局部用藥的毒性研究

局部用藥的毒性試驗(yàn)是根據(jù)局部用藥部位的解剖和生理特點(diǎn)設(shè)計(jì)(shèjì)的。

涂劑、擦劑皮膚用藥膏劑、凝膠劑

其他透皮吸收制劑常用局部用藥制劑滴眼劑、滴鼻劑噴霧劑、肌內(nèi)注射直腸和陰道制劑第二頁(yè)，共四十一頁(yè)。第一節(jié)皮膚用藥（制劑）的毒性(dúxìnɡ)研究一、皮膚組織結(jié)構(gòu)表皮(biǎopí)真皮皮下組織第三頁(yè)，共四十一頁(yè)。

皮膚(pífū)覆蓋全身。表皮較薄，厚為。角質(zhì)層

表皮顆粒層生發(fā)層真皮依附于皮下組織，厚約2mm。膠原

真皮彈性硬蛋白纖維母細(xì)胞第四頁(yè)，共四十一頁(yè)。二、化學(xué)物質(zhì)對(duì)皮膚毒性作用(zuòyòng)的類型

皮膚具有一定的保護(hù)作用，藥物及其他化學(xué)物質(zhì)對(duì)皮膚產(chǎn)生(chǎnshēng)的損害損害主要為：一）皮膚原發(fā)性刺激原發(fā)性刺激—--藥物直接作用于皮膚引起的病理性反應(yīng)。紅斑、水腫原發(fā)性刺激的表現(xiàn)水皰瘡潰瘍第五頁(yè)，共四十一頁(yè)。

強(qiáng)堿脂溶性溶劑

原發(fā)性刺激機(jī)理

鎘酸鹽銀、汞、砷等金屬(jīnshǔ)鹽

特征

有明確的毒理學(xué)量-效關(guān)系。首次接觸即可產(chǎn)生某種特征。第六頁(yè)，共四十一頁(yè)。二）皮膚致敏皮膚致敏為變態(tài)反應(yīng)，包括藥物(yàowù)致敏和光敏反應(yīng)。作用機(jī)制藥物與蛋白以共價(jià)鍵結(jié)合，具用免疫原性。藥物在光的作用下，形成半抗原性物質(zhì)。

特征沒(méi)有明確的毒理學(xué)量-效關(guān)系。再次接觸該藥物才能激發(fā)特定癥狀。第七頁(yè)，共四十一頁(yè)。三）皮膚(pífū)致癌有機(jī)大分子化合物----多環(huán)芳烴類金屬鹽----無(wú)機(jī)砷鹽第八頁(yè)，共四十一頁(yè)。三、皮膚用藥(yònɡyào)（制劑）毒性研究一）皮膚用藥急性毒性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康?觀察(guānchá)完整與非完整皮膚短期內(nèi)接觸受試物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。

2、實(shí)驗(yàn)材料

1）動(dòng)物-家兔、豚鼠、大鼠

2）受試藥物-膏劑、液體或粉末

3、試驗(yàn)方法

1）劑量選擇-3個(gè)劑量組

2）給受試物方法和觀察-涂敷固定

4、結(jié)果判斷第九頁(yè)，共四十一頁(yè)。二）皮膚用藥(yònɡyào)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康?觀察(guānchá)動(dòng)物皮膚長(zhǎng)期接觸受試物，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的異常毒性反應(yīng)。

2、實(shí)驗(yàn)材料

1）動(dòng)物-家兔、豚鼠或大鼠

2）受試藥物-膏劑、液體幾粉末

3、試驗(yàn)方法

1）劑量選擇-3個(gè)劑量計(jì)對(duì)照組

2）給受試物方法及時(shí)間-涂敷固定、每日一次至少6小時(shí)，按臨床用藥時(shí)間的3

倍時(shí)間。第十頁(yè)，共四十一頁(yè)。3）檢測(cè)項(xiàng)目-每日觀察皮膚臨床癥狀、皮膚病力學(xué)檢查；一般癥狀、血液學(xué)、血液生化指標(biāo)及病理學(xué)檢查。

4、結(jié)果判斷

進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，并應(yīng)寫明安全劑量、中毒劑量、中毒的靶器官(qìguān)以及中毒的可逆性。第十一頁(yè)，共四十一頁(yè)。三）皮膚(pífū)刺激性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康?觀察動(dòng)物皮膚接觸受試物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。

2、實(shí)驗(yàn)材料

1）動(dòng)物-家兔、豚鼠

2）受試藥物-膏劑、液體或粉末

3、試驗(yàn)方法-1g或1ml涂敷固定、于去除受試物后1、24、48和72小時(shí)(xiǎoshí)觀察涂敷部位紅腫、紅斑以及上述變化的恢復(fù)情況和時(shí)間。第十二頁(yè)，共四十一頁(yè)。皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分反應(yīng)分值反應(yīng)分值紅斑水腫無(wú)紅斑0無(wú)水腫0略見(jiàn)紅斑1稍有水腫1中度紅斑2明顯可見(jiàn)(邊緣高出皮膚)2嚴(yán)重紅斑3皮膚隆起(lónɡqǐ)水腫輪廓清晰3紫色紅斑并有焦痂形成4水中隆起＞1mm4

總分8第十三頁(yè)，共四十一頁(yè)。4、結(jié)果判斷與評(píng)價(jià)強(qiáng)度平均分值無(wú)刺激＜0.5(0-0.5)

輕度刺激＜2.0(0.5-2.0)

中度(zhōnɡdù)刺激＜4.0(0.5-4.0)

嚴(yán)重刺激＜6.0(0.5-6.0)

極嚴(yán)重刺激＞6.0(6.0-8.0)第十四頁(yè)，共四十一頁(yè)。四）皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(shìyàn)1、試驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)(tōngguò)動(dòng)物皮膚重復(fù)接觸受試物，觀察機(jī)體免疫系統(tǒng)反映在皮膚上的表現(xiàn)。2、實(shí)驗(yàn)材料

1）動(dòng)物-豚鼠

2）受試藥物-膏劑、液體不稀釋直接涂敷

3）陽(yáng)性致敏物-2,4-而硝基氯代苯

1%-致敏濃度

0.1%-激發(fā)濃度第十五頁(yè)，共四十一頁(yè)。3、試驗(yàn)方法

1）試驗(yàn)分組隨機(jī)分成三組，給藥組、賦形劑組、陽(yáng)性對(duì)照組

2）致敏接觸

0.1-0.2ml(g)涂于脫毛區(qū)，接觸6小時(shí)，第七天和14天亦同樣方法重復(fù)(chóngfù)。

3）激發(fā)接觸末次給藥后第14天，激發(fā)給藥，6、24、48和72小時(shí)觀察皮膚過(guò)敏情況。第十六頁(yè)，共四十一頁(yè)。4、結(jié)果判斷與評(píng)價(jià)皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)刺激反應(yīng)程度(chéngdù)分值刺激反應(yīng)程度(chéngdù)分值紅斑形成水腫形成無(wú)紅斑0

無(wú)水腫0輕度紅斑1

輕度水腫1中度紅斑2

中度水腫2重度紅斑3

重度水腫3水腫性紅斑4最高總分值7第十七頁(yè)，共四十一頁(yè)。致敏率分類過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度致敏率%弱致敏性0-10輕度致敏性10-30中度致敏性30-60高度致敏性60-80極度致敏性80-100

紅斑形成總分+水腫形成總分反應(yīng)平均值=

合計(jì)(héjì)動(dòng)物總數(shù)第十八頁(yè)，共四十一頁(yè)。皮膚(pífū)涂抹致癌試驗(yàn)1、試驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)材料

1）動(dòng)物-敏感品系鼠

2）受試物

3）陽(yáng)性對(duì)照藥-苯比、巴豆油3、試驗(yàn)方法

1）試驗(yàn)分組-陰性、陽(yáng)性、實(shí)驗(yàn)組

2）給藥量-每周1-2次第十九頁(yè)，共四十一頁(yè)。3）給藥方法

4）給藥后觀察4、結(jié)果判斷與評(píng)價(jià)

1）皮膚損傷(sǔnshāng)程度

2）組織病理學(xué)檢查

3）皮膚腫瘤發(fā)生率計(jì)發(fā)生率與時(shí)間的關(guān)系，評(píng)定皮膚致癌的效應(yīng)。第二十頁(yè)，共四十一頁(yè)。五）皮膚吸收(xīshōu)試驗(yàn)1、整體皮膚吸收試驗(yàn)

化合物經(jīng)皮滲透的量同皮膚微灌流量直接相關(guān)，通過(guò)測(cè)量與皮膚灌流量相關(guān)的電壓，測(cè)算出化學(xué)經(jīng)皮吸收速率。

1）LDV法

用643.8nm氦-氖激光，照射血管中流動(dòng)中的紅細(xì)胞，測(cè)量用藥前后變化(biànhuà)，測(cè)定出皮膚吸收速度。第二十一頁(yè)，共四十一頁(yè)。2）PPG法

LED射出的800-940nm紅外線照射(zhàoshè)，收集反射光轉(zhuǎn)變成電壓波譜，通過(guò)電壓波譜變化，計(jì)算皮膚吸收量的大小。第二十二頁(yè)，共四十一頁(yè)。2、離體皮膚吸收試驗(yàn)

1）靜態(tài)滲透裝置上室防藥劑，下室接受液，下室中間方皮膚并密封，藥劑放于皮膚之上，每隔一定時(shí)間后，測(cè)定接受液，計(jì)算皮膚滲透率。

2）流動(dòng)滲透裝置上述方法的改進(jìn)，接受液為血漿(xuèjiāng)或白蛋白，以5ml/小時(shí)的速度灌流，測(cè)定不同時(shí)間灌流液的藥量。以次測(cè)定皮膚的透過(guò)率。第二十三頁(yè)，共四十一頁(yè)。六）皮膚(pífū)光敏試驗(yàn)1、試驗(yàn)?zāi)康?觀察(guānchá)受試物接觸皮膚后遇光照是否有光敏反應(yīng)2、試驗(yàn)方法

1）光敏反應(yīng)試驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2）光毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)第二十四頁(yè)，共四十一頁(yè)。第二節(jié)眼睛用藥(yònɡyào)刺激性試驗(yàn)眼睛(yǎnjing)的結(jié)構(gòu)第二十五頁(yè)，共四十一頁(yè)。

角膜結(jié)膜炎炎癥(yánzhèng)角膜表面水腫上皮脫落刺激作用結(jié)膜充血、水腫灼痛、流淚、畏光

慢性結(jié)膜炎、瞼腺炎、分泌物增多第二十六頁(yè)，共四十一頁(yè)。

試驗(yàn)?zāi)康慕悄啙?húnzhuó)刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法虹膜結(jié)果與評(píng)價(jià)結(jié)膜水腫分泌物第二十七頁(yè)，共四十一頁(yè)。一）試驗(yàn)?zāi)康?mùdì)-觀察動(dòng)物眼睛接觸受試物所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)二）試驗(yàn)方法家兔，原液（原膏）加入眼睛腫0.1ml(0.1g)，閉合5-10分鐘。6、24、48和72

小時(shí)至7天眼刺激情況。三）結(jié)果與評(píng)價(jià)第二十八頁(yè)，共四十一頁(yè)。眼刺激反應(yīng)評(píng)分眼刺激反應(yīng)分值角膜渾濁0-4虹膜(hóngmó)

0-2結(jié)膜0-3水腫0-4分泌物0-3總分16第二十九頁(yè)，共四十一頁(yè)。眼刺激性評(píng)價(jià)(píngjià)標(biāo)準(zhǔn)刺激程度積分無(wú)刺激性0-3輕度(qīnɡdù)刺激性4-8中度刺激性9-12重度刺激性13-16第三十頁(yè)，共四十一頁(yè)。第三節(jié)肌內(nèi)注射用藥(yònɡyào)局部刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康?肌內(nèi)注射后藥物對(duì)肌肉的刺激性反應(yīng)情況。試驗(yàn)方法

家兔6只，一側(cè)骨四頭肌注射供試物，另一側(cè)注射生理鹽水1-2ml作為對(duì)照，48小時(shí)處死動(dòng)物，取骨四頭肌縱向剖開(kāi)，肉眼觀察，觀察注射部位刺激情況，必要時(shí)作組織(zǔzhī)病理學(xué)檢查。第三十一頁(yè)，共四十一頁(yè)。家兔(jiātù)股四頭肌肌肉組織第三十二頁(yè)，共四十一頁(yè)。結(jié)果與評(píng)價(jià)肌內(nèi)注射刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)級(jí)數(shù)刺激反應(yīng)

0給藥部位無(wú)明顯反應(yīng)

1給藥部位輕度充血，直徑0.5cm以下

2給藥部位中度(zhōnɡdù)充血，直徑1.0cm以下

3給藥部位中度充血，紅腫，肌肉有變性

4出現(xiàn)肌肉褐色變性，壞死0.5cm以下

5肌肉嚴(yán)重變性，出現(xiàn)大片壞死超過(guò)2認(rèn)為不符合規(guī)定，不可進(jìn)行肌內(nèi)注射第三十三頁(yè)，共四十一頁(yè)。第四節(jié)靜脈給藥局部(júbù)刺激性試驗(yàn)

見(jiàn)第十七章：全身用藥(yònɡyào)毒性試驗(yàn)中-血管刺激性試驗(yàn)第三十四頁(yè)，共四十一頁(yè)。第五節(jié)滴鼻劑和吸入劑的毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)一、滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康抹C觀察受試物一次滴入或吸入后對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)或死亡情況。

2、試驗(yàn)方法

3個(gè)劑量組，組距0.65-0.85,滴入或吸入

4小時(shí)(xiǎoshí)后即可以及7-14天觀察動(dòng)物。

3、結(jié)果評(píng)價(jià)第三十五頁(yè)，共四十一頁(yè)。二、滴鼻劑和吸入劑刺激性試驗(yàn)(shìyàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康?觀察受試物一次滴入或吸入后對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生的刺激反應(yīng)。

2、試驗(yàn)方法將受試物滴入或噴霧與動(dòng)物，24小時(shí)后處死動(dòng)物，觀察油污充血、紅腫等。

3、結(jié)果評(píng)價(jià)第三十六頁(yè)，共四十一頁(yè)。第六節(jié)應(yīng)用于直腸、陰道制劑的毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)一、直腸、陰道用藥急性毒性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)?zāi)康?受試物對(duì)動(dòng)物直腸或陰道產(chǎn)生的毒性反應(yīng)或死亡情況(qíngkuàng)