同基原多部位紫蘇類藥材揮發(fā)性成分比較研究

同基原多部位紫蘇類藥材揮發(fā)性成分比較研究

紫蘇perirafru有權(quán)使用同一基質(zhì)植物的不同部分，其葉子、莖和果實(shí)的藥物形成紫蘇葉、紫蘇莖和紫蘇子。它們通常用于中國的藥店，但這三種傳統(tǒng)的治療方法不同。紫蘇葉解表散寒、行氣和胃;紫蘇梗理氣寬中、止痛、安胎;紫蘇子降氣化痰、止咳平喘、潤(rùn)腸通便?，F(xiàn)代藥理研究表明紫蘇具有降血脂、抑制血小板凝集、抗過敏性炎癥、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶等作用。紫蘇揮發(fā)性成分為主要活性成分之一,如β-石竹烯具平喘作用,紫蘇酮具促進(jìn)小腸蠕動(dòng)的作用,芳樟醇具鎮(zhèn)靜作用,檸檬烯具鎮(zhèn)咳、祛痰作用等。目前研究紫蘇類藥材主要在成分檢測(cè)、質(zhì)量評(píng)價(jià)及功效方面,國內(nèi)外尚少見有關(guān)紫蘇類藥材功效差異的內(nèi)在原因的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在紫蘇功效研究的基礎(chǔ)上,采用HSGC/MS技術(shù)分析比較同基原多部位入藥紫蘇類藥材(紫蘇葉、紫蘇梗、紫蘇子)揮發(fā)性成分的差異,探討揮發(fā)性成分與其傳統(tǒng)功效的相關(guān)性,旨在為科學(xué)闡釋同基原多部位入藥紫蘇類藥材傳統(tǒng)功效的差異提供依據(jù)。1紫蘇葉、梗、紫蘇子檢測(cè)Agilent6890/5975B型氣-質(zhì)聯(lián)用分析儀,G1701DAD.03.00.611工作站,AgilentG1888頂空自動(dòng)進(jìn)樣器,NIST05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫。紫蘇類藥材樣品于傳統(tǒng)采收期采自南京中醫(yī)藥大學(xué)藥用種植園,紫蘇葉于2011年9月20日采集,紫蘇梗、紫蘇子均于2011年10月30日采集。分別經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室劉訓(xùn)紅教授鑒定為唇形科植物紫蘇Perillafrutescens(L.)Britt的葉、梗及成熟果實(shí)。留樣憑證存放于南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定實(shí)驗(yàn)室。2方法和結(jié)果2.1分析條件2.1.1進(jìn)樣口溫度與程序升溫色譜柱:HP-5MS(5%苯甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱,30.0m×250μm×0.25μm);進(jìn)樣口溫度:150℃;程序升溫:40℃,保持3min,以6℃/min的速率升至100℃,保持2min,再以10℃/min的速率升至150℃;載氣:He氣,流量:1.0mL/min,分流比20∶1。2.1.2電子溫度和接口溫度電離方式:EI離子源;離子源溫度:230℃,四極桿溫度:150℃,接口溫度:280℃;電子倍增器電壓:1.3kV;電子能量70eV;掃描范圍m/z:45.0～600.0。2.2頂空條件的確定用HP-5MS色譜柱對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳分離條件。通過對(duì)藥材粉碎粒度、體積裝樣量、頂空加熱溫度及頂空加熱時(shí)間進(jìn)行考察,確定紫蘇類藥材揮發(fā)性成分優(yōu)化的頂空條件。樣品按選定的頂空條件及分析條件進(jìn)行HSGC/MS分析,利用NIST05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫進(jìn)行檢索,用峰面積歸一化法測(cè)定各組分的相對(duì)百分含量。2.3揮發(fā)性成分的gc/ms分析取紫蘇類藥材粉末(過40目篩)1.5g,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,110℃加熱平衡60min,對(duì)紫蘇類藥材揮發(fā)性成分進(jìn)行GC/MS分析,獲得紫蘇類藥材揮發(fā)性成分的總離子流色譜圖(圖1)。所得質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索鑒定,并與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)譜圖核對(duì),初步鑒定出紫蘇葉、紫蘇梗、紫蘇子中揮發(fā)性成分分別為47種、39種、46種。將總離子流圖中各峰面積進(jìn)行歸一化處理,測(cè)得紫蘇類藥材頂空氣體中各成分的百分含量,并考察β-石竹烯、紫蘇酮、α-石竹烯、芳樟醇、佛手柑內(nèi)酯、芹菜腦等17種共有成分的含量變化。(表1)3討論3.1殼體的優(yōu)化配置3.1.1頂空進(jìn)樣、密封稱取20目、40目的藥材粉末1.5g,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,110℃加熱60min。測(cè)定結(jié)果表明,20目出峰數(shù)少,40目出峰情況較好。3.1.2頂空進(jìn)樣,當(dāng)頂空進(jìn)線管至頂空瓶頂空進(jìn)線,把頂空進(jìn)樣器稱取40目藥材粉末2、1.5、1g(分別占頂空瓶體積4/5、1/2、1/3的量),精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,110℃加熱60min。測(cè)定結(jié)果表明,1g藥材所測(cè)出的色譜峰數(shù)較少、藥材峰面積較小,2g幾乎占滿瓶,出峰數(shù)也較少,1.5g出峰數(shù)和面積均較好,故體積裝樣量選擇1.5g。3.1.3加熱平衡60min稱取40目藥材粉末1.5g,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,分別在90℃、100℃、110℃、120℃下加熱平衡60min。測(cè)定結(jié)果表明,90℃和100℃加熱溫度下檢出色譜峰的峰明顯要少,110℃和120℃加熱檢出的色譜峰中前者峰高較大,故樣品加熱溫度選擇110℃。3.1.4頂空進(jìn)樣分析稱取40目藥材粉末4份,1.5g,精密稱定,置頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,120℃分別加熱30、40、50、60min,取樣分析。測(cè)定結(jié)果表明,4個(gè)不同加熱時(shí)間下的峰數(shù)相差不多,加熱60min的峰高較高,故樣品加熱平衡時(shí)間選擇60min。3.2比較分析與療效差異3.2.1紫蘇葉揮發(fā)性成分紫蘇葉揮發(fā)性成分主要為β-石竹烯、紫蘇酮、芳樟醇、佛手柑內(nèi)酯、α-法呢烯、芹菜腦、蒔蘿芹菜腦、肉豆蔻醚、D-大根香葉烯、橙花叔醇等;紫蘇梗揮發(fā)性成分主要為檸檬烯、紫蘇酮、β-石竹烯、芹菜腦、桉葉油素、糠醛、丙二酸、2,4-庚二烯醛、異欖香脂素等;紫蘇子揮發(fā)性成分主要為β-石竹烯、苯甲醛、亞油酸、芹菜腦、芹菜腦、糠醛、紫蘇酮、佛手柑內(nèi)酯、檸檬烯等。與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。紫蘇類藥材揮發(fā)性成分中,共有成分17種,主要為β-石竹烯、紫蘇酮、佛手柑內(nèi)酯、檸檬烯、芳樟醇、桉葉油素、蘑菇醇、芹菜腦等,各成分含量差異明顯。關(guān)于紫蘇葉揮發(fā)性成分,國內(nèi)外曾做過一些分析研究,大多報(bào)道紫蘇葉揮發(fā)油中主含成分為紫蘇醛,也有報(bào)道國產(chǎn)紫蘇葉揮發(fā)性成分中不含紫蘇醛。本實(shí)驗(yàn)在紫蘇葉揮發(fā)性成分HSGC/MS分析中未檢測(cè)出紫蘇醛,同時(shí)對(duì)同批紫蘇葉提取揮發(fā)油,用GC/MS分析,同樣也未檢測(cè)出紫蘇醛。這可能與紫蘇的種質(zhì)、生態(tài)環(huán)境等有密切關(guān)系,仍須進(jìn)一步深入探討。3.2.2檸檬烯、麻黃酮共有揮發(fā)性成分中,9種具明顯的藥理活性。β-石竹烯具有平喘、鎮(zhèn)咳作用,其在紫蘇葉、紫蘇子中含量均較高,與二者止咳平喘功效相關(guān);檸檬烯具有理氣、止痛及祛痰、抑菌作用,其在紫蘇梗、紫蘇子中含量較高,與紫蘇梗理氣止痛、紫蘇子降氣止咳功效相關(guān);紫蘇酮具促進(jìn)小腸蠕動(dòng)等作用,其在紫蘇梗、紫蘇子中含量較高,與紫蘇梗寬中、紫蘇子潤(rùn)下通便功效相關(guān)。葉醛、異欖香脂素具抗菌作用;芳樟醇、佛手柑內(nèi)酯具抗菌、鎮(zhèn)痛作用;桉葉油素、芹菜腦具抑菌、解熱作用,這些成分在紫蘇類藥材中均有分布,與其功效發(fā)揮也具一定聯(lián)系。3.2.3蘇子潤(rùn)腸通氣功效肉豆蔻醚是紫蘇葉特有成分,其對(duì)人的大腦有中度興奮作用,可能促進(jìn)紫蘇葉解表散寒作用;蓽澄茄烯、反式-金合歡烯、D-大根香葉烯等多種倍半萜均有抑菌解熱作用,為紫蘇葉特有成分,故紫蘇在功效上偏于解表。孟酮、氧化芳樟醇具止痛和抗菌、抑菌作用,為紫蘇梗特有成分,可能對(duì)紫蘇梗理氣止痛功效有一定促進(jìn)作用。對(duì)傘花烴、β-水芹烯、檸檬醛為紫蘇子特有成分,前兩者具有止咳化痰作用,后者有平喘作用,可能促進(jìn)紫蘇子降氣化痰的作用;亞油酸為紫蘇子特有成分