艾滋病篩查實驗室的設置和質量管理

艾滋病篩查實驗室的設置

和質量管理xxx艾滋病檢測工作管理辦法?實驗室的設置國家艾滋病參比實驗室:中國CDC艾滋病確認中心實驗室:省CDC艾滋病確認實驗室艾滋病篩查中心實驗室:地(市)級CDC艾滋病篩查實驗室另外，在沒有檢測條件的偏遠地區(qū)因工作需要建立的現場檢測點。艾滋病檢測工作管理辦法實驗室必備條件?人員條件

?國家艾滋病參比實驗室:略

?艾滋病確認中心和確認實驗室至少由5名醫(yī)技人員組成,高級衛(wèi)生技術人員至少1名、中級2名或以上,負責確認實驗的人員需具有3年以上從事HIV抗體初篩工作經驗、接受過國家級或確認中心實驗室的技術培訓,并獲得合格證書.?篩查中心實驗室和篩查實驗室

至少由3名醫(yī)技人員組成，具有中級衛(wèi)生技術職稱人員至少1名。負責篩查試驗的人員需具有2年以上從事血清學檢測工作經驗，接受過省確認中心實驗室的技術培訓，并獲得合格證書。（現場篩查點：有1名以上的技術人員，且經過確認中心實驗室培訓合格。）艾滋病檢測工作管理辦法建筑條件和設備條件國家艾滋病參比實驗室（略）艾滋病確認中心和確認實驗室（略）■艾滋病篩查中心實驗室和篩查實驗室有獨立實驗用房或專用檢測臺，分為清潔區(qū)和污染區(qū)。配備篩查試驗所需設備，包括酶標儀、洗板機、移液器、普通冰箱、離心機；消毒與污物處理設備；安全防護用品；有條件的還應配備實驗室恒溫設備。篩查中心實驗室應配備低溫冰箱。艾滋病檢測工作管理辦法實驗室的任務國家艾滋病參比實驗室（略）艾滋病確認中心實驗室和確認實驗室（略）艾滋病篩查中心實驗室

(1)承擔轄區(qū)內艾滋病病毒抗體的篩查任務。

(2)負責轄區(qū)內陽性反應標本的復檢，及時將需要做確認試驗的標本轉送確認實驗室。

(3)負責轄區(qū)內艾滋病篩查實驗室的技術培訓和指導。

(4)按規(guī)范要求開展檢測前后咨詢和培訓。艾滋病篩查實驗室

(1)承擔本地區(qū)艾滋病抗體篩查任務。

(2)負責將篩查陽性反應標本送艾滋病篩查中心實驗室復檢或直接送確認實驗室確認。

(3)按規(guī)范要求開展檢測前后咨詢。

HIV抗體初篩檢測的必要條件?經省級衛(wèi)生行政部門批準的艾滋病初篩實驗室?嚴格執(zhí)行衛(wèi)生部《全國艾滋病檢測工作規(guī)范》(1997)和中國CDC《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》(2003年5月)艾滋病檢測工作管理辦法艾滋病篩查實驗室的審批1、在人員條件和實驗室硬件均符合《全國艾滋病檢測工作規(guī)范》要求的前提下，擬申請艾滋病篩查實驗室的單位，須填寫艾滋病篩查實驗室申請表，一式三份，報當地衛(wèi)生行政部門簽署意見后，交省疾病預防控制中心確認實驗室。2、省CDC組織專家3人進行現場考核與驗收，如符合申報條件則會形成意見報省級衛(wèi)生行政部門。3、經省級衛(wèi)生行政部門批準后方可成為艾滋病初篩實驗室。質量管理

(Qualitymanagement,QM)

對確定和達到質量要求所需的職能和活動的管理。是制定和實施質量方針的一系列管理職能，通過質量體系來實現質量管理。實驗室質量管理包括質量保證、質量控制和質量評價。質量保證

(QualityAssurance,QA)

（一）

定義質量保證是指從接收檢驗標本起，到實驗室發(fā)出報告止，為確保實驗室最終報告結果的正確性所進行的全過程，包括采取各種行政和技術上的措施和方法。為了提供足夠的信任,表明實體能夠滿足質量要求.而在質量體系中實施,并根據需要進行證實的,全部有計劃和有系統(tǒng)的活動(GB/T65831994)

為確保實驗室所報告的最終結果的正確性所采取的所有程序控制(逆轉錄病毒檢驗實驗室診斷及基本的質量控制里爾.康斯坦丁)質量保證

質量保證是確保實驗結果質量的基本條件，其實施程度直接影響試驗結果和最后報告的每個參數。質量保證取決于良好的質量控制程序，并經良好的質量評價程序加以鑒定。因此，要求所有的實驗室工作人員有責任時刻注意解決影響實驗結果的每個環(huán)節(jié)上可能出現的問題。

質量保證管理是關鍵(組織結構、崗位責任)硬件要規(guī)范（試劑、儀器、實驗室環(huán)境）人員要合格(人員素質與培訓)操作按文件（制度、操作指導、質量控制及質量記錄）５．HIV檢測實驗室文件和文件管理要求（1）建立標準操作程序文件(SOP)（2）建立實驗原始記錄表

（3）建立HIV抗體檢測程序（4）填寫檢測結果表（5）建立標本的登記記錄

實驗室收到標本后，有關參數應該及時登記在標本的登記記錄中，包括受檢者的姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結果(包括初篩、復檢、確證)、送檢日期、報告日期、備注(必要時記錄通信地址)。５．HIV檢測實驗室文件和文件管理要求（6）建立HIV陽性標本的保存記錄記錄中填寫陽性標本血清/血漿的儲存量、標本儲存溫度、標本儲存起始時間以及標本保管人姓名。所有經確認的陽性標本，包括實驗室留存的標本，應送省級HIV抗體確認中心或省級衛(wèi)生行政部門指定的單位保存，不得擅自處理。（7）建立實驗室安全措施參見《規(guī)范》附件一，第9頁。（8）文件存檔原始記錄包括實驗原始記錄表、打印數據、膜反應條帶或其照片、檢測記錄表、標本登記記錄、標本保存記錄以及儀器設備維修和校準記錄等重要記錄都應該妥善存檔保存15年以上。推薦同時使用計算機保存各種文件和記錄。內含病人姓名的所有工作記錄一定要保密，參見《規(guī)范》第8頁。

質量控制

(QualityControl,QC)

（一）

定義質量控制是指為確保實驗工作正常進行而在每一次實驗過程中必須采取的各種措施。

為達到質量要求所采取的作業(yè)技術和活動.1.質量控制包括作業(yè)和活動,其目的在于監(jiān)視過程,并排除質量環(huán)節(jié)中所有階段中導致不滿意的原因,以取得經濟效益.2.質量控制和質量保證的某些活動是相互聯系的.(GB/T65831994)在每一次實驗過程中所必須采取的一切監(jiān)測手段以確保實驗工作的正常進行(逆轉錄病毒檢驗實驗室診斷及基本的質量控制里爾.康斯坦丁)實驗前質量控制①采集標本前病人的準備；②正確的標本采集方法；③準確及時的運送標本；④實驗前正確地處理和保存標本。實驗中質量控制①質控品的準備；②試劑盒的評價；③開展Levey-Jennings質控圖質控（或“即刻法”質控）。

實驗后質量控制①實驗后準確填寫檢驗結果；②及時發(fā)出報告；③正確地解釋檢驗結果的臨床意義?；疽髽藴?．試劑種類必須使用經衛(wèi)生部批準或注冊，經過中國藥品生物制品檢定所批批檢定合格的國產或進口HIV抗體初篩和確認檢測試劑。初篩用的HIV檢測試劑必須是HIV－1/2混合型。在選用試劑時應優(yōu)先選擇經過臨床評估質量優(yōu)良的試劑盒。2．必須使用在有效期內且保存條件符合要求的診斷試劑3．必須按照SOP中規(guī)定的要求進行操作包括進行檢測的實驗條件如陽性對照和陰性對照的設置、試劑、標本加樣量、孵育時間、反應溫度、洗滌程序和次數等。4．標本質量在實驗前必須檢查所有待檢標本的質量，如有脂血、溶血或污染的標本原則上不能使用，必須重新采集標本。若無法重新采集標本，必須在室主管批準下使用，在檢測結果中應該注明該份標本的情況。5．標本使用冰凍的標本待全部融化后必須充分搖勻。質控血清1．內部對照質控血清內部對照質控血清是指每個試劑盒內廠方提供的一套陰性和陽性對照

2．外部對照質控血清外部對照質控血清是各級實驗室為了監(jiān)控每次檢測的重復性和穩(wěn)定性以及檢驗試劑盒批間差異而設置的一套陰性和陽性對照血清。設立外部對照還可以提示標本處于臨界值狀態(tài)時的檢驗操作情況。

（1）

外部對照質控血清的組成

理想的外部對照應該包括陽性對照、弱陽性對照、臨界值對照和陰性對照。在每次實驗時應設置一個單一濃度水平的質控品即弱陽性對照。這個弱陽性對照的值以設定在該試劑盒Cut-off值的2－3倍為宜。（2）外部對照質控血清的來源和選擇1）通過向有關機構購買獲得2）通過實驗室制備獲得(比較經濟的方法)①混合試劑盒內部對照血清，等量分裝。②混合HIV抗體陽性或陰性人血清，3000轉/分鐘離心15分鐘，用0.2m生物濾膜過濾除菌后再進行56℃30分鐘加熱滅活處理。弱陽性對照可以通過使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并經標定后得到。弱陽性對照的OD值以2－3倍于Cut-off為宜。ELISA反應強度曲線OD樣品強度（3）外部對照質控血清的保存

1）外部對照血清或血漿的一次制備量應該足夠本實驗室一年使用2）外部對照血清應該均一、無菌3）外部對照血清標定后應該等量分裝，每個分裝的量應足夠一周使用4）外部對照應該分類作好標記，使用不同顏色的標簽5）外部對照血清應該存放在－70℃，如無條件則存放在非自動除霜的－20℃冰箱6）外部對照血清一旦融解以后應該存放在2－8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存。（4）外部對照質控血清的使用

原則上每一次實驗必須使用外部對照質控血清，建立質控圖，以便監(jiān)控實驗操作的一致性和結果的準確性。同時可以了解各批試劑盒之間的誤差(批間差異)。質控圖(1)XX+SX-SX-2SX+2S建立質控圖參數

對HIV抗體檢測(ELISA)外部對照質控血清的評價采用多次測定的OD值的均值上下各兩個標準差的范圍，即外部對照OD值的95％可信限為x

2s。各個外部對照的標定即確定外部對照的均值和可信限，可用幾個統(tǒng)計學參數如均值(x)、標準差(s)以及變異系數(cv)來確定可信限。①算術平均值(x)代表一組OD值數的平均值。②標準差(s)③變異系數(cv)次數質控血清ODCut-off值ODS/CO值10.1800.1051.7120.1900.1051.8130.2000.1051.9040.2280.1051.8150.1370.1051.0960.2210.1052.1070.1500.1051.4380.1700.1051.6290.1800.1052.14100.1500.1051.43110.2000.1051.90120.1420.1051.35130.2100.1052.00140.2210.1051.52150.1800.1051.71160.1900.1051.81170.1600.1051.52180.2210.1052.10190.2100.1052.00200.1500.1051.43

范例：參考鄭懷競主編《免疫學檢驗室間質評與室內質控》，1997年出版。

x

計算公式為：

Σx

x=──N

s

計算公式為：

∑(xn-x)2

s=───────

n－1

cv

計算公式為：

s

cv=──x100%

x

通過上表，計算S/CO值的均值（x），標準差（s）和變異系數（cv）

x=1.72s=0.29cv=16.9%

根據以上數據繪制室內質控框架圖,開始質量控制次數日期質控血清ODCut-off值

S/CO值217.40.1600.1051.52227.70.1900.1051.81237.80.2000.1051.90247.110.2280.1051.81257.120.1390.1051.10267.150.2210.1052.10277.160.1500.1051.43287.180.1700.1051.62297.190.2250.1052.14質控圖(Levey-Jennings控制圖)質控圖的判定和分析

如果檢驗進入質控狀態(tài)時，質控對照值超出3s，則本次實驗結果不能被接受(失控)。

位移：如果幾個連續(xù)質控對照值(3-5次)都落在均值(中心線)的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化(失控)。

引起位移的原因有使用新批號的試劑盒、使用新試劑、實驗員的更換、孵育溫度的改變、儀器(移液器)故障等。

趨勢：當幾個連續(xù)質控對照值(5-7個)幾乎按一個方向分布時稱之為趨勢(失控)，通常由參數的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準確等。

發(fā)生漂移和趨勢的最常見的原因是試劑(如酶標記物)或對照的失效。

“即刻法”質控

有些實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗，對外部質控血清在常規(guī)條件下連續(xù)測定20次、繪出質控框架圖后才能進入質控狀態(tài)有很大難度。采用“即刻法”質控統(tǒng)計方法，只需在常規(guī)條件下對外部質控血清連續(xù)測定3次，按以下統(tǒng)計方法計算，如連續(xù)測定3次的結果都在控制范圍之內，即可對第3次結果進行質控，以保證檢驗結果的質量。

“即刻法”的建立參見鄭懷競主編《免疫學檢驗室間質評與室內質控》。具體計算方法如下：

先將測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)

計算X和s

計算SI上限值和SI下限值SI上限=X最大值

–XSSI下限= X-X最小值

S

將SI上限、SI下限與SI值表中的數字比較。SI值表N n3s n2s N n3s n2s

3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.33 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.44 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 102.41 2.18 19 2.85 2.53 112.48 2.23 20 2.88 2.56 當SI上限和SI下限<n2s時，表示該數據處于控制范圍內，可以繼續(xù)往下測定，繼續(xù)重復以上各項計算；當SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時，說明該值在2s-3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當SI上限和SI下限有一值>n3s值時，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。

處于“告警”和“失控”狀態(tài)的數值應舍去，需重新測定該外部質控血清和病人樣本。舍去的只是本次失控的數值及同時測定的樣本，其他次測定值仍可繼續(xù)使用。當檢測的數值超過20次后,不必再使用“即刻法”質控統(tǒng)計計算,可以轉入常規(guī)的質控圖的質控。

現以下表中的數據為例,試計算S/CO值,進行“即刻法”計算。21次質控血清檢測S/CO值

次數 S/CO值 次數 S/CO值

1 1.71 12 1.35 2 1.81 13 2.00 3 1.90 14 1.52 4 1.81 15 1.71 5 1.09 16 1.81 6 2.10 17 1.52 7 1.43 18 2.10 8 1.62 19 2.00 9 2.14 20 1.43 10 1.43 21 1.52 11 1.90 在第3次測定后按“即刻法”計算：

n=3三次S/CO值從小到大排列為：

1.71 1.81 1.90

求出X=1.81,S=0.10

計算