氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜靈對(duì)克氏原螯蝦的急性毒性及組織病理評(píng)價(jià)

氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜靈對(duì)克氏原螯蝦的急性毒性及組織病理評(píng)價(jià)

0克氏原螯蝦養(yǎng)殖的發(fā)展【研究意義】元寶蝦口感清新細(xì)膩，營(yíng)養(yǎng)豐富，價(jià)格相對(duì)較低，深受消費(fèi)者歡迎。因此，市場(chǎng)需求的增加和原元寶蝦養(yǎng)殖的快速發(fā)展。1材料和方法1.1試驗(yàn)用蝦及藥品克氏原螯蝦（P.clarkii）取自江蘇省淡水水產(chǎn)研究所揚(yáng)中基地，平均體長(zhǎng)79.46±1.56mm，平均體重23.63±1.53g。先在200L的聚乙烯水箱中暫養(yǎng)一周，每天定時(shí)定量投喂飼料，每24h換水1/2水箱。試驗(yàn)在上部外徑1090×800mm、下部外徑960×690mm、高280mm的聚乙烯塑料箱中進(jìn)行。試驗(yàn)用水為充分曝氣72h以上的自來水，水溫（18.31±0.44）℃，pH7.87±0.04，溶解氧（OD）為7.09±1.07mg/L。正式試驗(yàn)前24h停止投喂，且整個(gè)試驗(yàn)期間不投喂飼料，全程自然光照。選取附肢齊全、體質(zhì)健壯和規(guī)格統(tǒng)一的個(gè)體作為試驗(yàn)用蝦。主要試驗(yàn)藥品與試劑：氰戊菊酯（Fenvalerate）（浙江威爾達(dá)化工有限公司生產(chǎn)），有效成分含量20%，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)GB/T6695—1998；辛硫磷（Phoxim）（山東埃森化學(xué)有限公司生產(chǎn)），有效成分含量40%，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)GB9557—2008；硫醚沙星（Sulfidegatifloxacin）（北京漁經(jīng)生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)），有效成分含量80%，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為Q/TXYJS091；甲霜靈（Ridomil）（浙江禾本科技股份有限公司生產(chǎn)），有效成分含量≥98%。氰戊菊酯和辛硫磷先配成母液，再稀釋成不同濃度，現(xiàn)用現(xiàn)配。1.2測(cè)試方法1.2.1急性毒性試驗(yàn)參考GB/T31270.21—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第21部分：大型甲殼類生物毒性試驗(yàn)》中關(guān)于大型甲殼類生物的靜態(tài)試驗(yàn)法，并根據(jù)4種藥物對(duì)其他物種的LC1.2.2組織病理學(xué)觀察根據(jù)急性毒性試驗(yàn)得到的結(jié)果，分別選擇4種藥物對(duì)應(yīng)的48h-LC1.3數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析利用Excel2010和SPSS21.0對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析。采用直線內(nèi)插法計(jì)算4種供試藥物對(duì)克氏原螯蝦的回歸方程（藥物濃度為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)）、回歸方程相關(guān)系數(shù)（R）以及24、48和96h的半致死濃度（LC2結(jié)果與分析2.1克氏原螯蝦的急性毒性反應(yīng)試驗(yàn)期間，空白對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)中毒或死亡個(gè)體。所有蝦的活力好、行為正常、反應(yīng)靈敏，能正常蛻殼，且出現(xiàn)交配行為。使用玻璃棒接近時(shí)兩螯迅速張開防御，或立即跳開躲避。4種藥物浸泡下表現(xiàn)的中毒癥狀比較類似，且不同濃度組的中毒癥狀表現(xiàn)出明顯的劑量和時(shí)間效應(yīng)。中毒初期均表現(xiàn)為行動(dòng)遲緩、反應(yīng)遲鈍、機(jī)體無力，蛻殼蝦數(shù)量明顯減少，用玻璃棒接近時(shí)未見及時(shí)逃開躲避。隨著中毒時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的加大，克氏原螯蝦出現(xiàn)仰臥和側(cè)臥現(xiàn)象，其附肢能節(jié)律性擺動(dòng)但身體不能移動(dòng)，此階段沒有蝦發(fā)生蛻殼現(xiàn)象。最終的死亡個(gè)體多表現(xiàn)為弓背或身體僵直，以側(cè)臥和仰臥死亡為主。4種藥物對(duì)應(yīng)的48h-LC2.24毒性等級(jí)評(píng)價(jià)4種藥物對(duì)克氏原螯蝦的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見表1。隨著4種藥物染毒時(shí)間的推移，測(cè)算得到24、48和96h的LC依據(jù)GB/T31270.21—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》對(duì)藥物的毒性等級(jí)進(jìn)行劃分。由于氰戊菊酯和辛硫磷的96h-LC2.34在這種化學(xué)藥物的暴露條件下，原頭蝦的組織病理學(xué)觀察根據(jù)病理切片得到的圖片僅挑選部分典型且需要說明的部分，未闡述的部分不具有代表性，因此不進(jìn)行說明。2.3.1管腔擠壓導(dǎo)致的肝小管嚴(yán)重變形和細(xì)胞凋亡健康的克氏原螯蝦肝胰腺結(jié)構(gòu)由無數(shù)肝小管組成，結(jié)構(gòu)正常，分布均勻。肝小管基膜完整，上皮細(xì)胞排列緊密，管腔呈星型（圖1-1）。氰戊菊酯染毒48h后的肝小管出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。在切片邊緣位置（即肝胰腺表面），發(fā)現(xiàn)肝小管管腔呈現(xiàn)明顯皺縮現(xiàn)象；包括B細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞出現(xiàn)破裂和空泡化現(xiàn)象，在切片中心位置（肝胰腺內(nèi)部）未發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象（圖1-2）。與染毒48h相比，氰戊菊酯染毒96h除上述癥狀外還發(fā)現(xiàn)由于管腔擠壓導(dǎo)致的肝小管嚴(yán)重變形和細(xì)胞壞死的現(xiàn)象（圖1-3）。由圖1-4～圖1-8可知，辛硫磷組、硫醚沙星組和甲霜靈組均在切片邊緣位置（肝胰腺表面），發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞及其內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)泡體積明顯增大且增多，且數(shù)量最多的組別是硫醚沙星組，其次為辛硫磷組，最少為甲霜靈組，而在切片中心位置（肝胰腺內(nèi)部）未發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象。氰戊菊酯染毒48h后的肝小管出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。在切片邊緣位置（即肝胰腺表面），發(fā)現(xiàn)肝小管管腔呈現(xiàn)明顯皺縮現(xiàn)象；包括B細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞出現(xiàn)破裂和空泡化現(xiàn)象，在切片中心位置（肝胰腺內(nèi)部）未發(fā)現(xiàn)該現(xiàn)象（圖1-2）。與染毒48h相比，氰戊菊酯染毒96h除上述癥狀外還發(fā)現(xiàn)由于管腔擠壓導(dǎo)致的肝小管嚴(yán)重變形和細(xì)胞壞死的現(xiàn)象（圖1-3）。與對(duì)照組相比，辛硫磷組染毒48h后肝小管的部分R細(xì)胞顏色加深，同時(shí)出現(xiàn)呈深褐色的液泡。試驗(yàn)蝦在甲霜靈中浸泡48h后，肝小管管腔呈現(xiàn)大量褶皺，且管腔的單層柱狀細(xì)胞呈現(xiàn)增生趨勢(shì)，肝小管內(nèi)出現(xiàn)大量褐色顆粒和部分棕色的R細(xì)胞（圖1-7）。2.3.2空腔現(xiàn)象明顯由圖2-1可知，健康克氏原螯蝦肌纖維排列緊密有序，細(xì)胞核呈橢圓形，散布在肌纖維之間。氰戊菊酯組染毒48h后，克氏原螯蝦肌肉出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，主要表現(xiàn)為肌肉呈明顯的波浪化紋理且部分肌纖維斷裂溶解，最終導(dǎo)致出現(xiàn)明顯的空腔（圖2-2）。辛硫磷染毒96h后，損傷的肌肉主要表現(xiàn)為細(xì)胞排列松散且不規(guī)則，肌纖維出現(xiàn)斷裂溶解，最終導(dǎo)致明顯的空腔（圖2-3）。硫醚沙星染毒96h后，克氏原螯蝦肌肉呈現(xiàn)較輕微損傷，主要表現(xiàn)為細(xì)胞排列松散不緊密，肌纖維之間出現(xiàn)不同程度的間隙（圖2-4）。甲霜靈染毒48h后，染毒蝦的肌肉損傷較輕微，肌纖維之間出現(xiàn)不同程度的間隙（圖2-5）；甲霜靈染毒96h組的肌肉損傷比甲霜靈染毒48h組更嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為部分肌纖維失去固有形態(tài)，出現(xiàn)波浪化紋理（圖2-6）。3模型生物的選擇克氏原螯蝦分布較廣，且飼養(yǎng)管理簡(jiǎn)便，有望作為環(huán)境毒