PRRS的現(xiàn)狀及其免疫課件

PRRS的現(xiàn)狀及其免疫123456782、哺乳仔豬極高的死亡率9早產(chǎn)弱仔―由母豬妊娠后期發(fā)生經(jīng)胎盤感染所致死亡率可達(dá)60%伴有沉郁、消瘦、呼吸困難、眼結(jié)膜水腫個(gè)別病例出現(xiàn)震顫或劃槳運(yùn)動，水樣腹瀉10113、保育和育肥豬疾病復(fù)雜化12急性期表現(xiàn)為厭食、沉郁、呼吸困難、皮膚發(fā)紅、生長減緩極易繼發(fā)鏈球菌、副豬嗜血桿菌、肺炎支原體繼發(fā)感染后，藥物難以控制，死亡率高達(dá)12～20%131415164、PRRSV引起的PRDC異常嚴(yán)重17PRRSV是引起豬呼吸道疾病綜合征的原發(fā)病原之一PRRSV感染可導(dǎo)致呼吸困難、發(fā)熱和咳嗽等臨床癥狀，嚴(yán)重影響豬群的生長速度和飼料轉(zhuǎn)化率185、PRRSV導(dǎo)致其它疫苗（特別是豬瘟）免疫效果差19PRRSV影響豬瘟抗體水平的現(xiàn)象 已有報(bào)道針對PRRSV影響豬瘟抗體水平的現(xiàn)象，應(yīng)著眼于群體，若僅關(guān)注個(gè)體的對號入座與

現(xiàn)實(shí)不符―PRRSV陽性豬，豬瘟抗體不一定低PRRS活躍的豬群，豬瘟抗體合格率低―福州大北農(nóng)技術(shù)服務(wù)檢測中心對全國200多個(gè)規(guī)?；i場的母豬群跟蹤調(diào)查發(fā)現(xiàn)，母豬群

PRRS抗體不符合穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)，且S/P值離散度大于40%（變異系數(shù)），其豬瘟抗體合格率普遍低于60%20母豬群ELISA S/P值穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)21二、PRRSV的免疫機(jī)制221、體液免疫23IgM感染后5～7d出現(xiàn)，2～3周降至檢測限以下IgG感染后7～10天出現(xiàn)，4周達(dá)高峰中和抗體（NAs）感染后3周出現(xiàn)，60d達(dá)高峰，并以較低水平長期存在特異性體液免疫的局限性24許多抗體在感染后一周左右出現(xiàn)并持續(xù)存在數(shù)月，但與保護(hù)作用無關(guān)中和性抗體產(chǎn)生延遲，并以較低水平長期存在免疫后3周才出現(xiàn)低水平的中和性抗體不僅不能控制病毒的復(fù)制，反而增強(qiáng)PRRSV在肺泡巨噬細(xì)胞中的復(fù)制（抗體依賴性增強(qiáng)作用，ADE）PRRSV滅活疫苗臨床應(yīng)用的全面潰敗，能給我們更多現(xiàn)實(shí)的啟示抗體依賴性增強(qiáng)作用（ADE）25低滴度的PRRSV中和抗體（亞中和水平抗體）可引起ADEPRRSV的ADE現(xiàn)象在體外和體內(nèi)都已被證實(shí)―在培養(yǎng)物中加入一定滴度的PRRSV抗體，可

使PRRSV的增殖滴度提高10-100倍―在病毒中加入加入一定量PRRSV抗體，再注射妊娠中期的胎兒，結(jié)果比單獨(dú)注射PRRSV的致病性顯著增強(qiáng)2、特異性細(xì)胞免疫26T細(xì)胞對PRRSV的初次反應(yīng)弱PRRSV特異性的IFN-γ分泌最早在?種后3周后出，之后10周在50～100萬單位/每百萬外周血單核細(xì)

胞（PBMCs）范圍內(nèi)不規(guī)律地波動感染1年后T細(xì)胞反應(yīng)逐步增強(qiáng)在接種后48周IFN-γ分泌?增長到400～500萬單位/每百萬PBMCs一般，如PRV，接種后3周IFN-γ分泌數(shù)量在200～300萬單位/每百萬PBMCs間波動這是PRV疫苗免疫有效的根源3、巨噬細(xì)胞默許感染的改變27巨噬細(xì)胞默許感染的改變是針對PRRSV弱毒疫苗免疫假定賦予的功能―有限的研究表明是免疫調(diào)節(jié)所致，但其完整機(jī)制尚未明了實(shí)驗(yàn)室和田間表明，這種機(jī)制對PRRS的防控作用是極其脆弱的―免疫過的豬群仍然感染異源毒株發(fā)病PRRSV免疫特性的現(xiàn)實(shí)啟示28有效的體液免疫產(chǎn)生延遲，加上ADE現(xiàn)象的存在使PRRSV抗體臨床保護(hù)意義不確定細(xì)胞免疫延遲且長期處于較低水平，使PRRSV特異性細(xì)胞免疫的臨床保護(hù)只能成為奢望巨噬細(xì)胞默許感染的改變是目前大多數(shù)PRRS弱毒疫苗免疫的主要功能，保護(hù)力很脆弱特異性免疫的缺席，免疫只能讓豬群統(tǒng)一感染，這是多年來PRRS弱毒疫苗臨床免疫的尷尬。三、佐劑改良PRRSV疫苗的研究29福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸研究所P3實(shí)驗(yàn)室福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司1、試驗(yàn)概況2、細(xì)胞免疫特性研究細(xì)胞因子細(xì)胞亞型301、試驗(yàn)概況31

實(shí)驗(yàn)動物房：福州大北農(nóng)質(zhì)檢中心無菌動物房實(shí)驗(yàn)材料“藍(lán)定抗”抗原（CH1-R株弱毒）

：產(chǎn)品批號

2011002106.0TCID50/頭“藍(lán)定抗”專用佐劑

（稀釋液）：批號

2011002PRRSV強(qiáng)毒（TJ株）：5代，4～8周齡抗原抗體陰性豬，肌注

105.0TCID50/頭，觀察21d應(yīng)5/5發(fā)病，致少3/5死亡（45，5/5，4/5）實(shí)驗(yàn)動物同一母豬生產(chǎn)的，30-35日齡斷奶仔豬,

沒有免疫過任何其他疫苗實(shí)驗(yàn)前帥選項(xiàng)目：CSFV抗原Ag、抗體Ab、PRRSV抗原、抗體，PRV

gE抗體，PCV-2抗體、抗原陰性豬篩選結(jié)果32試驗(yàn)豬分組33將16頭34日齡仔豬隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組分別飼養(yǎng)于相對獨(dú)立的豬欄試驗(yàn)A組5頭：肌注

藍(lán)定抗抗原1頭份＋專用佐劑2ml試驗(yàn)B組5頭：肌注

藍(lán)定抗抗原1頭份＋常規(guī)稀釋液2ml試驗(yàn)C組5頭：空白對照組試驗(yàn)D組1頭：肌注

專用佐劑2ml62日齡，攻毒TJ株34日齡，分組－免疫23日齡，31日齡，采血檢測采血檢測確定陰性核定陰性豬

豬免疫后1、3、5、7、14、21、28天采血檢測攻毒后1、3、5、7、14、21、28天采血檢測34攻毒后至第28d試驗(yàn)豬死亡時(shí)間35363倍劑量TJ株攻毒：3×105.0TCID50/頭無菌室內(nèi)飼養(yǎng)，沒有使用抗生素2、“藍(lán)定抗”細(xì)胞免疫特性研究細(xì)胞因子檢測IL-4

(pg/ml)IFN-γIL-18IL-12/IL-23

P40細(xì)胞亞型檢測NK

(個(gè)/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts)37CD3+CD4+CD8-（Th）CD3+CD4+CD8+Th038Th1Th2CD3+CD4-CD8+（Tc+Ts）CD3+T細(xì)胞CD3+CD4-CD8-T細(xì)胞亞群的分布CD3+CD4+CD8-（Th）細(xì)胞增殖與分化IL-12,IL-18,IFN-γTh0Th1:介導(dǎo)細(xì)胞免疫Th2:介導(dǎo)體液免疫

(促進(jìn)抗體產(chǎn)生)競爭IL-4競爭39細(xì)胞因子IL-4IFN-γIL-18IL-12/IL-23

P4040檢測方法：ELISAinvitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(23.1pg/ml)R&D

(9.0pg/ml)細(xì)胞因子檢測414243IFN-γ濃度變化曲線4445#*46IL-18濃度變化IL-12/23

P40濃度變化47#細(xì)胞因子檢測總結(jié)48專用佐劑組，更多豬產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫力，攻毒后，更少豬產(chǎn)生炎癥反應(yīng)―免疫7天后，專用佐劑組，80%的豬產(chǎn)生IFN-γ，

普通稀釋液組，40%的豬產(chǎn)生IFN-γ―專用佐劑組，IL-18產(chǎn)生速度快（3－7天），濃度高，適時(shí)消減―專用佐劑組IL-12/23

P40濃度變化平穩(wěn)，表明能維持穩(wěn)定的細(xì)胞免疫狀態(tài)細(xì)胞亞型檢測細(xì)胞亞型NK

(個(gè)/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts)檢測方法方法：流式細(xì)胞技術(shù)FCM：BD

FASCalibur試劑：CD8a

PE、CD3FITC、CD4-AlexaFluor647、絕對計(jì)數(shù)

管：BD公司49機(jī)體的抗感染免疫因素50NK細(xì)胞T、Th、Ts、Tc細(xì)胞**51NK細(xì)胞濃度變化*52T細(xì)胞濃度變化*53Th細(xì)胞濃度變化*54Th細(xì)胞濃度變化**55Tc+Ts細(xì)胞濃度變化Th

/(Ts+Tc)比值變化56細(xì)胞亞型檢測總結(jié)57免疫藍(lán)定抗，對豬群非特異性