液相色譜的新進(jìn)展-超高效液相色譜課件

液相色譜新進(jìn)展

－超高效液相色譜液相色譜新進(jìn)展

Waters公司的UPLC:UltraPerformanceLiquidChromatography(超高效液相色譜）

Agilent公司的RRLC:RapidResolutionLiquidChromatography

（快速高分離度液相色譜）一、定義：用細(xì)粒徑填料（sub-2μm)、細(xì)內(nèi)徑柱子獲得柱效高達(dá)(100,000-300,000/m)的液相色譜技術(shù)，簡(jiǎn)稱超高效液相色譜Waters公司的UPLC:一、定義：用細(xì)粒徑填料（sub為什么關(guān)注小顆粒色譜填料？根據(jù)VanDeemter方程H=A+B/v+Cv顆粒度越小，HETP越低，柱效越高，分離度越好對(duì)于小顆粒，通過(guò)高流速獲得高分離速度對(duì)于小顆粒，提高流速時(shí)HETP不會(huì)提高－提高分離速度二、基本原理為什么關(guān)注小顆粒色譜填料？根據(jù)VanDeemter方程H=節(jié)約時(shí)間節(jié)約溶劑超高靈敏度超高分離度缺點(diǎn)：高壓力AgilentRRLC約450barWatersUPLC約700bar優(yōu)點(diǎn)：三、優(yōu)缺點(diǎn)：節(jié)約時(shí)間優(yōu)點(diǎn)：三、優(yōu)缺點(diǎn)：西洋參成分的分離比對(duì)HPLCUPLC4.6×250mm，5μm2.1×50mm，1.7μm西洋參成分的分離比對(duì)HPLCUPLC4.6×250mm，5μ1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢(shì)分離度RS∝L/dp，即保持L/dp，同比縮短柱長(zhǎng),以提高分離速度提高流速－小顆粒填料的保持柱效，不降低分離度提高速度的輔助手段溫度1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢(shì)不同色譜柱和溫度的分離速度比對(duì)不同色譜柱和溫度的分離速度比對(duì)2、提高分離度和靈敏度提高L/dp

（dp變小）－提高柱效－提高分離度對(duì)于4.6×150mm，5μm色譜柱，L/dp

＝30對(duì)于4.6×150mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝83.3

-改善分離度，保持分離速度對(duì)于4.6×100mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝55.6

-改善分離度，提高速度2、提高分離度和靈敏度提高L/dp（dp變?。岣叻蛛x度：顆粒對(duì)藥物雜質(zhì)分離的影響分離度：顆粒對(duì)藥物雜質(zhì)分離的影響改善分離度和靈敏度改善分離度和靈敏度四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）1、分離目標(biāo)化合物：根據(jù)中國(guó)藥典（2005年版）確定分離人參皂苷Rg1、Re與Rb1，結(jié)構(gòu)如下：四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀2、藥典色譜條件樣品：西洋參提取液儀器：Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1％磷酸為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）色譜柱：ZORBAXSBC184.6×150mm，5μm柱溫：40oC流速：1.0mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm進(jìn)樣量：5μL2、藥典色譜條件四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agil四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）HPLC色譜柱規(guī)格:4.6x150mm，5μm,(L/dp=30)。根據(jù)L/dp值初步確定RRLC色譜柱規(guī)格：4.6x50mm，1.8μm，(L/dp≈28）故可以獲得相近的分離效率，但分離速度大大提高，并且可以改善靈敏度。3、色譜柱的選擇：四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）4、方法轉(zhuǎn)換的初步參數(shù)確定在MethodTranslator相應(yīng)欄目中輸入原始HPLC條件，包括HPLC色譜柱規(guī)格、進(jìn)樣量、流速、梯度表等參數(shù)，并選擇RRLC色譜柱的規(guī)格，即可獲得根據(jù)洗脫柱體積相同原則折算而得的RRLC分離的初步參數(shù)。四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀五、方法優(yōu)化：由于人參皂苷Rg1、Re未達(dá)到基線分離，可通過(guò)溫度進(jìn)一步優(yōu)化分離四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）五、方法優(yōu)化：四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agile應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6、RRLC色譜條件確定：RRLC色譜條件：Agilent1200高分離度快速液相色譜(RRLC)，色譜柱：ZORBAXSBC184.6x50mm,1.8um流動(dòng)相：A:0.1%H3PO4，B:乙腈，梯度分離柱溫：25oC流速：2mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm進(jìn)樣量：5μL應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）7、西洋參分析：HPLC與RRLC分離色譜圖比較四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀在RRLC系統(tǒng)上可以實(shí)現(xiàn)HPLC分離,此外還可以大幅度縮短分析時(shí)間，降低溶劑消耗，大大提高工作效率。與HPLC相比，在保持相同進(jìn)樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離靈敏度。溫度對(duì)RRLC分離影響較大，可通過(guò)調(diào)節(jié)溫度改善分離度，或加快分離速度，節(jié)約時(shí)間四、應(yīng)用實(shí)例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）8、結(jié)論在RRLC系統(tǒng)上可以實(shí)現(xiàn)HPLC分離,此外還可以大幅度縮短分五、展望及結(jié)語(yǔ)填料粒徑進(jìn)一步減小增大柱效，進(jìn)一步提高靈敏度和通量。提高溫度（流動(dòng)相的粘度和溫度成正比，適當(dāng)?shù)奶岣邷囟瓤蛇M(jìn)一步降低壓力，同時(shí)溫度升高有利于傳質(zhì)、加快吸附脫附平衡均可以帶來(lái)柱效的進(jìn)一步提高。但要注意安全性。）總