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Novoprotein專(zhuān)業(yè)實(shí)踐報(bào)告報(bào)告人:學(xué)號(hào):2014.1.18
熟悉、了解、掌握質(zhì)粒EGFP和LGALS1分別作為模板,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增EGFP基因和LGALS1基因,通過(guò)Novorec的方法將兩個(gè)片段同時(shí)重組到pET21a載體上的相關(guān)理論知識(shí)。綠色熒光蛋白-人LGALS1融合蛋白大腸桿菌的表達(dá)載體的構(gòu)建及純化理論學(xué)習(xí)抽提質(zhì)粒作為模板,擴(kuò)增EGFP基因和LGALS1基因,重組到pET21a載體上,表達(dá)篩選,蛋白檢測(cè),蛋白純化。實(shí)驗(yàn)操作A接菌抽提、PCR反應(yīng)、電泳檢測(cè)
BC重組、轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性鑒定D酶切過(guò)夜、電泳檢測(cè)、產(chǎn)物回收
質(zhì)粒抽提、電泳檢測(cè)
SDS電泳檢測(cè)EWesternBlot免疫印跡
FG帶His標(biāo)簽的人重組蛋白的純化
一、接菌抽提、PCR反應(yīng)、電泳檢測(cè)
Kit抽提↓
PCR反應(yīng)
↓電泳上樣檢測(cè)
質(zhì)粒抽提檢測(cè)PCR反應(yīng)檢測(cè)
二、
酶切過(guò)夜、電泳檢測(cè)、產(chǎn)物回收PCR反應(yīng)產(chǎn)物酶切↓37℃恒溫水浴鍋過(guò)夜↓配膠↓電泳檢測(cè)↓割膠回收酶切產(chǎn)物電泳檢測(cè)三、
重組、轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性鑒定目的基因、載體重組↓轉(zhuǎn)化↓挑菌、37℃培養(yǎng)↓PCR陽(yáng)性鑒定↓電泳檢測(cè)四、質(zhì)粒抽提、電泳檢測(cè)堿法抽提質(zhì)?!娪緳z測(cè)
五、SDS電泳檢測(cè)LaneA:誘前LaneB
:G-2-1LaneC:G-2-2LaneD:MarkerLaneE:G-2-3LaneF:G-2-4LaneG:G-4-1LaneH:G-4-2LaneI:G-4-3LaneJ:G-4-4AB
C
DEFGHIJ
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