質(zhì)譜廣泛應(yīng)用于藥物的定性鑒別課件

第二章藥物的鑒別試驗(yàn)

（Identification

）通過理化方法判別已知藥物真?zhèn)?第二章藥物的鑒別試驗(yàn)

（Identific1第一節(jié)藥物鑒別試驗(yàn)的定義與目的藥物的鑒別試驗(yàn)是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷已知藥物的真?zhèn)危撬幤焚|(zhì)量檢驗(yàn)工作中的首項(xiàng)任務(wù)。ChP2010凡例中對(duì)藥物鑒別的定義為：鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)方法，僅反映該藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)的特征，不完全代表對(duì)該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。第一節(jié)藥物鑒別試驗(yàn)的定義與目的藥物的鑒別試驗(yàn)是根據(jù)2

一.性狀(Description)1.外觀:晶型,色澤,氣味等.2.溶解度:可反映藥品純度,并作為選擇溶劑的依據(jù).方法：除另有規(guī)定外，稱取研成細(xì)粉的供試品或量取液體供試品，于25℃

2℃一定容量的溶劑中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆?；蛞旱螘r(shí)，即視為完全溶解。第二節(jié)鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目一.性狀(Description)第33.物理常數(shù):（1）熔點(diǎn):

定義→固體藥品從初熔到全熔的T,熔融分解T,藥品從固態(tài)到液態(tài)的T.方法→毛細(xì)管法,包括第一法,第二法和第三法.

例雌二醇的熔點(diǎn)為175～180℃；格列本脲的熔點(diǎn)為170～174℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。3.物理常數(shù):4

（2）比旋度:

反映手性藥物特性及純度.定義→一定

，T下，偏振光通過長(zhǎng)1dm，手性藥物含量為1g/ml的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度。[

]=100

/l?C(g/100ml)◆（3）吸收系數(shù)：

一定

，T和溶劑下，藥物在單位濃度及液層厚度（1cm）時(shí)的吸收度。C=1%(w/v)時(shí)→E,C=1mol/L時(shí)→

.

＝E×M

/101%1cm1%1cm20D（2）比旋度:1%1cm1%1cm205

二一般鑒別試驗(yàn):一類藥物

1.有機(jī)氟化物

樣品→氧瓶燃燒,H2O/NaOH吸收(F-),→pH4.3緩沖液,茜素氟藍(lán)/Ce(NO3)3→藍(lán)紫色配位化合物,λmax=610nm.

2.有機(jī)酸鹽:

◆水楊酸→酚OH與FeCl3(弱酸性)作用→紫色.

◆酒石酸→加AgNO3/NH3H2O→銀鏡.

3.芳伯氨基→重氮化-偶合反應(yīng).

二一般鑒別試驗(yàn):一類藥物

64.托烷類生物堿→發(fā)煙硝酸/KOH(s)→紫色

5.Na,K,Ca→焰色反應(yīng).

6.銨鹽：OH-/Δ

→NH3↑，紅色石蕊變藍(lán)。

7.無機(jī)酸根：Cl-加AgNO3→AgCl↓

SO42-加BaCl2→BaSO4↓

4.托烷類生物堿→發(fā)煙硝酸/KOH(s)→紫色

7

三專屬鑒別試驗(yàn)

原理：依據(jù)特有化學(xué)結(jié)構(gòu)采用特殊靈敏的定性反應(yīng)。適于：證明是哪一種藥物如司可巴比妥鑒別:1.丙二酰脲類鑒別試驗(yàn)一般2.與碘液反應(yīng)專屬三專屬鑒別試驗(yàn)

原理：8

第三節(jié).鑒別方法

一.化學(xué)法→反應(yīng)快,現(xiàn)象明顯,專屬性差.

1.顯色→FeCl3顯色(酚羥基),

異羥肟酸鐵反應(yīng)(芳酸及酯),

雙縮脲反應(yīng)(氨基醇),

重氮化-偶合反應(yīng)(芳伯氨基),

氧化還原反應(yīng).

2.沉淀→與重金屬離子反應(yīng),

與生物堿沉淀劑反應(yīng).

3.熒光→藥物在光照（UV或VIS）下發(fā)出熒光;

藥物發(fā)生反應(yīng)后光照下發(fā)出熒光

4.氣體→如NH3,CO2等

5.氧化還原反應(yīng)使試劑退色（如VitC）.

6.測(cè)定衍生物mp.第三節(jié).鑒別方法

9二光譜法1.UV-Vis(UltravioletandVisiblespectrophotometry)

適于含共軛結(jié)構(gòu)的藥物.

可供鑒別的參數(shù):

max,

min,A,E,經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性,A1/A2,

如:VitB2的鑒別:其

max為267nm,375nm和444nm;A375/A267的比值應(yīng)為0.31-0.33;A444/A267的比值應(yīng)為0.36-0.39;

BP2009阿替洛爾的UV鑒別：取本品0.100g用甲醇溶解并稀釋至100ml，取上述溶液10.0ml用甲醇稀釋至100ml。在230～350nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定，溶液顯示在275nm和282nm處有最大吸收峰，其吸收度比值為1.15～1.20。二光譜法102.IR(Infraredspectrum):專屬性強(qiáng),應(yīng)用廣泛,ChP2010采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法，USP32則采用對(duì)照品法。制樣方法:(1)壓片法,取供試品約1mg，置瑪瑙研缽中，加入干燥的溴化鉀或氯化鉀細(xì)粉約200mg，充分研磨混勻,壓片,測(cè)定時(shí)扣除用同法制成的空白(2)糊法和膜法,(3)溶液法.

原料藥鑒別采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照.ChP2010也收載了制劑的IR鑒別法,注意輔料的干擾。2.IR(Infraredspectrum11質(zhì)譜廣泛應(yīng)用于藥物的定性鑒別課件12炔諾酮νν炔諾酮νν133.NIR(Near-infraredspectrophotometry)

根據(jù)被測(cè)物質(zhì)在近紅外譜區(qū)750～2500nm(12800～4000cm-1)的特征光譜并利用適宜的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法提取相關(guān)信息后，對(duì)被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的一種技術(shù)。具有快速、準(zhǔn)確、對(duì)樣品無破壞的檢測(cè)特性，不僅可用于“離線”供試品的檢驗(yàn)，還能直接對(duì)“在線”樣品進(jìn)行檢測(cè)。(1)建立參考譜庫,(2)數(shù)據(jù)預(yù)處理,(3)數(shù)據(jù)評(píng)估,(4)數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證.

3.NIR(Near-infraredspectropho144.AAS(AtomicAbsorptionspectrophotometry)

基態(tài)原子蒸汽吸收由同一元素作陰極制成的空心陰極燈發(fā)出的特征譜線.專屬性高.5.NMR(NuclearMagneticResonance)

根據(jù)樣品指定基團(tuán)的質(zhì)子峰的化學(xué)位移和偶合常數(shù)來鑒別.ChP2010附錄也列入該方法，在新藥的研制中，如藥物結(jié)構(gòu)確證，更是重要的定性分析方法之一。4.AAS(AtomicAbsorptionspectr15

6MS(MassSpectrometry)

真空狀態(tài)下,將樣品離子化(EI,CI,FAB)并進(jìn)一步打成碎片,按正離子的質(zhì)荷比(m/z)大小分離而實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)分析.ChP2010、USP32、BP2009均收載了質(zhì)譜法。質(zhì)譜廣泛應(yīng)用于藥物的定性鑒別。解析重點(diǎn)：分子離子，碎片離子，同位素離子峰，亞穩(wěn)離子峰，準(zhǔn)分子離子峰。6MS(MassSpectrome167X射線粉末衍射

當(dāng)X射線照射到晶格排列整齊的晶體上時(shí)，在一些方向產(chǎn)生反射→X射線衍射，由布拉格方程求出晶面間距，并求出鍵長(zhǎng),鍵角，最后畫出分子結(jié)構(gòu)2dhklsin

=n

衍射角2

,面間距dhkl；hkl為晶面指數(shù)，即晶面與晶軸截距的倒數(shù)之比，也叫密勒指數(shù)。7X射線粉末衍射17三色譜法

1.TLC(Thin-layerChromatography)(1)一般用同濃度對(duì)照品對(duì)照法,比較Rf值(2)樣液+同體積對(duì)照液→應(yīng)顯單一斑點(diǎn)(3)樣液和結(jié)構(gòu)相近的對(duì)照藥物分別點(diǎn)樣,兩者的Rf值應(yīng)不同.(4)樣液+結(jié)構(gòu)相近的對(duì)照藥物后點(diǎn)樣,應(yīng)顯二個(gè)分離的斑點(diǎn).分離效能：在對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相似藥物的對(duì)照品制成混合對(duì)照溶液的色譜圖中，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。Rf=l/l0三182.HPLC(HighPressureLiquidChromatography)和GC(GasChromatography).(tR)四顯微鑒別法顯微鑒別主要用于中藥及其制劑的鑒別，通常采用顯微鏡對(duì)藥材的（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片，以及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。

五生物學(xué)法.利用微生物或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行鑒別.主要用于抗生素、生化藥物以及中藥的鑒別。

2.HPLC(HighPressureLiquid19六、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法

中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的、可量化的色譜鑒定手段。借以鑒定真?zhèn)危u(píng)價(jià)藥材和成品質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性。基本屬性是“整體性”和“模糊性”。不強(qiáng)調(diào)個(gè)體的絕對(duì)唯一性，而強(qiáng)調(diào)同一藥材群體的相似性。相似性是通過色譜的整體性和模糊性來體現(xiàn)，這是中藥色譜指紋圖譜分析的最基本的屬性。六、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法20分析色譜指紋圖譜強(qiáng)調(diào)的是“準(zhǔn)確的辨認(rèn)”（accuraterecognition）而不是“精密的計(jì)算”（precisecalculation）；比較圖譜強(qiáng)調(diào)的是相似（similarity）而不是相同（identity）。在不可能將中藥復(fù)雜成分都搞清楚的情況下，指紋圖譜的作用主要是反映復(fù)雜成分的中藥及其制劑內(nèi)在質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。分析色譜指紋圖譜強(qiáng)調(diào)的是“準(zhǔn)確的辨認(rèn)”（accur21

第四節(jié).鑒別試驗(yàn)條件和方法驗(yàn)證

(一)濃度→與方法靈敏度有關(guān),影響所觀察的現(xiàn)象.

(二)溫度→影響反應(yīng)速度,藥物穩(wěn)定性.

(三)酸堿度→影響藥物離解度.

(四)時(shí)間→改變條件使反應(yīng)盡快完成.

第四節(jié).鑒別試驗(yàn)條件和方法驗(yàn)證

(一)濃度→22