常見新生兒疾病動物模型的特點與比較

常見新生兒疾病動物模型的特點與比較榮簫周偉近年來，隨著產(chǎn)科和新生兒重癥監(jiān)護治療技術(shù)的發(fā)展，我國早產(chǎn)兒、低出生體重兒、多胎兒的出生率有明顯增高趨勢，新生兒疾病一直是兒科疾病中研究的熱點。建立合適的動物模型是研究新生兒疾病的關(guān)鍵，可以避免在人身上進行實驗所帶來的風(fēng)險，本文就目前常見新生兒疾病的各種動物模型的特點作一綜合介紹和比較。一、實驗動物的選擇：迄今為止，用于建立新生兒疾病動物模型和進行各種相關(guān)研究的動物主要包括大鼠、小鼠、豚鼠、新西蘭白兔、綿羊、狗、豬和靈長類動物。大鼠、小鼠、豚鼠、綿羊和新西蘭白兔是常規(guī)的實驗動物，其中嚙齒類動物由于其遺傳背景清晰，容易獲得，操作簡單，重復(fù)性好，價格經(jīng)濟，使用最為廣泛，可用于發(fā)病機制、藥理學(xué)及神經(jīng)行為學(xué)等的研究。實驗動物的選擇通常以實驗?zāi)康暮蛣游锔髯缘奶攸c來決定。若實驗中需要每天抽取子代血液作為標本，就應(yīng)選擇體形大一些的動物如綿羊，以使用留置導(dǎo)管，為實驗提供方便；若進行以形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)檢測技術(shù)為基礎(chǔ)的實驗，則適宜選擇體形較小的動物；當需要設(shè)窩內(nèi)對照時，新西蘭白兔則是最佳的考慮對象，因為子兔在孕兔子宮內(nèi)有著各自的羊膜腔；選用靈長類動物如恒河猴或獼猴作研究對象的價值在于：此類動物有與人類極其相似的生物學(xué)特性和解剖結(jié)構(gòu)；豬的解剖和生理學(xué)與人類較為相似，也成為近年的研究熱點。此外，為確保實驗結(jié)果的準確性和可重復(fù)性，應(yīng)盡量選用與研究內(nèi)容相匹配的經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制的標準化實驗動物，才能排除微生物的干擾和潛在疾病對實驗結(jié)構(gòu)的影響，排除遺傳污染造成的個體差異。二、常見的新生兒疾病動物模型(一)胎兒生長受限(fetalgrowthrestriction,FGR)模型1.子宮血管結(jié)扎法：早期的做法是于孕晚期完全結(jié)扎妊娠動物的雙側(cè)子宮動脈以減少胎兒營養(yǎng)素和氧的供給［1］，但這種做法在短時間內(nèi)完全阻斷了子宮動脈的血流，死胎率高，建模成功率相對較低。目前常用的做法是部分結(jié)扎子宮動脈［2］或部分結(jié)扎子宮動脈和子宮靜脈［3］。部分阻斷法建立的FGR動物模型具有與人類FGR更為類似的病理生理學(xué)特點，并且克服了上述死胎率高、發(fā)病率低等缺點。但其操作有一定難度，尤其是部分血管結(jié)扎，扎的過緊死胎率太高，扎的過松FGR發(fā)生率太低。另外，此法是在孕晚期施加干預(yù),也就無法觀察孕早、中期營養(yǎng)供應(yīng)異常對子代生長發(fā)育的影響。2?營養(yǎng)干預(yù)法:低蛋白飲食和低能量飲食是建立FGR動物模型的常用方法，以采用低蛋白飲食法居多。低蛋白飲食組孕鼠孕期飼以含5%~8%蛋白的食物，對照組飼以含20%~25%蛋白的食物［4-6］。低能量飲食是指營養(yǎng)成分一致而實驗組動物攝入食物總量低于對照組，中度者攝入對照組50%的量，而重度者攝入30%的量，一般以對照組前Id的食物消耗量為基礎(chǔ)計算限制組當天的食物量。此法操作流程簡單，實際應(yīng)用亦很方便。但要造成胎兒發(fā)病、又不至于發(fā)生流產(chǎn)或死胎，其營養(yǎng)素的供應(yīng)量難以摸索。另外，準確把握限制營養(yǎng)素的最佳時期也較為困難。被動吸煙法：被動吸煙法是每天多次將點燃的香煙放入籠中，使孕鼠被動吸煙。吸煙可產(chǎn)生多種毒性物質(zhì)，它們均可降低胎盤灌流量及血液攜帶能力，并通過胎盤累及胎兒。被動吸煙法建立FGR動物模型的方法比較成熟，能很好的模擬臨床實際情況，且建模成功率最高［7］，已經(jīng)成為目前廣泛使用的方法。但是香煙煙霧中所含成分多而復(fù)雜，要判斷各成份的具體作用就比較困難。更生霉素法：腹腔注射更生霉素是建立FGR動物模型的另一種常用方法。更生霉素是一種周期性非特異性抗生素類抗腫瘤藥物，其選擇性地與DNA中的鳥嘌吟結(jié)合，抑制以DNA為模板的RNA多聚酶，從而抑制RNA的合成，使蛋白質(zhì)合成受阻。此法操作簡便，且FGR發(fā)病率高?？轮居碌娶逃么朔ㄑ芯繒rFGR發(fā)生率為42.12%。低氧法：低氧吸入可造成母體組織缺氧，可能影響胎盤血液供應(yīng)等使胎兒生長發(fā)育不良。制造低氧IUGR模型所用氧氣濃度有10%、14%和17%［9］，持續(xù)時間長短不一。血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)法：Thaete［10］采用給妊娠期的母鼠輸入外源性血小板活化因子的方法建立了大鼠的FGR動物模型。該研究同時發(fā)現(xiàn)，孕鼠血液中血小板活化因子水平的升高和FGR發(fā)病的嚴重情況存在一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系，即在一定限度內(nèi)，隨著血小板活化因子劑量的加大，仔鼠體重減低更明顯。但血小板及其活化因子在FGR發(fā)病中的具體作用及其相關(guān)機制尚不清楚。在上述模型中，用得最多的是動脈結(jié)扎法和營養(yǎng)干預(yù)法，限制蛋白質(zhì)方法在國內(nèi)應(yīng)用較少，主要是因飼料合成技術(shù)達不到要求。改良的子宮動脈結(jié)扎法使用頻率也較高，但手術(shù)對對照組母體和胎兒的影響大，對照組的出生體質(zhì)量相對較輕。吸煙法主要是國內(nèi)研究者使用，國外報道少。更生霉素是一種細胞毒性藥物，其毒副作用影響該種模型的廣泛應(yīng)用。低氧模型在制作低氧環(huán)境時要求較高，需要特殊的設(shè)備，使用也受到限制。血小板活化因子法的機制尚不明確，仍需進一步研究。(二)腦損傷模型1.腦白質(zhì)損傷模型基于PVL的主要病因［11］,腦白質(zhì)損傷動物模型一般分為3大類：缺氧缺血模型、宮內(nèi)感染/炎癥反應(yīng)模型和興奮毒性模型。1.1缺氧缺血模型：常見的模型動物有大鼠、綿羊、兔。最常見的是對生后1-5d的新生大鼠進行單側(cè)或雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎，術(shù)后合并或不合并吸入低氧造模［12-⑸；單側(cè)結(jié)扎術(shù)多合并吸入5.6%-8%氧氣2-4h，雙側(cè)結(jié)扎術(shù)多合并吸入6-8%氧氣30-60min。其次，可采用子宮內(nèi)缺血再灌注法，即對孕兔進行暫時性子宮動脈血流阻斷［16］;或直接對胎羊進行頸動脈血流暫時性阻斷造模［17］。近年來有學(xué)者利用3硝基丙酸(3-nitropropionicacid,3-NP)腦內(nèi)注射模擬缺氧造成腦白質(zhì)損傷［18］。3-NP是一種線粒體毒素，它不可逆的抑制琥珀酸脫氫酶活性（復(fù)合體II）和三羧酸循環(huán)，破壞氧化代謝，造成組織缺氧，從而模擬缺氧效果。1.2宮內(nèi)感染/炎癥反應(yīng)模型：常見的模型動物包括大鼠、兔和綿羊，造模方法包括腦內(nèi)和子宮內(nèi)注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）或細菌、病毒回2】］。由于LPS容易獲得，不含雜質(zhì)，目前多采用LPS造模。1.3興奮毒性模型：常見的模型動物為大鼠和小鼠，采用腦內(nèi)注射谷氨酸鹽類似物鵝膏蕈氨酸（ibotenateacid,IA）或S-bromowillardiine造模［22］,前者作用于大腦內(nèi)NMDA和代謝型受體，而后者則作用于AMPA和紅藻氨酸鹽受體。在缺氧缺血模型中以單側(cè)或雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎合并或不合并缺氧最常用，單側(cè)頸總動脈結(jié)扎合并缺氧方法操作簡單，可重復(fù)性好，病死率低，但由于單側(cè)大腦半球病變不利于進行神經(jīng)行為學(xué)實驗，故可用于自身對照；雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎合并或不合并缺氧術(shù)后大鼠體重和腦重增長幅度均低于對照組，同時腦白質(zhì)逐漸出現(xiàn)疏松變，小膠質(zhì)細胞增生，后期發(fā)生液化性壞死灶、雙側(cè)側(cè)腦室擴大，更適于進行神經(jīng)病理學(xué)研究以及藥理學(xué)研究。采用3-NP腦內(nèi)注射模擬缺氧的方法操作簡單，可重復(fù)性好，病死率為零，但病變部位局限在注射部位附近，不能模擬腦白質(zhì)彌散性病變，其應(yīng)用前景仍需進一步觀察。宮內(nèi)感染/炎癥反應(yīng)模型無論腦內(nèi)注射還是宮內(nèi)注射LPS均可造成與人類相似的腦白質(zhì)病變，且其實驗動物的病死率較缺氧缺血模型低。但是，Poggi等［23］采用孕15d的Fischer334大鼠子宮頸內(nèi)注射LPS1mg/kg造模，胎鼠出生后對其進行神經(jīng)行為學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)無論出生體重、反射、隨意運動等與對照組均無明顯差異，而神經(jīng)病理學(xué)檢查有明顯的腦白質(zhì)損傷。Roberson等［24］采用生后2~6d的Fischer334大鼠腦內(nèi)注射LPS30?120“g/kg從注射后至生后21d及生后8周對其進行神經(jīng)行為學(xué)觀察與對照組無明顯差異，而免疫組織化學(xué)檢查提示腦白質(zhì)損傷。說明單獨使用LPS對大鼠造模有局限性。興奮毒性模型是以化學(xué)損傷模擬人類腦白質(zhì)病變，不符合早產(chǎn)兒PVL的自然病理過程，但其操作簡單，病死率低，多以小鼠作為模型動物，價格經(jīng)濟，有利于進行藥理學(xué)研究，對進一步發(fā)掘PVL的治療方法有很大的幫助。新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxic-ischemicencephalopathy,HIE）模型Yagar等［25噌在2004年做過統(tǒng)計，在200多種新生丿兒HIE相關(guān)動物實驗中，大鼠應(yīng)用最廣泛（29%）,接著是豬（25%）和羊（20%）。在這些動物模型中新生大鼠被研究應(yīng)用的最廣泛，但是與腦白質(zhì)損傷動物模型不同的是，HIE模型動物日齡的選擇7日齡的大鼠進行實驗，此階段大鼠的大腦皮層神經(jīng)分層完整，少突膠質(zhì)細胞已發(fā)育成熟，白質(zhì)已有髓鞘形成，缺氧缺血損傷主要作用于神經(jīng)元細胞，造成患側(cè)的大腦皮層變薄，神經(jīng)元壞死，與HIE的病理改變相符。2.1經(jīng)典法：Vannucci等［26］對生后7d大鼠麻醉后行左頸總動脈結(jié)扎術(shù)，術(shù)后恢復(fù)4?8h后置于氧濃度為8%的密封容器中持續(xù)缺氧3.5h。該方法容易實施，在血流變化及細胞代謝紊亂等方面與出生時窒息情況很相似。新生豬由于其腦發(fā)育成熟度接近新生兒，是近年來采用較多的制備iIBD的動物模型。常用的方法是呼吸機輔助通氣吸入低濃度氧造成缺氧，合并雙側(cè)或者單側(cè)頸動脈結(jié)扎造成缺血［27］。其優(yōu)點是:（1）生后7d新生豬的腦發(fā)育成熟度與足月新生豬接近；（2）除了研究急性缺氧造成的腦損傷外，也能研究缺氧后中樞神經(jīng)系統(tǒng)的遠期預(yù)后及神經(jīng)行為的改變；(3)由于新生豬體格相對較大，適合研究缺氧后的多臟器損害。2.2局部短暫腦缺血及再灌注法：Sola等爭］對生后7d大鼠麻醉后電凝左側(cè)大腦中動脈，再用夾子夾畢左側(cè)頸總動脈lh造成大腦局部缺血，lh后去除夾子，使左頸總動脈再通，從而誘導(dǎo)再灌注形成。該模型的誘導(dǎo)過程與新生兒HIE的發(fā)病過程相似［29］，主要用于研究暫時性缺血誘導(dǎo)的單純?nèi)毖?沒有缺氧)及再灌注損傷對新生鼠大腦的影響。2.3宮內(nèi)缺氧缺血法：一種是對胎羊注射NO合酶抑制劑導(dǎo)致胎羊缺氧［30］；另一種是阻斷胎羊臍帶⑶］從而造成胎羊?qū)m內(nèi)缺氧缺血性腦損傷；還有向孕兔輸7%二氧化碳的氮氣10min使其窒息后剖宮迅速取出新生兔的方法［32］。經(jīng)典法模型只結(jié)扎一側(cè)頸總動脈，僅引起單側(cè)大腦病變，而不能使全腦及全身其他系統(tǒng)一同受損，因此不能造成臨床上嚴重窒息后引起多器官損害，有一定局限性。應(yīng)用胎羊?qū)m內(nèi)缺氧的方法可獲取豐富的神經(jīng)生理學(xué)相關(guān)資料，適用于急性及亞急性的生理及代謝機制的研究，但是操作復(fù)雜，價格昂貴；而使孕兔缺氧的方法操作簡便易行，但是模型的可靠性仍待進一步驗證。膽紅素腦病模型經(jīng)典的方法是1997年，國內(nèi)學(xué)者陳舜年等［33］建立的新生豚鼠經(jīng)腹腔注射膽紅素溶液制作膽紅素腦病模型的方法；后來也有學(xué)者采用大鼠、仔兔經(jīng)腹腔注射膽紅素溶液制作膽紅素腦病模型［34］。但是由于血腦屏障功能狀態(tài)的影響，該方法引出異常神經(jīng)行為活動及腦組織黃染現(xiàn)象的穩(wěn)定性欠佳。近年來有學(xué)者采用新生大鼠小腦延髓池注射膽紅素溶液的方法制作膽紅素腦病的動物模型［35］。該方法受血腦屏障功能狀態(tài)的影響較小，可更直接地研究膽紅素的神經(jīng)毒性。(三)肺部疾病模型肺出血模型司徒勛等［36］通過外源性五羥色胺(5-HT)氣管滴入建立新生大鼠肺出血模型，濃度以1X10-5mol/mL較為適宜。模型制作簡便，重復(fù)性好，其中彌漫性肺出血占10%~15%。研究者認為肺出血可能為5-HT氣管滴入后導(dǎo)致急性缺氧，誘導(dǎo)內(nèi)皮素-1(ET-1)分泌所致，因為ET-1參與肺動脈高壓形成及增加毛細血管通透性，內(nèi)源性ET-1的升高是導(dǎo)致肺出血的重要原因。陳克正等［37］用低溫加缺氧建立低溫、缺氧兩種病因引起肺出血的動物模型；李娟等［38］用高分子右旋糖酐靜脈注射建立高血粘滯征引起肺出血的動物模型；吳春英等［39］用腎上腺素皮下注射法，模擬臨床先天性心臟病，超量輸液致嚴重肺血管充血，建立幼齡大鼠肺出血模型；杜悅等［40］用內(nèi)毒素腹腔注射建立感染引起肺出血的動物模型。新生兒肺出血與多種因素有關(guān)，以上方法均是針對某一種因素來造模，均有一定的局限性，需根據(jù)實驗?zāi)康膩磉x擇相應(yīng)的造模方法。胎糞吸入綜合癥模型(meconiumaspirationsyndrome,MAS)將人類胎兒胎糞經(jīng)氣管導(dǎo)管注入10-12d仔豬肺內(nèi)或是成年兔的肺內(nèi)［4142］。方法簡便，可出現(xiàn)明顯的肺損傷及全身炎癥反應(yīng)，但是不能完全模擬胎糞吸入綜合癥所導(dǎo)致的肺動脈高壓等表現(xiàn)，有一定的局限性。新生兒呼吸窘迫綜合癥模型(respiratorydistresssyndrome,RDS)由于需要氣管插管機械通氣，通常采用兔、綿羊及靈長類動物等體型較大的動物作為模型動物。一般在妊娠時間達到總?cè)焉飼r間的85-90%行剖宮產(chǎn)手術(shù)取出胎兔、胎羊或胎猴的方法得到RDS模型［43-45］。支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonarydysplasia,BPD)模型將新生大鼠或小鼠持續(xù)暴露于高氧環(huán)境中(70-90%)數(shù)天［46,47］，出現(xiàn)肺損傷的病理形態(tài)學(xué)變化類似于新生兒BPD，可作為研究BPD的動物模型。還有國外學(xué)者采用基因敲除小鼠造模，以了解某一細胞因子對于BPD發(fā)病的作用［48］。(四)壞死性小腸結(jié)腸炎(necrotizingenterocolitis,NEC)模型最常用的模型動物是大鼠、小鼠和豬。大鼠是目前最常用的建模動物，它屬“晚期發(fā)育模式”動物，足月出生時胃腸道等各方面的發(fā)育尚不成熟，可用于模仿早產(chǎn)兒建立NEC模型［49］,另外大鼠NEC模型在病理變化、臨床表現(xiàn)及生化反應(yīng)方面與人較接近。小鼠由于遺傳背景清晰，主要用于基因?qū)W方面的研究。豬與嚙齒類動物相比，在解剖結(jié)構(gòu)、生理特性及物質(zhì)能量代謝等方面更接近于人，它的腸道發(fā)育過程和人相似，均在胚胎后期就已經(jīng)發(fā)育得比較成熟［49］。另外新生豬的體積較大，便于研究者對其進行手術(shù)和采血等操作。但豬的孕期及生長周期較長，價格也相對昂貴。缺氧-復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)法：利用H/R建立動物NEC模型是最先出現(xiàn)并曾廣泛應(yīng)用的方法［50‘51］。Gellen等㈤］證實窒息可使新生豬腸系膜血管及腹主動脈收縮，血流量減少，腸道水腫壞死，窒息組新生豬回盲部絨毛、隱窩及肌層的損傷與正常組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但隨著研究的深入，越來越多的學(xué)者否定了這種單因素的造模方法，Calpan等Q］報道了單純窒息的新生大鼠并未出現(xiàn)腹脹、腹瀉及便血等典型NEC表現(xiàn)，鏡下回腸絨毛排列整齊或僅頂部稍微受損隱窩及肌層等結(jié)構(gòu)完整。Sangild等［53］證實了H/R并非NEC的主要病因，只需給予人工喂養(yǎng)就能使57%的早產(chǎn)豬仔出現(xiàn)類似NEC的癥狀，腸道絨毛高度、酶活性及抗氧化能力也均降低。另外，臨床上發(fā)現(xiàn)圍生期窒息并不會引起NEC發(fā)病率的增高，兩者無必然聯(lián)系。因此，用H/R造模雖然簡便，但很少出現(xiàn)典型的NEC癥狀及腸道病理變化，亦不能模仿NEC的復(fù)雜病因，現(xiàn)已很少使用。缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)法:主要是采用腸系膜上動脈結(jié)扎法°Papparella等［54］證實I/R組的新生豬活動減少，出現(xiàn)腹脹，鏡下回腸黏膜及黏膜下層出現(xiàn)充血、水腫及壞死。Crissinger等［55］對新生豬實行腸系膜上動脈結(jié)扎(I/R各60min)后發(fā)現(xiàn)，雖然其腸道通透性增大，51Cr-EDTA清除率明顯增加，但并未引起明顯的腸道出血壞死。Chan等區(qū)］也證實單純I/R(I/R各120min及25min)后早產(chǎn)鼠和足月新生大鼠并未出現(xiàn)腹脹、，單純的I/R對腸道的損傷往往是一過性的，持續(xù)時間較為短暫，較少導(dǎo)致典型的NEC，因而這種方法的科學(xué)性受到質(zhì)疑，應(yīng)用受限。注射各種炎性介質(zhì):多年來已經(jīng)成功通過注射LPS、PAF和TNF-a建立大鼠和新生豬的NEC動物模型，但發(fā)現(xiàn)所需的劑量均較大，因此更多的是綜合運用LPS+PAF或LPS+TNF-a來建模，各介質(zhì)之間具有協(xié)同作用，用量小且效果好。建模后動物出現(xiàn)呼吸促、腹脹、腹瀉及便血等表現(xiàn)，腸道出血壞死程度也較重［57,58］。運用炎癥介質(zhì)建立的動物模型有其可取之處。首先，注射炎癥介質(zhì)造成的動物腸道損傷與人接近，病變確切且程度較重；其次，與NEC患兒在某些方面頗為相似［59,60］。但是這種方法也存在很大的缺陷:(1)NEC的真正病因并非炎癥介質(zhì)，而是各種病因?qū)е卵装Y反應(yīng)所形成的中間產(chǎn)物。(2)炎癥介質(zhì)會造成內(nèi)毒素血癥，出現(xiàn)多器官廣泛病變，影響對NEC的特異性研究。(3)其病變好發(fā)部位與NEC患兒不同，常發(fā)生于空腸，結(jié)腸和直腸并不受累。早產(chǎn)+窒息+冷刺激+人工喂養(yǎng):Barlow等首次應(yīng)用人工喂養(yǎng)+窒息+細菌定植的方式建立了新生大鼠的NEC模型，而Caplan等^］則在此基礎(chǔ)上用早產(chǎn)大鼠代替足月新生大鼠，3d后此模型出現(xiàn)腹脹、腹瀉及便血等典型的NEC癥狀，回腸均出現(xiàn)不同程度的絨毛脫落、壞死，腸腺缺失，腸穿孔等病理改變。同時還發(fā)現(xiàn)人工喂養(yǎng)+窒息組與人工喂養(yǎng)+窒息+細菌定植組造模效果并無明顯差別，證實了是否直接給予細菌定植并不影響造模效果。隨著近年來的逐漸完善,早產(chǎn)大鼠+窒息+冷刺激+人工喂養(yǎng)已成為最常用的NEC動物模型［61］。與上述其他單因素造模方法相比，此法所建模型不僅可重復(fù)性高，臨床表現(xiàn)及病理變化典型，更主要的是成功模擬了臨床上NEC的多致病因素。這種方法也有一定的局限性，早產(chǎn)或新生鼠的腸道基本無菌群聚集，而新生兒發(fā)生NEC時腸道卻已布滿了各種菌群，兩者在腸道內(nèi)環(huán)境方面有所不同，另外此模型需要頻繁的插管(3?4h1次)也增加了建模的難度。(五)新生兒視網(wǎng)膜病(retinopathyofprematurity,ROP)模型氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管模型(oxygen-inducedretinopathy,OIR)是研究視網(wǎng)膜新生血管性疾病的常用動物模型［62］,將出生后第7天的C57BL/6J小鼠置于體積分數(shù)75%±2%的高氧環(huán)境中繼續(xù)飼養(yǎng)5d，再置于普通空氣中繼續(xù)飼養(yǎng)5d,即可成模。該建模方法具有簡便、快捷、結(jié)果可靠、重復(fù)性強等特點，經(jīng)過近年來的發(fā)展，已成為應(yīng)用最廣泛的建立ROP或視網(wǎng)膜新生血管動物模型的方法。與其他建模方法ma］相比，具有簡單、穩(wěn)定和成模率高的優(yōu)點，先后有大鼠、犬、貓和小鼠等成模的報道［65-71］。小鼠遺傳背景明確，OIR新生血管發(fā)生率高達100%a］。選擇C57BL/6J新生小鼠作為研究ROP的動物模型的原因：(1)正常小鼠的視網(wǎng)膜血管在生后2周內(nèi)開始發(fā)育并成熟，這就能觀察到視網(wǎng)膜血管發(fā)育的全過程；(2)新生小鼠視網(wǎng)膜血管的發(fā)育階段相當于人類胎兒孕4?5個月時的表現(xiàn)；(3)生后第7天新生小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)育最接近人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜血管的特點，因為它的玻璃體動脈退化的程度最大，視網(wǎng)膜血管發(fā)育的程度最小，暴露于75%的高氧中第5天后，可產(chǎn)生能定量研究的視網(wǎng)膜新生血管，且該方法重復(fù)性極高。Smith等［7011994年首先建立小鼠OIR模型，接近人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的病程。但是如果將小鼠暴露于80%以上的高氧中，雖然視網(wǎng)膜的新生血管化有輕度的增加，小鼠的死亡率明顯上升，部分可能是由于母鼠死亡率明顯上升所致，所以選擇75%的氧濃度作為高氧。總之，理想的動物模型除在病因、病理、生化及臨床表現(xiàn)等各方面與人相似外，還要求其建模周期較短、可重復(fù)性強、建模方法簡單易行且成功率高。每一種動物模型均有其優(yōu)缺點，必須結(jié)合研究的目的選擇合適的模型。此外還需注意遵循“3R”原則：Reduction（減少）、Replacement（替代）和Refinement（優(yōu)化），必須獲得倫理委員會的批準方能進行動物實驗。參考文獻顏耀華，李力，俞麗麗，等.阻斷子宮動脈建立FGR大鼠模型的研究.中國實驗動物學(xué)報,2007,15:44—45.潘石蕾，余艷紅.一種新型胎兒宮內(nèi)生長遲緩大鼠動物模型.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2002,4:339-343.HagashiT，DorkoME.Aratmodelforthestudyofintrauterinegrowthretardation[J].AmJObstetGynecol，1988,158:1203.GallerJR,TonkissJ.PrenatalproteinmalnutritionandmaternalbehaviorinSprague-dawleyrats.JNutr,1991,121:762-769.SusanE,Ozanne.Metabolicprogramminginanimals.BrMedBull,2001,60:143-152.Fernandez-TwinnDS,OzanneSE,EkizoglouSC,etal.Thematernalendocrineenvironmentinthelow-proteinmodelofintra-uterinegrowthrestriction.BritishJNutrit,2003,90:815-822.周根來，陳才勇，王恬.胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩的實驗動物模型.中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2003,13:117-118.柯志勇,劉軍,丘小汕.三種宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠模型方法的比較.中國當代兒科雜志,2000,2:24-26.ParimiPS,CronigerCM,LeahyP,etal.EffectofReducedMaternalInspiredOxygenonHepaticGlucoseMetabolismintheRatFetus.PediatrRes,2003,53:325-332.ThaeteLG,NeerhofMG,JillingT,etal.Infusionofexogenousplatelet-activatingfactorproducesintrauterinegrowthrestrictionintherat.JSocGynecolInvest,2003,10:145一150.沙彬,周文浩.早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化與少突膠質(zhì)細胞損傷機制.中國新生兒科雜志,2008,23:57-60.McQuillenPS,SheldonRA,ShatzCJ,etal.Selectivevulnerabilityofsubplateneuronsafterearlyneonatalhypoxia-ischemia.JNeurosci,2003,23:3308-3315.MizunoK,HidaH,MasudaT,etal.Pretreatmentwithlowdosesoferythropoietinamelioratesbraindamageinperiventricularleukomalaciabytargetinglateoligodendrocyteprogenitors:aratmodel.Neonatology,2008,94:255-266.UeharaH,YoshiokaH,KawaseS,etal.Anewmodelofwhitematterinjuryinneonatalratswithbilateralcarotidarteryocclusion.BrainRes,1999,837:213-220.LinS,RhodesPG,LeiM,etal.alpha-Phenyl-n-tert-butyl-nitroneattenuateshypoxicischemicwhitematterinjuryintheneonatalratbrain.BrainRes,2004,1007:132-141.DerrickM,LuoNL,BregmanJC,etal.Pretermfetalhypoxia-ischemiacauseshypertoniaandmotordeficitsintheneonatalrabbit:amodelforhumancerebralpalsy?JNeurosci,2004,24:24-34.RiddleA,LuoNL,ManeseM,etal.Spatialheterogeneityinoligodendrocytelineagematurationandnotcerebralbloodflowpredictsfetalovineperiventricularwhitematterinjury.JNeurosci,2006,26:3045-3055.WangT,ZhangL,JiangL,etal.Neurotoxicologicaleffectsof3-nitropropionicacidontheneonatalrat.Neurotoxicology,2008,29:1023-1029.CaiZ,PangY,LinS,etal.Differentialrolesoftumornecrosisfactor-alphaandinterleukin-1betainlipopolysaccharide-inducedbraininjuryintheneonatalrat.BrainRes,2003,975:37-47.DuncanJR,CockML,ScheerlinckJP,etal.Whitematterinjuryafterrepeatedendotoxinexposureinthepretermovinefetus.PediatrRes,2002,52:941-949.Saadani-MakkiF,KannanS,LuX,etal.Intrauterineadministrationofendotoxinleadstomotordeficitsinarabbitmodel:alinkbetweenprenatalinfectionandcerebralpalsy.AmJObstetGynecol,2008,199:651.e1-7.SfaelloI,BaudO,ArzimanoglouA,etal.Topiramatepreventsexcitotoxicdamageinthenewbornrodentbrain.NeurobiolDis,2005,20:837-848.PoggiSH,ParkJ,TosoL,etal.Nophenotypeassociatedwithestablishedlipopolysaccharidemodelforcerebralpalsy.AmJObstetGynecol,2005,192:727-733.RobersonR,WoodardJE,TosoL,etal.Postnatalinflammatoryratmodelforcerebralpalsy:toodifferentfromhumans.AmJObstetGynecol,2006,195:1038-1044.YagerJY.Animalmodelofhypoxia-ischemicbraindamageinthenewborn.SeminPediatrNeurol,2004,11:31-46.VannucciRC,VannucciSJ.Perinatalhypoxic-ischemicbraindamage:evolutionofananimalmodel.DevNeurosci,2005,27:81-86.MccullochKM,RajuTN,NavaleS,etal.Developingalong-termsurvivingpigletmodelofneonatalhypoxic-ischemicencephalopathy.NeurolRes,2005,27:16-21.SolaA,RogidoM,LeeBH,etal.ErythropoitinafterfocalcerebralischemiaactivatestheJanuskinase-signaltransducerandactivatoroftranscriptionsignalingpathwayandimprovesbraininjuryinpostnatalday7Rats.PediatrRes,2005,57:481-487.WenTC,RogidoM,GressensP,etal.Areproducibleexperimentalmodeloffocalcerebralischemiaintheneonatalrat.BrainResBrainResProtoc,2004,13:76-83.HarrisAP,HelouS,GleasonCA,etal.Fetalcerebralandperipheralcirculatoryresponsestohypoxiaafternitricoxidesynthaseinhibition.AmJPhysiolRegulIntegrCompPhysiol.2001,281:R381-390.GonzalezH,HunterCJ,BennetL,etal.Cerebraloxygenationduringpostasphyxialseizuresinnear-termfetalsheep.JCerebBloodFlowMetab,2005,25:911-918.[32]王志堅,周曉光,劉仁紅,等.建立一種改良的新生兔缺氧缺血性腦損傷模型.中國實驗動物學(xué)報,2007,15:296-299.[33]陳舜年,賁曉明,李佩紅.膽紅素腦病動物模型制作與鑒定.新生兒科雜志,1997,12:166-168.王麗梅,郝艷秋,石麗宏.局部亞低溫對膽紅素腦病仔兔腦基底節(jié)中多巴胺及5-羥色胺的影響.中國康復(fù)理論與實踐,2010,16:35-37.胡影,田巧紅,華子瑜,等.小腦延髓池注射膽紅素溶液建立新生大鼠膽紅素腦病模型的評價.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008,33:177-181,244.司徒勛,陳克正.外源性五羥色胺大鼠肺出血模型及其與濃度關(guān)系.現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志,2004,10:197-202.[37]陳克正,王衛(wèi).新生大鼠肺出血動物模型的建立及對臨床的啟示.中國當代兒科雜志,2002,4:357-360.[38]李娟,李書琴,吳紅敏,等.肺出血幼兔右心室壓力及肺毛細血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)的改變.中華兒科雜志,2000,38:147-149.[39]吳春英,魯建生,舒濤.幼齡大鼠彌漫性肺出血模型的建立.實驗動物與比較醫(yī)學(xué),2005,25:147-150.[40]杜悅,吳玉斌,蔡栩栩,等.內(nèi)毒素致新生大鼠肺組織PELAM-1,T-PA,PAI-1表達的改變及其意義.中華兒科雜志,2004,42:649-653.HolopainenR,LaineJ,HalkolaL,etal.Dexamethasonetreatmentattenuatespulmonaryinjuryinpigletmeconiumaspiration.PediatrRes.2001,49:162-168.MokraD,DrgovaA,MokryJ,etal.Combinationofbud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