2種鹽酸氟桂利嗪膠囊生物等效性研究

2種鹽酸氟桂利嗪膠囊生物等效性研究

鹽酸二甲酯是一種抗鈣藥物，能阻止過量的鈣通過膜進(jìn)入細(xì)胞，防止細(xì)胞中的鈣超載和缺氧，導(dǎo)致大量鈣通過神經(jīng)改善，改善腦微循環(huán)和神經(jīng)代謝，抑制中風(fēng)、血小板聚集和血液粘度增加。此外，它還具有穩(wěn)定的細(xì)胞膜。臨床上用于治療腦血管及外周血管疾病,前庭功能失調(diào),偏頭痛等。本試驗(yàn)采用高效液相色譜紫外檢測(cè)法,對(duì)2種國產(chǎn)氟桂利嗪膠囊進(jìn)行人體相對(duì)生物利用度研究,并評(píng)價(jià)其生物等效性。材料和方法1藥品、固體制劑受試制劑:鹽酸氟桂利嗪膠囊,規(guī)格:每粒5mg,批號(hào):20040403,浙江南洋藥業(yè)有限公司生產(chǎn),經(jīng)浙江省藥品檢驗(yàn)所檢驗(yàn)合格;參比制劑:鹽酸氟桂利嗪膠囊(商品名:西比靈),規(guī)格:每粒5mg,批號(hào):050219203,西安楊森制藥有限公司生產(chǎn);鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品,含量>98%,由浙江南洋藥業(yè)有限公司提供;內(nèi)標(biāo),地西泮,批號(hào):115-9303,購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈、甲醇為色譜純,天津協(xié)和昊鵬色譜科技有限公司生產(chǎn);正己烷,上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司生產(chǎn);冰乙酸,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn);三乙胺,天津化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。日本島津高效液相系統(tǒng),LC10ATvp二元溶劑輸送泵,SPDM10Avp二級(jí)管陣列檢測(cè)器,CTO10Asvp柱溫箱,SCL10Avp色譜工作站。2病例選擇及用藥情況18例健康志愿者,均為男性,年齡(24±1)歲,體重(61±8)kg,均在標(biāo)準(zhǔn)體重范圍內(nèi)。受試者既往均無心、肝、腎、代謝異常等疾病史,無慢性胃腸道疾病,無吸煙、嗜酒等不良嗜好。經(jīng)全面體檢,血、尿常規(guī),肝、腎功能,X線透視,血壓及心電圖均無異常發(fā)現(xiàn)。試驗(yàn)前2周至試驗(yàn)期間未用任何其他藥物。受試者均簽署知情同意書,臨床試驗(yàn)方案經(jīng)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。3分組及治療方法本研究為單劑量給藥試驗(yàn),采用兩制劑雙周期自身對(duì)照交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。18例受試者隨機(jī)分兩組,每組9例,一組先服受試制劑,后服參比制劑;另一組先服參比制劑,后服受試制劑。周期間的間隔期為7d。受試者于試驗(yàn)前1d晚餐后開始禁食;試驗(yàn)當(dāng)日晨間空腹服用單劑量受試制劑或參比制劑20mg,藥物用溫開水200mL送服。服藥2h后方可飲水,4h后統(tǒng)一進(jìn)低脂清淡飲食。試驗(yàn)期間忌煙酒,禁飲果汁及含咖啡因類成分的飲料。避免劇烈活動(dòng)和長(zhǎng)時(shí)間臥床。4采血及轉(zhuǎn)染受試者于服藥前及服藥后0.5,1,1.5,2,2.5,3,4,6,8,12,24h自肘靜脈采血3mL,置于肝素化試管中,離心分離血漿,置-20℃冰箱保存待測(cè)。5血液中藥物濃度的測(cè)定5.1擴(kuò)散應(yīng)力-溫度vpods色譜柱:ShimpackVPODS,150mm×4.6mm;保護(hù)柱:ShimpackVPODS,10mm×4.6mm;柱溫:40℃;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):254nm;靈敏度:0.02AFUS;流速:1.0mL·min-1;流動(dòng)相:乙腈-水相(水-三乙胺-冰乙酸為1000∶20∶30)=57∶43。5.2n-fmo-1活性化合物提取取血漿1mL,加內(nèi)標(biāo)液100μL(1.1mg·L-1),混勻,加入甲醇1mL,5mol·L-1氫氧化鈉溶液100μL,渦旋10s后,再加入正己烷5mL,渦旋震蕩提取2min,4000r·min-1離心10min;吸取上層有機(jī)相4.5mL,60℃水浴氮?dú)饬飨麓蹈?殘?jiān)?00μL乙腈溶解,渦旋,以4000r·min-1離心10min,取上清液20μL進(jìn)樣。5.3血藥濃度與氟桂利嗪血漿濃度的關(guān)系取空白血漿1mL,置具塞離心管中,分別加氟桂利嗪對(duì)照品溶液,配制終濃度為5,10,20,40,80,160μg·L-1的血漿標(biāo)樣。按上述“樣品預(yù)處理”項(xiàng)處理血漿樣品,測(cè)定樣品及內(nèi)標(biāo)的峰面積,以氟桂利嗪與內(nèi)標(biāo)峰面積比值R對(duì)血藥濃度C進(jìn)行線性回歸分析,回歸方程為:R=9.673×10-3C-2.841×10-2,回歸系數(shù)r=0.9992。在濃度為5～160μg·L-1的范圍內(nèi),氟桂利嗪與內(nèi)標(biāo)峰面積比值(R)和氟桂利嗪血漿濃度(C,μg·L-1)之間具有良好的線性關(guān)系。最低檢測(cè)濃度為5μg·L-1。5.4提取回收率及精密度取空白血漿1mL,置具塞離心管中,分別加氟桂利嗪對(duì)照品溶液,配制成終濃度為5,20,160μg·L-1的血漿標(biāo)樣各3份,按上述“樣品預(yù)處理”項(xiàng)處理血漿樣品。另用流動(dòng)相配制相應(yīng)濃度氟桂利嗪溶液,不經(jīng)提取,同量進(jìn)樣。將兩組峰面積相比,計(jì)算提取回收率。上述3個(gè)濃度血漿樣品的提取回收率依次為(90.0±8.4)%,(81.8±6.7)%,(89.2±4.3)%(n=3)。配置濃度為5,20,160μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品,按上述“樣品預(yù)處理”方法操作,測(cè)定樣品及內(nèi)標(biāo)的峰面積,計(jì)算其峰面積比值(氟桂利嗪/內(nèi)標(biāo)),并按回歸方程求出對(duì)應(yīng)濃度,以檢出濃度與加入濃度的比值作為相對(duì)回收率,并以此評(píng)價(jià)本方法的準(zhǔn)確度,上述3個(gè)濃度血漿樣品的準(zhǔn)確度依次為(96.5±9.9)%,(93.1±5.8)%,(97.0±1.7)%。5.5樣品準(zhǔn)確度分別測(cè)定氟桂利嗪濃度為5,20,160μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品,按上述“樣品預(yù)處理”及測(cè)定方法操作,日內(nèi)精密度RSD分別為6.94%,2.87%,1.63%;日間精密度RSD分別為12.83%,8.17%,3.20%(n=5)。5.6血漿穩(wěn)定性測(cè)定取空白血漿分別加氟桂利嗪對(duì)照品溶液,配制成終濃度為5,20,160μg·L-1的血漿標(biāo)樣,于室溫、冰融下放置48h,冰凍(-20℃)下放置1個(gè)月后,按上述“樣品預(yù)處理”項(xiàng)處理血漿樣品后,測(cè)定樣品及內(nèi)標(biāo)的峰面積,計(jì)算其峰面積比值(氟桂利嗪/內(nèi)標(biāo)),并按回歸方程求出對(duì)應(yīng)濃度,結(jié)果測(cè)定偏差均在15%以內(nèi),表明血漿樣品較穩(wěn)定。6濃度和達(dá)峰時(shí)間采用DAS1.0程序處理血藥濃度數(shù)據(jù)并進(jìn)行計(jì)算。藥-時(shí)曲線下面積(AUC)按梯形面積法計(jì)算;峰濃度(Cmax)和達(dá)峰時(shí)間(Tmax)均為實(shí)測(cè)值。相對(duì)生物利用度(F)按公式:F=AUCT/AUCR×100%計(jì)算。AUC和Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì),并進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)和90%可信限估計(jì);Tmax用非參數(shù)法檢驗(yàn)(Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)),綜合評(píng)價(jià)2制劑的生物等效性。結(jié)果1鉻行為在選定色譜條件下,氟桂利嗪與內(nèi)標(biāo)地西泮峰形良好,分離完全,其保留時(shí)間分別為5.43和6.18min。色譜圖見圖1。2血藥濃度曲線及藥物動(dòng)態(tài)參數(shù)血漿氟桂利嗪濃度數(shù)據(jù)經(jīng)DAS1.0程序處理后得到各主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表1,受試制劑與參比制劑的平均藥-時(shí)曲線如圖2。3藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果2種鹽酸氟桂利嗪膠囊單劑量雙周期自身對(duì)照交叉給藥20mg后,以各受試者的AUC計(jì)算,受試制劑與參比制劑比較的平均相對(duì)生物利用度F0～24h為(99.5±16.9)%,F0～∞為(99.7±16.2)%。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC和Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行多因素方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn),受試制劑AUC0～24h90%置信區(qū)間為92.1%～104.9%,AUC0～∞90%置信區(qū)間為92.8%～104.9%,均在參比制劑80%～125%范圍內(nèi);受試制劑Cmax90%置信區(qū)間為89.3%～100.0%,在參比制劑70%～143%范圍內(nèi)。2制劑的Tmax經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)(Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn))無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)果表明受試制劑與參比制劑生物等效。氟桂利嗪口服、膠囊生物等效測(cè)定目前測(cè)定氟桂利嗪血藥濃度多用高效液相色譜法,也可用薄層掃描法,本試驗(yàn)采用HPLC-UV法測(cè)定氟桂利嗪的血藥濃度。在所建立的HPLC條件下,氟桂利嗪與內(nèi)標(biāo)及血漿雜質(zhì)均分離完全,峰形良好。回收率高,精密度好,且靈敏度高達(dá)5μg·L-1,說明該檢測(cè)方法可滿足人體生物利用度試驗(yàn)方法學(xué)的要求。氟桂利嗪口服易吸收,用藥劑量較小,臨床每次常用劑量為5～10mg,但血藥濃度低,在進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究時(shí),常增加給藥劑量,國內(nèi)報(bào)道該藥片劑單劑量可達(dá)到72mg,但受試者出現(xiàn)了不良反應(yīng)。由于本研究建立的HPLC法靈敏度高,因此盡管本試驗(yàn)給藥量為20mg,至給藥后24h仍能測(cè)到血藥濃度。文獻(xiàn)報(bào)道,該藥藥動(dòng)學(xué)參數(shù)值差別較大:生物半衰期的范圍在3.5～8.2h之間;膠囊劑的生物利用度高于片劑,原因可能與劑量、劑