中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座

第十章中藥制劑分析中

新方法與新技術(shù)中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第1頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法（液上氣相色譜法、頂空分析法）對樣品基質(zhì)上方氣體成份進(jìn)行GC分析來測定這些組分在原樣品中含量頂空氣相色譜分類靜態(tài)頂空GC動態(tài)頂空GC中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第2頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法主要特點樣品前處理簡單檢測限低可分析含量低、組成復(fù)雜樣品適合用于易揮發(fā)或易分解或無法直接進(jìn)樣分析液體或固體樣品分析中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第3頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)頂空氣相色譜法應(yīng)用實例靜態(tài)頂空GC(內(nèi)標(biāo)法)測定血液中乙醇含量對照品溶液制備將10g/l乙醇貯備液稀釋10倍，精密吸收此液1ml置于10ml頂空樣品瓶中，同時精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%正丙醇水溶液），快速密封，即得。樣品制備精密吸收1ml充分混勻血樣轉(zhuǎn)移至10ml頂空樣品瓶中，同時精密加1ml內(nèi)標(biāo)溶液（0.25%正丙醇水溶液），快速密封，即得。色譜條件（略）頂空分析條件平衡溫度為50℃，平衡時間為10分鐘（快速攪拌下），閥、輸送管及定量管溫度為80℃，加壓為13.8kPa，加壓時間、充樣時間和壓力平衡時間均為0.15分鐘，定量管為1.0ml。中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第4頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)超高效液相色譜（UPLC，UltraPerformanceLiquidChromatography）主要特點固定相雙（三乙氧基硅）乙烷在硅膠中形成橋式乙基基團顆粒粒度小，僅為1.7μm耐壓，顆粒度分布范圍很窄裝柱檢測器響應(yīng)快樣品池—10mm光程（與普通HPLC相同）而體積只有500nL（普通HPLC20分之一）優(yōu)點更高分析速度，更加好分離效果和更高靈敏度，速度、靈敏度及分離度，分別是HPLC9倍、1.7倍及3倍中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第5頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)超臨界流體色譜（SFC,supercriticalfluidchromatography）以超臨界流體（低黏度、高密度以及較高擴散系數(shù)）作為流動相。對GC及HPLC檢測器均可兼容使用適合用于分析GC難以處理高沸點、不揮發(fā)性樣品分離速度較HPLC，分離效果更加好。應(yīng)用實例超臨界流體色譜法測定懷牛膝制劑中齊墩果酸含量中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第6頁

§1當(dāng)代色譜技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)多維色譜如：二維薄層色譜等氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用技術(shù)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第7頁

§2高效毛細(xì)管電泳

(HPCE,highperformancecapillaryelectrophoresis)電泳:在電解質(zhì)溶液中，位于電場中帶電離子在電場力作用下，以不一樣速度向其所帶電荷相反電極方向遷移現(xiàn)象。因為不一樣離子所帶電荷及性質(zhì)不一樣，遷移速率不一樣，可實現(xiàn)分離。1937年Tiselius(瑞典)利用自由溶液電泳將人血清提取蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和α、β、γ球蛋白1981年Jorgenson和Luckas發(fā)展了高效毛細(xì)管電泳分離分析技術(shù)(使用75μm內(nèi)徑石英毛細(xì)管和采取了高達(dá)數(shù)千伏電壓)，中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第8頁

§2高效毛細(xì)管電泳

各種電性離子在毛細(xì)管柱中遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽離子運動方向與電滲流一致ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運動方向與電滲流相反ν0=ν電滲流中性粒子運動方向與電滲流一致

可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子分離分離原理電場作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

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§2高效毛細(xì)管電泳儀器裝置電壓：0～30KV。分離柱不涂敷任何固定液，紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器可檢測到：10-19～10-21mol/L中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第10頁

§2高效毛細(xì)管電泳主要特點優(yōu)點高分辨率：理論塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬塊，甚至數(shù)千萬塊。高靈敏度：可檢測出低至10-21mol/L濃度物質(zhì)。高分析速度：可在3分鐘內(nèi)分離30種陰離子；1.7分鐘分離19種陽離子;4分鐘可分離10種蛋白質(zhì).試樣用量少：僅需幾nL（10-9L）試樣儀器簡單，操作成本低：分析一個試樣僅需幾毫升流動液中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第11頁

§2高效毛細(xì)管電泳常見毛細(xì)管電泳模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)毛細(xì)管膠束電動色譜(MECC)（膠束作為假固定相電動色譜）毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)（凝膠作為支持物，起分子篩作用）毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)（用于蛋白質(zhì)、多肽等兩性物質(zhì)分離）毛細(xì)管等速電泳(CITP)中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第12頁

§2高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用離子分析藥品分析手性化合物分析氨基酸分析核酸分析及DNA測序HPCE在中藥制劑分析中應(yīng)用生物堿測定、動物類藥材判別、指紋圖譜中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第13頁高效毛細(xì)管電泳法測定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸含量對照品溶液（略）供試品溶液配制取心舒口服液10mL，加熱濃縮至約1mL，加60%甲醇定容10mL，冰箱放置過夜，經(jīng)0.45mm濾膜濾過備用。電泳條件以熔融石英毛細(xì)管(50mm×66.5cm，有效分離長度58cm)為分離通道，以105mmol/L硼砂液為運行緩沖液，壓力進(jìn)樣50mpa，6s，毛細(xì)管柱溫度為20℃，運行電壓為0～30min:24kV，30～60min:28kV，檢測波長為210nm，毛細(xì)管柱使用前以0.1mol/L氫氧化鈉溶液、注射用水和運行緩沖液依次沖洗5,5,8min，每次電泳后以運行緩沖液沖洗8min。在此條件下，同時測定腺苷、蘆丁和阿魏酸含量。（隋印等.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志.,25(3):232-234）中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第14頁

§3原子吸收光譜

（AAS,atomabsorptionspectrometry）工作原理1）各種元素原子結(jié)構(gòu)和外層電子排布不一樣，基態(tài)

第一激發(fā)態(tài):

躍遷吸收能量不一樣——含有特征性2）各種元素基態(tài)

第一激發(fā)態(tài)

最易發(fā)生，吸收最強，最靈敏線。特征譜線(共振線)。3）利用待測元素原子蒸氣中基態(tài)原子與共振線吸收之間關(guān)系來定量分析。中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第15頁

§3原子吸收光譜工作原理中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第16頁

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀銳線光源—空心陰極燈中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第17頁

§3原子吸收光譜原子吸收光譜儀原子化系統(tǒng)—將試樣中離子轉(zhuǎn)變成原子蒸氣。原子化方法火焰法無火焰法—電熱高溫石墨管，激光冷原子化法單色器（色散元件（棱鏡、光柵），凹凸鏡、狹縫等）檢測系統(tǒng)（光電池、光電倍增管、光敏晶體管）中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第18頁

§3原子吸收光譜優(yōu)缺點優(yōu)點：原子化程度高，試樣用量少（1～100μL），可測固體及粘稠試樣，靈敏度高，檢測限10-12g/L。缺點：精密度差，測定速度慢，操作不夠簡便，裝置復(fù)雜。中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第19頁

§4中藥指紋圖譜從整體上評價中藥內(nèi)在質(zhì)量中藥指紋圖譜建立標(biāo)準(zhǔn)盡可能多覆蓋全貌特征顯著，專屬性強，重現(xiàn)性好方便操作與應(yīng)用中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第20頁

§4中藥指紋圖譜中藥（化學(xué)）指紋圖譜判別標(biāo)準(zhǔn)圖譜建立中藥材選擇選取經(jīng)品種判定正品優(yōu)質(zhì)地道藥材，確定圖譜特征參數(shù)。另搜集多產(chǎn)地，具充分代表性，符合藥用規(guī)格樣品，對圖譜特征重現(xiàn)性進(jìn)行考查。隨之搜集一些易混同或曾出現(xiàn)偽品，以所確定特征若能加以區(qū)分和識別，則更為理想。試驗樣品制備可依據(jù)藥材所含成份選定，盡可能考慮對不一樣成份兼容性，通慣用不一樣極性溶劑2～3種，制成供試品，供一組圖譜綜合判定應(yīng)用。

√注意取樣代表性與均勻性。中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第21頁

§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜判別標(biāo)準(zhǔn)圖譜建立檢測方法當(dāng)代光譜（紅外光譜，紫外光譜）色譜（氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳）其它（X光衍射）中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第22頁

§4中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜判別指紋圖譜解析研究指紋圖譜中特征信號歸屬各指紋圖譜相關(guān)性研究直觀比較相對指數(shù)、重合率、八強峰等量化數(shù)據(jù)計算機輔助中藥指紋圖譜相同度計算軟件中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第23頁

§4中藥指紋圖譜酸醇提取液中紫外吸收成份HPLC分析（λ=254nm）二甲亞砜提取液中可見吸收成份HPLC分析（λ=451nm）體外培育牛黃與天然牛黃指紋圖譜比較研究(丁崗等.中國天然藥品,,2(5)309-312）中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第24頁§5其它技術(shù)用生物檢定法來評價中藥質(zhì)量例1：用生化指標(biāo)評價中藥質(zhì)量與藥效相關(guān)性更為親密，以淀粉酶活力比較測定雞內(nèi)金、鴿內(nèi)金、鵪鶉內(nèi)金比活力，提出了量化數(shù)據(jù)。

例2：利用大蒜提取物中大蒜辣素和大蒜新素具有抗菌作用這一特點，用生物檢定方法進(jìn)行檢測，結(jié)果與氣相色譜法測定結(jié)果一致。

中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)專家講座第25頁§5其它技術(shù)

DNA分子遺傳標(biāo)識技術(shù)DNA分子---遺傳信息直接載體，物種判別更為準(zhǔn)確可靠90年代，PCR(PolymoraseCha