肉制品中致病菌的檢測（沙門氏菌）-致病菌檢測的方法

致病菌檢測的方法

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沙門氏菌檢驗方法二致病菌檢驗方法1.大腸埃希氏菌檢驗方法2.志賀氏菌檢驗方法3.金黃色葡萄球菌檢驗方法4.副溶血性弧菌檢驗方法5.蠟樣芽孢桿菌檢驗方法（大腸埃希氏菌檢驗方法）大腸埃希氏菌檢驗方法國標法參看食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗(GB/T4789.6)。檢測大腸桿菌及其腸毒素的新技術(shù)、新方法很多。如用K88單抗血清對糞中K88菌檢出率比常規(guī)培養(yǎng)法提高1倍，最小檢測菌量為10000cfu/mL。987P酶標單抗對糞便和腸內(nèi)容物最小檢出菌量為2000cfu/mL。對致病性大腸桿菌毒力基因檢測，過去多用動物或細胞培養(yǎng)測定，現(xiàn)可用其單抗以多種免疫學(xué)手段檢出。如用免疫磁分離法檢測牛糞便和食品標本的大腸桿菌O157：H7，可提高了大腸桿菌O157：H7感染病例的檢出率。（志賀氏菌檢驗方法志賀氏菌檢驗方法目前志賀氏菌檢驗多采用國標法(GB/T4789.5)。（金黃色葡萄球菌檢驗方法金黃色葡萄球菌檢驗方法MPN法：適用于檢測帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品。直接平板計數(shù)法：適用于檢查金黃色葡萄球菌數(shù)不小于10/g（ml）的食品增菌培養(yǎng)法：適用于檢查含有受損傷的金黃色葡萄球菌的加工食品。定量方法定性方法（副溶血性弧菌檢驗方法副溶血性弧菌檢驗方法副溶血性弧菌的檢驗多采用國標法(GB/T4789.7)（蠟樣芽孢桿菌檢驗方法）蠟樣芽孢桿菌檢驗方法蠟樣芽孢桿菌檢驗多采用國標法(GB/T4789.28)。國標法免疫學(xué)標記檢測方法

分子生物學(xué)方法其他檢測沙門氏菌的方法沙門氏菌檢驗方法（國標法）國標法GB4789.4—2016《食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》對沙門氏菌的常規(guī)檢驗包括以下5個基本步驟：預(yù)增菌和增菌；分離；生化試驗；血清學(xué)鑒定；血清學(xué)分型(選做項目)；結(jié)果與報告。免疫學(xué)標記檢測方法.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA).斑點酶聯(lián)免疫吸附法（Dot-ELISA）.免疫熒光抗體技術(shù).其它免疫學(xué)標記檢測方法（免疫學(xué)標記檢測方法）（免疫學(xué)標記檢測方法）免疫學(xué)標記檢測方法免疫標記技術(shù)就是將已知抗體或者抗原上標記上易顯示的物質(zhì)(標記分子)，通過檢測標記物反映有無抗原抗體反應(yīng),從而間接檢測出微量的抗原或者抗體。

所謂的標記分子是那些即使在超微量時也能通過特殊的方法將其檢測出來，高敏感性的標記分子主要有突光素、酶、放射性同位素3種。免疫標記技術(shù)不僅大大提高了試驗的敏感性，和光鏡或電鏡技術(shù)結(jié)合后，能對待檢物質(zhì)做精細定位，為臨床研究和診斷提供了極大的方便。（酶聯(lián)免疫吸附法）

酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)ELISA的原理是是把抗原或抗體預(yù)先結(jié)合在某種固相載體表面，然后加入受檢樣品和酶標抗原或抗體使其與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體起反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)，加入酶反應(yīng)底物后，底物被固相載體上的酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，最后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物即可確定樣品中待測物質(zhì)含量。該法靈敏度高、特異性強，可避免人為因素造成的假陰性，且能在短時間內(nèi)快速篩去大量的陰性樣品，（斑點酶聯(lián)免疫吸附法）斑點酶聯(lián)免疫吸附法（Dot-ELISA）Dot-ELISA是以纖維素膜作為固相載體的一種新型免疫檢測技術(shù)，其原理與常規(guī)ELISA法相同，可用于抗原或抗體的定性或定量檢測。其與ELISA的不同之處在于：一是將固相載體以硝酸纖維素濾膜、確酸醋酸混合纖維素濾膜、重氮節(jié)氧甲基化紙等固相化基質(zhì)膜代替，用以吸附抗原或抗體；二是顯色底物的供氫體為不溶性的，結(jié)果在基質(zhì)膜上出現(xiàn)有色斑點進行判定。該方法具有簡單、快速、靈敏、特異性強等特點,并具有較高的可重復(fù)性，而且陽性反應(yīng)色斑易于觀察,陽性檢出率也高于常規(guī)分離培養(yǎng)法，且整個操作過程不需要任何特殊儀器，適用于大批量樣品的快速檢測，可以節(jié)省大量人力、物力、財力，便于在基層單位推廣應(yīng)用（免疫熒光抗體技術(shù)）免疫熒光抗體技術(shù)免疫熒光抗體技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應(yīng)抗原。在組織或細胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光(黃綠色或橘紅色)，可以看見熒光所在的組織細胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。（其它免疫學(xué)標記檢測方法）其它免疫學(xué)標記檢測方法免疫磁性分離法是將特異性抗體偶聯(lián)在磁性顆粒表面，通過與樣品中靶細菌的特異性結(jié)合和外加磁場的作用，使靶細菌得到分離、濃縮。此技術(shù)直接檢測細菌特異性好，但靈敏度低。分子生物學(xué)方法.核酸探針.聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)(PCR).環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（LAMP）.基因芯片技術(shù)（分子生物學(xué)方法）（核酸探針）核酸探針通過酶切質(zhì)粒DNA來進行，它主要采用一定數(shù)量的限制性內(nèi)切酶，對提純質(zhì)粒的DNA酶切，分別得到不同DNA片斷，用于檢測食品中沙門氏菌的存在（聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)(PCR)）聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)(PCR)PCR技術(shù)是一項體外酶促擴增DNA技術(shù)，具有特異性強、敏感性高、操作簡便、快速高效等特點。目前，PCR技術(shù)是一種快速、簡便、特異、靈敏檢測沙門氏菌的方法。（環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)）環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（LAMP）LAMP技術(shù)的原理是針對靶基因的6

個區(qū)域按照規(guī)定的順序設(shè)計4種特異的引物，因此

LAMP

技術(shù)擴增的特異性很高，只要出現(xiàn)擴增就可以判定靶基因存在。同時，在DNA

延伸合成過程中，從

dNTP

中析出的焦磷酸離子與反應(yīng)溶液中的鎂離子結(jié)合，會產(chǎn)生白色的焦磷酸鎂沉淀。

因此只要用肉眼觀察白色混濁沉淀，就能鑒定擴增與否[25]。LAMP

技術(shù)具備操作簡單、特異性強、反應(yīng)快速、靈敏度高的特點，LAMP

技術(shù)在微生物檢測方面上得到了廣泛的應(yīng)用。（基因芯片技術(shù)）基因芯片技術(shù)基因芯片是一種固定有很多已知序列

DNA

探針的硅片或玻片。將經(jīng)過熒光標記的樣品分子與基因芯片上的

DNA探針進行雜交，通過檢測每個探針分子的熒光信號強度以得到樣品分子的數(shù)量和序列信息，基因芯片表面的

DNA

探針從幾十到幾百萬個不等，可以一次性檢測多種病原菌，并同時得到病原菌的耐藥性等情況。（噬菌體法）噬菌體法噬菌體對細菌有特殊的裂解作用。其方法是挑取鑒別培養(yǎng)基上的可疑菌落，作胨水培養(yǎng)(37℃過夜)，若菌液渾濁，作1:200稀釋，再用滅菌棉簽在烘干的瓊脂平皿上作條狀涂布，待平板菌液干燥后，用微量加樣器依次在每個區(qū)域滴加沙門氏菌噬菌體進行裂解試驗。（微量熱量測定法）