《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》實驗教學(xué)大綱

《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》實驗教學(xué)大綱

課程代碼：10271815課程名稱：組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)英文名稱：HistochemistryandImmunohistochemistry課程類別：學(xué)科基礎(chǔ)課課程性質(zhì)：選修課授課對象：白求恩醫(yī)學(xué)班開課學(xué)期：第3短學(xué)期課程學(xué)時：20學(xué)時選用教材：《組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)》（第1版）

李

和、周莉主編

人民衛(wèi)生出版社

2008年8月授課地點(diǎn)：形態(tài)學(xué)教學(xué)中心一、實驗教學(xué)目標(biāo)組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)是應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)進(jìn)行原位定性、定位或定量研究的技術(shù)，此技術(shù)已成為醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)研究中重要的研究手段之一。學(xué)生通過本課程掌握石蠟、冰凍組織切片標(biāo)本制作和HE染色、堿性磷酸酶染色和免疫組織化學(xué)SP法染色技術(shù)，同時，在實驗過程中學(xué)會發(fā)現(xiàn)問題，分析問題和解決問題。通過本課程的基本技能訓(xùn)練，掌握醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)研究思維方式和基本方法，并在實際工作中觸類旁通，靈活運(yùn)用。

二、實驗學(xué)時分配序號實驗項目名稱實驗教學(xué)類型實驗性質(zhì)實驗學(xué)時1組織標(biāo)本石蠟切片制備與HE染色綜合性實驗必修82堿性磷酸酶染色綜合性實驗必修43免疫組織化學(xué)染色SP法綜合性實驗必修54實驗設(shè)計自講、自評設(shè)計性實驗必修3總計

20

三、實驗教學(xué)內(nèi)容

實驗一

組織標(biāo)本石蠟切片制備與HE染色（8學(xué)時）PreparationandHEstainingofparaffintissuesections【實驗要求】掌握：組織標(biāo)本石蠟切片制作技術(shù)；組織切片HE染色技術(shù)。了解：組織標(biāo)本冰凍切片制作技術(shù)?！緦嶒瀮?nèi)容】1．組織標(biāo)本石蠟切片和HE染色實驗步驟原理2．組織取材、固定、脫水和透明、浸蠟、包埋、修塊、切片。3．示教：組織取材、冰凍切片。4．HE染色：烤片、脫蠟、梯度乙醇水化、蘇木精染色，伊紅染色、分色、上行梯度乙醇脫水、透明、封片。5．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實驗二

堿性磷酸酶染色（4學(xué)時）Alkalinephosphatasestaining【實驗要求】掌握：組織化學(xué)常用的堿性磷酸酶顯示方法?！緦嶒瀮?nèi)容】1．堿性磷酸酶顯示法實驗步驟原理2．使用含有氯化鈣的孵育液孵育組織切片3．硝酸鈷置換4．硫化銨處理5．顯色和封片6．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實驗三

免疫組織化學(xué)染色SP法

（5學(xué)時）Immunohistochemistrystaining:SPmethod【實驗要求】掌握：免疫組織化學(xué)SP法的基本原理、實驗步驟和注意事項；了解：免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)的基本原理、實驗步驟和注意事項。【實驗內(nèi)容】1．免疫組織化學(xué)SP法實驗步驟原理和注意事項2．免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)實驗步驟原理和注意事項3．示教：免疫熒光組織化學(xué)染色4．烤片、脫水和水化5．抗原修復(fù)、細(xì)胞膜打孔6．封閉非特異性反應(yīng)7．第一抗和第二抗體孵育；顯色劑顯色8．復(fù)染和封片9．光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并拍照

實驗四

實驗設(shè)計—課堂討論（3學(xué)時）Experimentdesign—discussion【討論要求】掌握：通過設(shè)計自己感興趣的小實驗（全文不少于2000字），掌握實驗設(shè)計的基本思路和方法。熟悉：如何在實驗中應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)。了解：醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)的多種研究方法?！居懻搩?nèi)容】1．引言（研究背景）：包括該研究領(lǐng)域國內(nèi)、外主要研究進(jìn)展概要，本實驗的目的和意義，約500字。2．實驗材料與方法：包括實驗對象（人或動物）；主要試劑和儀器設(shè)備；實驗方法中免疫組織化學(xué)或免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)需有詳細(xì)的操作流程）。3．

預(yù)期結(jié)果與結(jié)果分析。4．

學(xué)生分小組進(jìn)行自講、自評，最后教師總結(jié)和點(diǎn)評。

四、實驗成績考核與評定方式本課程實驗教學(xué)考核占總成績的50%。1．

標(biāo)本制備和染色：占總成績30%，包括

HE染色標(biāo)本、堿性磷酸酶染色和免疫組織化學(xué)染色各占10分。每位學(xué)生的三張染色切片標(biāo)本經(jīng)顯微攝影后提供照片，成績評價標(biāo)準(zhǔn)如下：照片顯示的陽性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符為4分；照片清晰為3分；照片顏色純正、構(gòu)圖美觀大方為3分。2．

實驗設(shè)計：占總成績的20%，成績評價標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）（2）實驗材料和方法（6分）：所用方法能達(dá)到實驗?zāi)康?分；在免疫組織化學(xué)或免疫熒光組織化學(xué)方法中抗體選擇正確2分；受試對象