DNA的粗提取與鑒定（課件）

探究·實(shí)踐DNA的粗提取與鑒定DNA的粗提取與鑒定探究·實(shí)踐1.可以利用DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)在理化性質(zhì)方面的差異，對它們進(jìn)行提取。DNA不溶于（冷）酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。DNA在不同NaCl溶液中的溶解度不同，可溶于2M的NaCl溶液中。2.在一定的溫度下（沸水浴），DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色。實(shí)驗(yàn)原理目的要求1.了解DNA的物理和化學(xué)性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學(xué)會DNA粗提取的方法以及用二苯胺試劑對DNA進(jìn)行鑒定。DNA的粗提取與鑒定探究·實(shí)踐1.材料：新鮮洋蔥（也可以選擇香蕉、菠菜、菜花和豬肝等作為實(shí)驗(yàn)材料，提取DNA的方法可能稍有不同）、研磨液、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑和蒸餾水等。研磨液和二苯胺試劑的配方如下圖所示。材料用具2.用具：燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。DNA的粗提取與鑒定探究·實(shí)踐實(shí)驗(yàn)步驟研磨加酒精析出溶解與鑒定提取上清液洋蔥切碎＋10mL研磨液，充分研磨。研磨不充分，會使DNA分子不能從細(xì)胞核中釋放出來，從而影響提取的DNA含量。2.雙層紗布過濾，4℃放置幾分鐘，取上清液。問2：過濾能用濾紙代替嗎？不可以，因?yàn)镈NA會被吸附到濾紙上而大量損失。問3：上清液中可能含有哪些物質(zhì)？問1：充分研磨的目的是什么？可能含有DNA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。3.在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%),靜置2～3min,溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去上面的水分;或者將溶液倒入塑料離心管中,在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min,棄上清液,將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。問4：冷卻的酒精的作用是什么？（1）抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；（2）低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。這一步的目的是蛋白質(zhì)溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。4．2M的NaCl

5mL＋絲狀物或沉淀物。再加二苯胺試劑4mL混勻，沸水浴5min，冷卻后觀察到藍(lán)色（不加DNA做對照）。試管編號A（對照組）B（實(shí)驗(yàn)組）步驟12mol/L的NaC1溶液5mL步驟2不進(jìn)行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象溶液不變藍(lán)色實(shí)驗(yàn)結(jié)論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍(lán)DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會被染成藍(lán)色實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分析1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功；如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)了失誤等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？本實(shí)驗(yàn)粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。結(jié)果分析與評價3.與其他同學(xué)提取的DNA進(jìn)行比較，看看實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何不同，分析產(chǎn)生差異的原因。實(shí)驗(yàn)結(jié)果不明顯的可能原因：①材料中的核物質(zhì)沒有充分釋放出來，如研磨不充分或蒸餾水的量不夠。②加入酒精后搖動或攪拌時過猛，DNA被破壞。③二苯胺最好現(xiàn)用現(xiàn)配，否則二苯胺變成淺藍(lán)色，影響鑒定效果。結(jié)果分析與評價【進(jìn)一步探究】

本試驗(yàn)只是對DNA進(jìn)行了粗提取，請查閱資料，了解實(shí)驗(yàn)室提取純度較高的DNA的一種方法，并與本實(shí)驗(yàn)中所使用的方法進(jìn)行比較，總結(jié)兩種方法的異同。實(shí)驗(yàn)室提取純度較高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的SDS溶液，使蛋白質(zhì)變性后與DNA分開；隨后，加入氯仿—異丙醇混合液（體積比為24:1），通過離心將蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)除去，取清液；可重復(fù)上述操作幾次，直至上清液變成透明的粘稠液體