試驗(yàn)九免疫熒光染色觀察腫瘤細(xì)胞骨架課件

免疫熒光染色觀察腫瘤細(xì)胞骨架實(shí)驗(yàn)九實(shí)驗(yàn)九1實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求掌握免疫熒光技術(shù)的基本原理;了解免疫熒光技術(shù)在生命科學(xué)中的廣泛應(yīng)用.實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求掌握免疫熒光技術(shù)的基本原理;2一、實(shí)驗(yàn)的基本原理熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學(xué)顯微鏡，其基本原理是利用一定波長的激發(fā)光對樣品進(jìn)行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定波長的熒光，從而用于對樣品結(jié)構(gòu)或其組分進(jìn)行定性、定位、定量觀察檢測。抗體能特異性地識(shí)別相應(yīng)的抗原，并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生，這種特性就是許多免疫檢測方法的基礎(chǔ)。熒光技術(shù)與免疫技術(shù)的結(jié)合可用于對樣品結(jié)構(gòu)或其組分進(jìn)行定性、定位、定量觀察檢測。一、實(shí)驗(yàn)的基本原理熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學(xué)顯3試驗(yàn)九免疫熒光染色觀察腫瘤細(xì)胞骨架ppt課件4三、試劑與器材人腫瘤細(xì)胞涂片甲醇、H2O2、濾紙、PBS、正常羊血清封閉液、一抗、FITC標(biāo)記的IgG、甘油/PBS封片劑、蓋玻片熒光顯微鏡三、試劑與器材人腫瘤細(xì)胞涂片5玻片細(xì)胞置于甲醇中-10℃固定5min，室溫涼干（或冷丙酮固定5min，室溫涼干）；

PBS漂洗2min×3次；

3%H2O2室溫孵育10min（以去除細(xì)胞內(nèi)源性過氧化物酶活性）；

PBS漂洗5min×3次；

10%正常羊血清封閉液（0.1MPBS配制）室溫封閉20min；

棄封閉液（此步驟不必PBS洗滌）；

四、實(shí)驗(yàn)步驟玻片細(xì)胞置于甲醇中-10℃固定5min，室溫涼干（或冷丙酮固6用適當(dāng)比例稀釋的一抗（一般稀釋比為1:100-1:200）37℃孵育1h（或4℃孵育過夜）；

PBS漂洗5min×3次；

用適當(dāng)比例稀釋的二抗（FITC標(biāo)記的IgG）（一般稀釋比為1:100-1:200，用加有BSA的TBS－T配制）室溫孵育30min（避光黑暗條件下進(jìn)行）；

PBS漂洗5min×3次；

甘油/PBS封片劑（PBS:甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5）封片；

熒光顯微鏡或激光共聚焦掃描顯微鏡觀察拍照。

用適當(dāng)比例稀釋的一抗（一般稀釋比為1:17五、注意事項(xiàng)

1.注意各級(jí)抗體濃度的使用范圍;

2.熒光抗體孵育時(shí)要注意避光;

3.注意各步驟的漂洗要充分.五、注意事項(xiàng)

1.注意各級(jí)抗體濃度的使用范圍;

2.熒8六、作業(yè)與思考題

試述免疫熒光技術(shù)的基本原理,并描述實(shí)驗(yàn)中所觀察的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象.

思考題:

試