藥物分析第12章 甾體激素類藥物的分析

第十二章甾體激素類藥物的分析TheAnalysisofSteroidHormoneDrugs一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（化學(xué)性質(zhì)與分析方法間的關(guān)系）二、鑒別試驗(yàn)三、特殊雜質(zhì)檢查四、含量測(cè)定學(xué)習(xí)內(nèi)容

1.掌握甾體激素類藥物的分類；結(jié)構(gòu)特征與分析方法間的關(guān)系；鑒別試驗(yàn)的化學(xué)鑒別法；有關(guān)物質(zhì)的檢查方法；含量測(cè)定的方法；

2.熟悉其它特殊雜質(zhì)及其檢查方法；

3.了解甾體激素類藥物中的其他分析內(nèi)容。目的要求第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷并多氫菲分類：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌性激素第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、腎上腺皮質(zhì)激素

性質(zhì)：

1.A環(huán)：

4-3-酮結(jié)構(gòu)（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應(yīng)；

2.17位

-醇酮基，具有還原性；

3.C21羥基成酯，水解成羧酸；

4.9

鹵素取代，可轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)鹵素離子后進(jìn)行分析。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二、雄性激素及蛋白同化激素性質(zhì)：

1.A環(huán)：

4-3-酮結(jié)構(gòu)（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應(yīng)；

2.C21羥基成酯，水解成羧酸。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)三、孕激素性質(zhì)：

1.A環(huán)：

4-3-酮結(jié)構(gòu)（

,

-不飽和酮）

a.共軛體系：紫外吸收；b.羰基：與羰基試劑反應(yīng)；

2.C17甲酮基：顯色反應(yīng)；

3.C17羥基成酯，水解成羧酸。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)四、雌激素性質(zhì)：

1.A環(huán)為苯環(huán)：紫外吸收；

2.酚羥基取代：三氯化鐵反應(yīng)

3.C17乙炔基：與硝酸銀反應(yīng)。第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)文獻(xiàn)報(bào)道其反應(yīng)機(jī)制為：酮基先質(zhì)子化，形成碳正離子后與HSO4-作用呈色。以硫酸的呈色反應(yīng)應(yīng)用最為廣泛。一、化學(xué)鑒別法★第二節(jié)鑒別試驗(yàn)第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2.

官能團(tuán)的反應(yīng)

1）C17

-醇酮基的反應(yīng)（還原性）（腎上腺皮質(zhì)激素）

腎上腺皮質(zhì)激素類藥物，能與多種氧化劑（如堿性酒石酸銅試液、氨制硝酸銀試液、四氮唑鹽試液等）反應(yīng)。第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2.

官能團(tuán)的反應(yīng)

2）酮基的呈色反應(yīng)（腎上腺皮質(zhì)激素、孕激素）

C3-酮基和C20-酮基可與2,4-二硝基苯肼、硫酸苯肼、異煙肼等羰基試劑反應(yīng)，形成黃色的腙。3）酚羥基的呈色反應(yīng)（雌激素）雌激素A環(huán)上的酚羥基，可與三氯化鐵反應(yīng)呈色。第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2.

官能團(tuán)的反應(yīng)4）甲酮基的呈色反應(yīng)（黃體酮的專屬性鑒別反應(yīng)）含有甲酮基或活潑亞甲基，能與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)呈色。黃體酮藍(lán)紫色亞硝基鐵氰化鈉其他甾體淡橙色或不顯色第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2.

官能團(tuán)的反應(yīng)5）炔基的沉淀反應(yīng)乙炔基的活潑氫與硝酸銀作用，生成白色的炔銀沉淀。

6）鹵素的反應(yīng)氟：氧瓶燃燒破壞后的茜素氟藍(lán)比色法，生成藍(lán)紫色的水溶性配位化合物。

第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2.

官能團(tuán)的反應(yīng)7）水解產(chǎn)物的反應(yīng)具有酯鍵的藥物，可根據(jù)水解生成的羧酸的性質(zhì)進(jìn)行鑒別。

8）鈉鹽或磷酸鹽的反應(yīng)參照“一般鑒別試驗(yàn)”中“鈉鹽”或“磷酸鹽”的鑒別反應(yīng)進(jìn)行鑒別。

第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.

熔點(diǎn)2.比旋度3.吸收系數(shù)二、物理常數(shù)的測(cè)定第二節(jié)鑒別試驗(yàn)三、制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)四、光譜法

紫外分光光度法：最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度、某兩個(gè)波長(zhǎng)處吸光度的比值紅外分光光度法：譜圖的一致性五、色譜法（保留時(shí)間或Rf值一致）第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、其它甾體的檢查1.定義：與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”。2.來(lái)源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物3.特點(diǎn)：（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似4.方法（具有一定分離能力）：（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）（2）HPLC法（類似高低濃度對(duì)比法）第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、其它甾體的檢查4.方法（具有一定分離能力）：（1）TLC法（自身稀釋對(duì)照法）

判定方法：

★規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目

★規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色（2）HPLC法（不加校正因子的主成分自身對(duì)照法）

判定方法：

★規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目

★規(guī)定雜質(zhì)峰面積第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查二、游離磷酸鹽的檢查三、殘留溶劑的檢查（GC）四、硒的檢查

“硒檢查法”（二氨基萘比色法）五、乙炔基的檢查

硝酸銀與乙炔基的活潑氫作用，生成一份子硝酸，可用氫氧化鈉滴定。六、氟的檢查

氧瓶燃燒破壞后的茜素氟藍(lán)比色法。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查

《中國(guó)藥典》凡例指出：檢查項(xiàng)下包括安全性、有效性、均一性和純度要求四個(gè)方面。安全性：無(wú)菌、熱源、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、升壓或降壓物質(zhì)等方面的檢查；有效性：與療效相關(guān)，但在鑒別、純度檢查和含量測(cè)定中不能有效控制的項(xiàng)目，如不同構(gòu)型或晶型療效差異較大的原料藥中無(wú)效（或低效）構(gòu)型或晶型的檢查；難溶性藥物制劑溶出度或釋放度的測(cè)定；均一性：對(duì)制劑均勻度的檢查，如重量差異、含量均勻度等；純度：對(duì)藥物中的雜質(zhì)進(jìn)行檢查，是檢查項(xiàng)下的主要內(nèi)容。一、比色法（一）四氮唑比色法

1.四氮唑鹽的種類

（1）氯化三苯氮唑（TTC）：還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲臜，又稱為紅四氮唑（RT），λmax在480~490nm。（2）藍(lán)四氮唑（BT）：還原產(chǎn)物為暗紅色的雙甲臜，λmax在525nm左右。第四節(jié)含量測(cè)定（一）四氮唑比色法

2.原理

腎上腺皮質(zhì)激素類藥物的C17

-醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲臜（fromazan)。甲臜在一定波長(zhǎng)下具有最大吸收，可用比色法進(jìn)行含量測(cè)定。生成的顏色隨所用的試劑和條件的不同而不同。第四節(jié)含量測(cè)定（一）四氮唑比色法

2.原理第四節(jié)含量測(cè)定

反應(yīng)機(jī)理：①

-醇酮基失去2個(gè)電子被氧化為C20-酮基-C21-醛基，在堿催化下，分子內(nèi)部進(jìn)行重排，有部分形成C20-羥基-C21-羥基衍生物；②C20-C21鍵斷裂形成甾基甲酸衍生物和甲醛。四氮唑鹽得到2個(gè)電子，開(kāi)環(huán)形成甲瓚而呈色。（一）四氮唑比色法

3.方法第四節(jié)含量測(cè)定

精密量取對(duì)照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無(wú)水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液1ml，搖勻，各再精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25℃的暗處放置40~50min，在485nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。4.

討論

a.

基團(tuán)的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無(wú)論何種取代基ν↓簡(jiǎn)單酯＞復(fù)雜酯（一）四氮唑比色法

4.討論

b.溶劑和水分的影響

第四節(jié)含量測(cè)定含水量＞5%→ν↓含水30%→幾無(wú)反應(yīng)

無(wú)水乙醇含水10%→A↓10%無(wú)醛無(wú)水乙醇醛→A↑（一）四氮唑比色法

4.討論

c.堿的種類及加入順序的影響

第四節(jié)含量測(cè)定

反應(yīng)應(yīng)在強(qiáng)堿性（pH13.75）條件下進(jìn)行，以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳。加入順序：（一）四氮唑比色法

4.討論

d.空氣中氧及光線的影響第四節(jié)含量測(cè)定反應(yīng)過(guò)程反應(yīng)產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強(qiáng)度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速測(cè)定、充N2e.溫度與時(shí)間的影響t℃↑→ν↑→甲瓚分解↑ChP25℃40～45′（一）四氮唑比色法

5.特點(diǎn)

缺點(diǎn)影響因素太多優(yōu)點(diǎn)測(cè)定結(jié)果能指示藥品的穩(wěn)定性（氧化及降解產(chǎn)物無(wú)此反應(yīng)）

第四節(jié)含量測(cè)定一、比色法（二）異煙肼比色法

原理

C3-酮基及某些其它位置上的酮基能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合，生成黃色的異煙腙，在一定波長(zhǎng)處具有最大吸收。第四節(jié)含量測(cè)定一、比色法（三）Kober反應(yīng)比色法

原理

雌激素與硫酸-乙醇反應(yīng)呈色，用水或稀硫酸稀釋后，重新加熱，顏色發(fā)生改變，在515nm附近有最大吸收。第四節(jié)含量測(cè)定λmax=465λmax=515二、HPLC第四節(jié)含量測(cè)定三、紫外分光光度法四、硝酸銀-氫氧化鈉滴定法1.甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應(yīng)的基團(tuán)()A.酚羥基B.活潑次甲基C.甲酮基

D.C17-α-醇酮基E.酮基2.用異煙肼比色法測(cè)定甾體激素藥物含量時(shí)，其溶液的環(huán)境是()A．強(qiáng)酸性B．中性C．強(qiáng)堿性

D．弱堿性E．以上都不對(duì)3.異煙肼比色法()4.硫色素反應(yīng)()5.紫外分光光度法()6.羥肟酸鐵反應(yīng)()A．維生素B1B．醋酸地塞米松C．兩者皆是D．兩者皆不是練習(xí)7.可用于氫化可的松鑒別的試劑有()A．氨制硝酸銀B．異煙肼C．紅四氮唑

D．硫酸E．重氮苯磺酸8.可用于甾體激體類藥物的測(cè)定方法有

A．高效液相色譜法B．四氮唑鹽法C．紫外分光光度法D．異煙肼比色法E．Kober反應(yīng)比色法9.能與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)生成蘭紫色的藥物是

A．雌二醇B．黃體酮C．醋酸可的松

D．苯丙酸諾龍E．以上都不對(duì)練習(xí)10.異煙肼比色法測(cè)定甾體激素類藥物時(shí)，藥物的呈色基團(tuán)是

A.酮基B.酚羥基C.活潑次甲基

D.炔基E.甾體母核11.四氮唑比色法可用于下列哪個(gè)藥物的含量測(cè)定

A.可的松B.睪丸素C.雌二醇

D.炔雌醇E.黃體酮[12-16]可適用的藥物：A.可的松B.雌二醇C.兩者均可D.兩者均不可12.亞硝酸鈉滴定法（）13.高效液相色譜法（）14.能與羰基試劑縮合（）