高中生物選修一-菊花的組織培養(yǎng)課件

高中生物選修一--菊花的組織培養(yǎng)課件我國的傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一:菊花我國的傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一:菊花扦插嫁接壓條

扦插嫁接壓條菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)

指在無菌和人為控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。一、植物組織培養(yǎng)的概念一、植物組織培養(yǎng)的概念細(xì)胞離體①必要條件：一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件②原理:細(xì)胞的全能性A.外植體：從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分細(xì)胞、組織或器官.③相關(guān)概念:細(xì)胞離體①必要條件：一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件②原理B.脫分化：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，又稱去分化。C.再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程中重新分化根或芽等器官的過程D.愈傷組織:細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,是高度液泡化的、成無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞.B.脫分化：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過人參的愈傷組織人參的愈傷組織菠蘿的愈傷組織菠蘿的愈傷組織二、植物組織培養(yǎng)的基本過程二、植物組織培養(yǎng)的基本過程三、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難同一植物材料的年齡、保存時間的長短會影響實驗結(jié)果菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝三、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的高中生物選修一--菊花的組織培養(yǎng)課件高中生物選修一--菊花的組織培養(yǎng)課件（2）離體的植物組織和細(xì)胞對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需配制不同的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機物、植物激素（2）離體的植物組織和細(xì)胞對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，MS固體培養(yǎng)基成分及比例MS固體培養(yǎng)基成分及比例討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持培養(yǎng)基的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。

討論：你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的①常用的植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細(xì)胞分裂素類：激動素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）（3）植物激素的影響①常用的植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長素類：2，4使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長素細(xì)胞既分裂、也分化同時使用分化頻率高使用比例實驗結(jié)果生長素細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素細(xì)胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促進(jìn)愈傷組織生長②生長素和細(xì)胞分裂素作用使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂生長素/細(xì)胞分裂素高利于根和愈傷組織的形成適中利于根芽的分化生長素/細(xì)胞分裂素高利于根和愈傷組織的形成適（4）pH、溫度、光照pH控制在5.8左右溫度控制在18－22℃每日用日光燈照射12h（4）pH、溫度、光照pH控制在5.8左右植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長素細(xì)胞分裂素<生長素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光?需要光植物組織培養(yǎng)過程:離體組織或細(xì)胞植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長切取形成層無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化舉例切取無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化舉菊花的組織培養(yǎng)（一）制備MS固體培養(yǎng)基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養(yǎng)（五）移栽（六）栽培菊花的組織培養(yǎng)（一）制備MS固體培養(yǎng)基（二）外植體消毒（三）（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實驗室一般使用4℃保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備1、配制各種母液①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/mL的質(zhì)量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養(yǎng)基時，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計算用量（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分，實驗2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50mL或100mL①配制培養(yǎng)液②調(diào)pH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌2、配制培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50mL或100mL①1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒（三）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種（三）接種污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至高中生物選修一--菊花的組織培養(yǎng)課件4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件③插入時應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為7正常苗污染苗正常苗污染苗1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）在整個操作過程中，是如何來實思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實驗嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實驗嗎？答：每種材料或（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒培養(yǎng)溫度控制在18-22℃每日用日光燈光照12h（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期（五）移栽

移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移

用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時間3、移栽幼苗長壯后，移栽到土壤中（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培珍珠巖

,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。固體基質(zhì)型，含水量高、珍珠巖,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔（六）栽培

幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花（六）栽培幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況三、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)2、實例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季三、課題延伸1、一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物，也容易進(jìn)行作業(yè)：P36

1、在植物組織培養(yǎng)過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。2、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長旺盛的嫩枝？外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適