗體初篩工作經(jīng)驗(yàn)、接受過國(guó)家級(jí)或確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)培訓(xùn),并獲得合格證書.?篩查中心實(shí)驗(yàn)室和篩查實(shí)驗(yàn)室

至少由3名醫(yī)技人員組成，具有中級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱人員至少1名。負(fù)責(zé)篩查試驗(yàn)的人員需具有2年以上從事血清學(xué)檢測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)，接受過省確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)培訓(xùn)，并獲得合格證書。（現(xiàn)場(chǎng)篩查點(diǎn)：有1名以上的技術(shù)人員，且經(jīng)過確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)合格。）艾滋病檢測(cè)工作管理辦法建筑條件和設(shè)備條件國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室（略）艾滋病確認(rèn)中心和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室（略）■艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室和篩查實(shí)驗(yàn)室有獨(dú)立實(shí)驗(yàn)用房或?qū)Ｓ脵z測(cè)臺(tái)，分為清潔區(qū)和污染區(qū)。配備篩查試驗(yàn)所需設(shè)備，包括酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、移液器、普通冰箱、離心機(jī)；消毒與污物處理設(shè)備；安全防護(hù)用品；有條件的還應(yīng)配備實(shí)驗(yàn)室恒溫設(shè)備。篩查中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備低溫冰箱。艾滋病檢測(cè)工作管理辦法實(shí)驗(yàn)室的任務(wù)國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室（略）艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室（略）艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室

(1)承擔(dān)轄區(qū)內(nèi)艾滋病病毒抗體的篩查任務(wù)。

(2)負(fù)責(zé)轄區(qū)內(nèi)陽性反應(yīng)標(biāo)本的復(fù)檢，及時(shí)將需要做確認(rèn)試驗(yàn)的標(biāo)本轉(zhuǎn)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。

(3)負(fù)責(zé)轄區(qū)內(nèi)艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)培訓(xùn)和指導(dǎo)。

(4)按規(guī)范要求開展檢測(cè)前后咨詢和培訓(xùn)。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室

(1)承擔(dān)本地區(qū)艾滋病抗體篩查任務(wù)。

(2)負(fù)責(zé)將篩查陽性反應(yīng)標(biāo)本送艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢或直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

(3)按規(guī)范要求開展檢測(cè)前后咨詢。

HIV抗體初篩檢測(cè)的必要條件?經(jīng)省級(jí)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室?嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生部《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范》(1997)和中國(guó)CDC《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》(2003年5月)艾滋病檢測(cè)工作管理辦法艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的審批1、在人員條件和實(shí)驗(yàn)室硬件均符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范》要求的前提下，擬申請(qǐng)艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的單位，須填寫艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室申請(qǐng)表，一式三份，報(bào)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門簽署意見后，交省疾病預(yù)防控制中心確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。2、省CDC組織專家3人進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)考核與驗(yàn)收，如符合申報(bào)條件則會(huì)形成意見報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門。3、經(jīng)省級(jí)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)后方可成為艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室。質(zhì)量管理

(Qualitymanagement,QM)

對(duì)確定和達(dá)到質(zhì)量要求所需的職能和活動(dòng)的管理。是制定和實(shí)施質(zhì)量方針的一系列管理職能，通過質(zhì)量體系來實(shí)現(xiàn)質(zhì)量管理。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理包括質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評(píng)價(jià)。質(zhì)量保證

(QualityAssurance,QA)

（一）

定義質(zhì)量保證是指從接收檢驗(yàn)標(biāo)本起，到實(shí)驗(yàn)室發(fā)出報(bào)告止，為確保實(shí)驗(yàn)室最終報(bào)告結(jié)果的正確性所進(jìn)行的全過程，包括采取各種行政和技術(shù)上的措施和方法。為了提供足夠的信任,表明實(shí)體能夠滿足質(zhì)量要求.而在質(zhì)量體系中實(shí)施,并根據(jù)需要進(jìn)行證實(shí)的,全部有計(jì)劃和有系統(tǒng)的活動(dòng)(GB/T65831994)

為確保實(shí)驗(yàn)室所報(bào)告的最終結(jié)果的正確性所采取的所有程序控制(逆轉(zhuǎn)錄病毒檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室診斷及基本的質(zhì)量控制里爾.康斯坦丁)質(zhì)量保證

質(zhì)量保證是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的基本條件，其實(shí)施程度直接影響試驗(yàn)結(jié)果和最后報(bào)告的每個(gè)參數(shù)。質(zhì)量保證取決于良好的質(zhì)量控制程序，并經(jīng)良好的質(zhì)量評(píng)價(jià)程序加以鑒定。因此，要求所有的實(shí)驗(yàn)室工作人員有責(zé)任時(shí)刻注意解決影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的每個(gè)環(huán)節(jié)上可能出現(xiàn)的問題。

質(zhì)量保證管理是關(guān)鍵(組織結(jié)構(gòu)、崗位責(zé)任)硬件要規(guī)范（試劑、儀器、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境）人員要合格(人員素質(zhì)與培訓(xùn))操作按文件（制度、操作指導(dǎo)、質(zhì)量控制及質(zhì)量記錄）５．HIV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室文件和文件管理要求（1）建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件(SOP)（2）建立實(shí)驗(yàn)原始記錄表

（3）建立HIV抗體檢測(cè)程序（4）填寫檢測(cè)結(jié)果表（5）建立標(biāo)本的登記記錄

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后，有關(guān)參數(shù)應(yīng)該及時(shí)登記在標(biāo)本的登記記錄中，包括受檢者的姓名或代號(hào)、試管編號(hào)、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗(yàn)結(jié)果(包括初篩、復(fù)檢、確證)、送檢日期、報(bào)告日期、備注(必要時(shí)記錄通信地址)。５．HIV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室文件和文件管理要求（6）建立HIV陽性標(biāo)本的保存記錄記錄中填寫陽性標(biāo)本血清/血漿的儲(chǔ)存量、標(biāo)本儲(chǔ)存溫度、標(biāo)本儲(chǔ)存起始時(shí)間以及標(biāo)本保管人姓名。所有經(jīng)確認(rèn)的陽性標(biāo)本，包括實(shí)驗(yàn)室留存的標(biāo)本，應(yīng)送省級(jí)HIV抗體確認(rèn)中心或省級(jí)衛(wèi)生行政部門指定的單位保存，不得擅自處理。（7）建立實(shí)驗(yàn)室安全措施參見《規(guī)范》附件一，第9頁。（8）文件存檔原始記錄包括實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測(cè)記錄表、標(biāo)本登記記錄、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等重要記錄都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。推薦同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。內(nèi)含病人姓名的所有工作記錄一定要保密，參見《規(guī)范》第8頁。

質(zhì)量控制

(QualityControl,QC)

（一）

定義質(zhì)量控制是指為確保實(shí)驗(yàn)工作正常進(jìn)行而在每一次實(shí)驗(yàn)過程中必須采取的各種措施。

為達(dá)到質(zhì)量要求所采取的作業(yè)技術(shù)和活動(dòng).1.質(zhì)量控制包括作業(yè)和活動(dòng),其目的在于監(jiān)視過程,并排除質(zhì)量環(huán)節(jié)中所有階段中導(dǎo)致不滿意的原因,以取得經(jīng)濟(jì)效益.2.質(zhì)量控制和質(zhì)量保證的某些活動(dòng)是相互聯(lián)系的.(GB/T65831994)在每一次實(shí)驗(yàn)過程中所必須采取的一切監(jiān)測(cè)手段以確保實(shí)驗(yàn)工作的正常進(jìn)行(逆轉(zhuǎn)錄病毒檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室診斷及基本的質(zhì)量控制里爾.康斯坦丁)實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量控制①采集標(biāo)本前病人的準(zhǔn)備；②正確的標(biāo)本采集方法；③準(zhǔn)確及時(shí)的運(yùn)送標(biāo)本；④實(shí)驗(yàn)前正確地處理和保存標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)中質(zhì)量控制①質(zhì)控品的準(zhǔn)備；②試劑盒的評(píng)價(jià)；③開展Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控（或“即刻法”質(zhì)控）。

實(shí)驗(yàn)后質(zhì)量控制①實(shí)驗(yàn)后準(zhǔn)確填寫檢驗(yàn)結(jié)果；②及時(shí)發(fā)出報(bào)告；③正確地解釋檢驗(yàn)結(jié)果的臨床意義。基本要求標(biāo)準(zhǔn)1．試劑種類必須使用經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)或注冊(cè)，經(jīng)過中國(guó)藥品生物制品檢定所批批檢定合格的國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口HIV抗體初篩和確認(rèn)檢測(cè)試劑。初篩用的HIV檢測(cè)試劑必須是HIV－1/2混合型。在選用試劑時(shí)應(yīng)優(yōu)先選擇經(jīng)過臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良的試劑盒。2．必須使用在有效期內(nèi)且保存條件符合要求的診斷試劑3．必須按照SOP中規(guī)定的要求進(jìn)行操作包括進(jìn)行檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)條件如陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的設(shè)置、試劑、標(biāo)本加樣量、孵育時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌程序和次數(shù)等。4．標(biāo)本質(zhì)量在實(shí)驗(yàn)前必須檢查所有待檢標(biāo)本的質(zhì)量，如有脂血、溶血或污染的標(biāo)本原則上不能使用，必須重新采集標(biāo)本。若無法重新采集標(biāo)本，必須在室主管批準(zhǔn)下使用，在檢測(cè)結(jié)果中應(yīng)該注明該份標(biāo)本的情況。5．標(biāo)本使用冰凍的標(biāo)本待全部融化后必須充分搖勻。質(zhì)控血清1．內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清是指每個(gè)試劑盒內(nèi)廠方提供的一套陰性和陽性對(duì)照

2．外部對(duì)照質(zhì)控血清外部對(duì)照質(zhì)控血清是各級(jí)實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)控每次檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及檢驗(yàn)試劑盒批間差異而設(shè)置的一套陰性和陽性對(duì)照血清。設(shè)立外部對(duì)照還可以提示標(biāo)本處于臨界值狀態(tài)時(shí)的檢驗(yàn)操作情況。

（1）

外部對(duì)照質(zhì)控血清的組成

理想的外部對(duì)照應(yīng)該包括陽性對(duì)照、弱陽性對(duì)照、臨界值對(duì)照和陰性對(duì)照。在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置一個(gè)單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽性對(duì)照。這個(gè)弱陽性對(duì)照的值以設(shè)定在該試劑盒Cut-off值的2－3倍為宜。（2）外部對(duì)照質(zhì)控血清的來源和選擇1）通過向有關(guān)機(jī)構(gòu)購(gòu)買獲得2）通過實(shí)驗(yàn)室制備獲得(比較經(jīng)濟(jì)的方法)①混合試劑盒內(nèi)部對(duì)照血清，等量分裝。②混合HIV抗體陽性或陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用0.2m生物濾膜過濾除菌后再進(jìn)行56℃30分鐘加熱滅活處理。弱陽性對(duì)照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并經(jīng)標(biāo)定后得到。弱陽性對(duì)照的OD值以2－3倍于Cut-off為宜。ELISA反應(yīng)強(qiáng)度曲線OD樣品強(qiáng)度（3）外部對(duì)照質(zhì)控血清的保存

1）外部對(duì)照血清或血漿的一次制備量應(yīng)該足夠本實(shí)驗(yàn)室一年使用2）外部對(duì)照血清應(yīng)該均一、無菌3）外部對(duì)照血清標(biāo)定后應(yīng)該等量分裝，每個(gè)分裝的量應(yīng)足夠一周使用4）外部對(duì)照應(yīng)該分類作好標(biāo)記，使用不同顏色的標(biāo)簽5）外部對(duì)照血清應(yīng)該存放在－70℃，如無條件則存放在非自動(dòng)除霜的－20℃冰箱6）外部對(duì)照血清一旦融解以后應(yīng)該存放在2－8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存。（4）外部對(duì)照質(zhì)控血清的使用

原則上每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，建立質(zhì)控圖，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)操作的一致性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)可以了解各批試劑盒之間的誤差(批間差異)。質(zhì)控圖(1)XX+SX-SX-2SX+2S建立質(zhì)控圖參數(shù)

對(duì)HIV抗體檢測(cè)(ELISA)外部對(duì)照質(zhì)控血清的評(píng)價(jià)采用多次測(cè)定的OD值的均值上下各兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的范圍，即外部對(duì)照OD值的95％可信限為x

2s。各個(gè)外部對(duì)照的標(biāo)定即確定外部對(duì)照的均值和可信限，可用幾個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)如均值(x)、標(biāo)準(zhǔn)差(s)以及變異系數(shù)(cv)來確定可信限。①算術(shù)平均值(x)代表一組OD值數(shù)的平均值。②標(biāo)準(zhǔn)差(s)③變異系數(shù)(cv)次數(shù)質(zhì)控血清ODCut-off值ODS/CO值10.1800.1051.7120.1900.1051.8130.2000.1051.9040.2280.1051.8150.1370.1051.0960.2210.1052.1070.1500.1051.4380.1700.1051.6290.1800.1052.14100.1500.1051.43110.2000.1051.90120.1420.1051.35130.2100.1052.00140.2210.1051.52150.1800.1051.71160.1900.1051.81170.1600.1051.52180.2210.1052.10190.2100.1052.00200.1500.1051.43

范例：參考鄭懷競(jìng)主編《免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)與室內(nèi)質(zhì)控》，1997年出版。

x

計(jì)算公式為：

Σx

x=──N

s

計(jì)算公式為：

∑(xn-x)2

s=───────

n－1

cv

計(jì)算公式為：

s

cv=──x100%

x

通過上表，計(jì)算S/CO值的均值（x），標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（cv）

x=1.72s=0.29cv=16.9%

根據(jù)以上數(shù)據(jù)繪制室內(nèi)質(zhì)控框架圖,開始質(zhì)量控制次數(shù)日期質(zhì)控血清ODCut-off值

S/CO值217.40.1600.1051.52227.70.1900.1051.81237.80.2000.1051.90247.110.2280.1051.81257.120.1390.1051.10267.150.2210.1052.10277.160.1500.1051.43287.180.1700.1051.62297.190.2250.1052.14質(zhì)控圖(Levey-Jennings控制圖)質(zhì)控圖的判定和分析

如果檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)時(shí)，質(zhì)控對(duì)照值超出3s，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受(失控)。

位移：如果幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(3-5次)都落在均值(中心線)的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化(失控)。

引起位移的原因有使用新批號(hào)的試劑盒、使用新試劑、實(shí)驗(yàn)員的更換、孵育溫度的改變、儀器(移液器)故障等。

趨勢(shì)：當(dāng)幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(5-7個(gè))幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱之為趨勢(shì)(失控)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準(zhǔn)確等。

發(fā)生漂移和趨勢(shì)的最常見的原因是試劑(如酶標(biāo)記物)或?qū)φ盏氖А?/p>

“即刻法”質(zhì)控

有些實(shí)驗(yàn)室不是每天進(jìn)行ELISA項(xiàng)目的檢驗(yàn)，對(duì)外部質(zhì)控血清在常規(guī)條件下連續(xù)測(cè)定20次、繪出質(zhì)控框架圖后才能進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)有很大難度。采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，只需在常規(guī)條件下對(duì)外部質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定3次，按以下統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算，如連續(xù)測(cè)定3次的結(jié)果都在控制范圍之內(nèi)，即可對(duì)第3次結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。

“即刻法”的建立參見鄭懷競(jìng)主編《免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)與室內(nèi)質(zhì)控》。具體計(jì)算方法如下：

先將測(cè)定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)

計(jì)算X和s

計(jì)算SI上限值和SI下限值SI上限=X最大值

–XSSI下限= X-X最小值

S

將SI上限、SI下限與SI值表中的數(shù)字比較。SI值表N n3s n2s N n3s n2s

3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.33 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.44 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 102.41 2.18 19 2.85 2.53 112.48 2.23 20 2.88 2.56 當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)，表示該數(shù)據(jù)處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測(cè)定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時(shí)，說明該值在2s-3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。

處于“告警”和“失控”狀態(tài)的數(shù)值應(yīng)舍去，需重新測(cè)定該外部質(zhì)控血清和病人樣本。舍去的只是本次失控的數(shù)值及同時(shí)測(cè)定的樣本，其他次測(cè)定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)檢測(cè)的數(shù)值超過20次后,不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)計(jì)算,可以轉(zhuǎn)入常規(guī)的質(zhì)控圖的質(zhì)控。

現(xiàn)以下表中的數(shù)據(jù)為例,試計(jì)算S/CO值,進(jìn)行“即刻法”計(jì)算。21次質(zhì)控血清檢測(cè)S/CO值

次數(shù) S/CO值 次數(shù) S/CO值

1 1.71 12 1.35 2 1.81 13 2.00 3 1.90 14 1.52 4 1.81 15 1.71 5 1.09 16 1.81 6 2.10 17 1.52 7 1.43 18 2.10 8 1.62 19 2.00 9 2.14 20 1.43 10 1.43 21 1.52 11 1.90 在第3次測(cè)定后按“即刻法”計(jì)算：

n=3三次S/CO值從小到大排列為：

1.71 1.81 1.90

求出X=1.81,S=0.10

計(jì)算