2011高考一輪復(fù)習(xí)課件：植物的組織培養(yǎng)技術(shù)及DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)

——XXX（姓名）金太陽(yáng)教育標(biāo)題:XXXXXX——XXX（姓名）金太陽(yáng)教育標(biāo)題:XXXXXX第50課時(shí)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)及DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)考點(diǎn)一植物的組織培養(yǎng)1.實(shí)驗(yàn)操作流程（1）配制培養(yǎng)基：加瓊脂溶化加蔗糖、各種母液→調(diào)pH→分裝。常用的植物組織培養(yǎng)基為MS

培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配制好后要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。高頻考點(diǎn)突破第50課時(shí)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)及高頻考點(diǎn)突破（2）外植體消毒：外植體通常先用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液消毒，最后無(wú)菌水清洗。（3）接種：要在超凈工作臺(tái)上并且要在酒精燈火焰附近操作。（4）培養(yǎng)。（5）移栽。（6）栽培。（2）外植體消毒：外植體通常先用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，2.菊花莖的組織培養(yǎng)和月季的花藥培養(yǎng)比較（1）相同點(diǎn)①理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性。②基本過(guò)程：脫分化→再分化→試管苗。③影響因素：營(yíng)養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等。（2）不同點(diǎn)菊花莖的組織培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)材料選取未開(kāi)花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝通常選擇完全未開(kāi)放的花蕾光照狀況每日用日光燈照12h開(kāi)始不需光照，幼小植株形成后才需光照2.菊花莖的組織培養(yǎng)和月季的花藥培養(yǎng)比較菊花莖的組織培養(yǎng)月季 ①材料的選?。壕栈ǖ慕M織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇未開(kāi)花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝，該部分不僅分生能力強(qiáng)，而且無(wú)病毒侵染。月季花藥的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇花粉發(fā)育過(guò)程中的單核靠邊期的花藥進(jìn)行培養(yǎng)，且在花蕾期，因?yàn)榇藭r(shí)質(zhì)地幼嫩，花瓣未開(kāi)，微生物不易侵入，容易消毒。操作流程制備培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→移栽→栽培選材→材料消毒→接種和培養(yǎng)→篩選和誘導(dǎo)→移栽→栽培選育結(jié)果正常植株單倍體植株提醒操作制備培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→移栽→栽培選材→材料②剝離花藥時(shí)，盡量不要損傷花藥，同時(shí)還要徹底去除花絲，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾。③外植體消毒：所用消毒劑為體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是無(wú)菌水。④培養(yǎng)過(guò)程：在初期，菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季的花藥培養(yǎng)不需光照，而在后期均需光照。②剝離花藥時(shí)，盡量不要損傷花藥，同時(shí)還要徹底3.影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）材料：植物的種類(lèi)、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。（2）營(yíng)養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。（3）激素：在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。3.影響植物組織培養(yǎng)的因素激素使用的先后順序及其用量比例對(duì)細(xì)胞分裂和分化的影響如下表：使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高激素使用的先后順序及其用量比例對(duì)細(xì)胞分裂和分使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果（4）環(huán)境條件：pH、溫度、光等環(huán)境條件。如菊花組培所需pH為5.8，溫度為18~22℃，光照條件為每日用日光燈照射12小時(shí)。生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化，抑芽形成比值低時(shí)促芽分化，抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)（4）環(huán)境條件：pH、溫度、光等環(huán)境條件。如菊花生長(zhǎng)素/細(xì)胞對(duì)位訓(xùn)練1.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是（）A.導(dǎo)入其他植物細(xì)胞的基因B.將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi)C.用適當(dāng)濃度的秋水仙素處理D.脫離母體后，給予適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件D對(duì)位訓(xùn)練D2.影響植物組織培養(yǎng)的因素包括 （）①培養(yǎng)基的配制②外植體的選?、奂に氐膽?yīng)用④消毒⑤溫度、pH、光照A.①②③④⑤ B.①②③C.①②③④ D.①②③⑤A2.影響植物組織培養(yǎng)的因素包括 （）A考點(diǎn)二DNA的粗提取與鑒定1.原理、方法和目的基本原理方法目的DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低溶于NaCl溶液中并稀釋①NaCl溶液為2mol/L時(shí)，DNA溶解，而部分蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析而生成沉淀，通過(guò)過(guò)濾可除去部分蛋白質(zhì)及不溶于NaCl溶液的雜質(zhì)②當(dāng)NaCl溶液稀釋至0.14mol/L時(shí)，DNA析出，過(guò)濾可除去溶于NaCl中的部分蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)考點(diǎn)二DNA的粗提取與鑒定基本原理方法目的DNA在不同DNA不被蛋白酶所水解加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白質(zhì)DNA不溶于酒精溶液加入冷卻酒精（95%）DNA析出，除去溶于酒精的蛋白質(zhì)DNA可被二苯胺染成藍(lán)色加入二苯胺，并沸水浴鑒定DNADNA不被蛋加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白質(zhì)DNA2.實(shí)驗(yàn)材料（1）動(dòng)物（2）植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

人和哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核,也沒(méi)有DNA，不適于作DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，含大量的DNA既經(jīng)濟(jì)又易取雞血細(xì)胞液的優(yōu)點(diǎn)提醒2.實(shí)驗(yàn)材料雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，雞血細(xì)胞提醒3.實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)（1）步驟：提取血細(xì)胞核物質(zhì)（蒸餾水漲破）→溶解（2mol/L的NaCl）→過(guò)濾（除雜質(zhì)）→析出（滴蒸餾水，降NaCl濃度至0.14mol/L）→過(guò)濾→再溶解（2mol/L的NaCl）→過(guò)濾→進(jìn)一步提純（體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精）→鑒定。3.實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)（2）鑒定比較加入物質(zhì)結(jié)果圖示實(shí)驗(yàn)組均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL絲狀物(DNA)溶液逐漸變藍(lán)對(duì)照組——不變藍(lán)（2）鑒定比較加入物質(zhì)結(jié)果圖示實(shí)均加入：絲狀物溶液對(duì)——不變（3）注意事項(xiàng)①制備雞血細(xì)胞液時(shí)，要在取雞血的同時(shí)加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細(xì)胞。②兩次加蒸餾水的目的不同。③鑒定DNA時(shí)需沸水浴加熱。（3）注意事項(xiàng)對(duì)位訓(xùn)練3.相對(duì)于細(xì)菌分離，而DNA分子的分離和提取操作要復(fù)雜的多。（1）在DNA提取中兩次用到蒸餾水，其目的分別是

。（2）實(shí)驗(yàn)中能否以哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料？為什么？

。使血細(xì)胞破裂，釋放出DNA分子、稀釋NaCl溶液，使DNA分子析出不能，哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中無(wú)DNA分子對(duì)位訓(xùn)練使血細(xì)胞破裂，釋放出DNA分子、稀釋NaCl溶液，不考點(diǎn)三PCR擴(kuò)增技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制1.PCR的反應(yīng)過(guò)程（1）變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA

解旋為單鏈，如下圖：（2）復(fù)性：溫度下降到50℃左右，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合，如下圖：考點(diǎn)三PCR擴(kuò)增技術(shù)與體內(nèi)DNA復(fù)制（3）延伸：溫度上升到72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈，如下圖：（3）延伸：溫度上升到72℃左右，溶液中的四種2.PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制PCR擴(kuò)增技術(shù)場(chǎng)所細(xì)胞核內(nèi)生物體外原理堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)酶DNA聚合酶、解旋酶耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）條件模板、ATP、引物鏈（RNA）、常溫模板、ATP、引物鏈（DNA及RNA片段）、溫度變化（90~95℃→55~60℃→70~75℃）原料四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸特點(diǎn)形成的是整個(gè)DNA分子，一個(gè)細(xì)胞周期只復(fù)制一次短時(shí)間內(nèi)形成大量目的基因DNA片段，呈指數(shù)增長(zhǎng)——2n2.PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)位訓(xùn)練4.標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次是 （）A.92℃、50℃、72℃B.72℃、50℃、92℃C.50℃、92℃、72℃D.80℃、50℃、72℃A對(duì)位訓(xùn)練A5.引物的作用是 （）A.打開(kāi)DNA雙鏈B.催化合成DNA子鏈C.使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開(kāi)始復(fù)制D.提供模板C5.引物的作用是 （）C考點(diǎn)四血紅蛋白的提取和分離1.蛋白質(zhì)分離的依據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等，可以用來(lái)提取和分離不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)?？键c(diǎn)四血紅蛋白的提取和分離2.方法及原理（1）凝膠色譜法原理

蛋白質(zhì)比較相對(duì)分子質(zhì)量大相對(duì)分子質(zhì)量小凝膠內(nèi)部不能進(jìn)入能進(jìn)入運(yùn)動(dòng)方式垂直向下垂直向下和無(wú)規(guī)則擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)經(jīng)過(guò)路程較短較長(zhǎng)洗脫次序先流出后流出2.方法及原理蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量大相對(duì)分子提醒

凝膠色譜柱的直徑大小不影響分離效果，但直徑過(guò)大造成洗脫液體積大，樣品稀釋度大；凝膠色譜柱的高度與分離度有關(guān)。（2）凝膠電泳法原理凝膠電泳法的原理是不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場(chǎng)中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。如下表：提醒凝膠色譜柱的直徑大小不影響分離效果，但決定運(yùn)動(dòng)方向形成庫(kù)侖力形成阻力決定運(yùn)動(dòng)速率電荷性質(zhì)√電荷量√√分子形狀√√分子大小√√決定運(yùn)形成形成決定運(yùn)電荷性質(zhì)√電荷量√√分子形狀√√分子大小3.實(shí)驗(yàn)操作流程樣品的處理紅細(xì)胞洗滌——離心去除血清釋放血紅蛋白——蒸餾水漲破分離血紅蛋白——離心處理粗分離——透析（去除小分子雜質(zhì)）純化——凝膠色譜法進(jìn)行分離和純化純度鑒定——SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定相對(duì)分子量3.實(shí)驗(yàn)操作流程樣品的處理紅細(xì)胞洗滌——離心去除血清粗分離—提醒①紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中，洗滌三次后，上清液仍有黃色，可增加洗滌次數(shù)，否則無(wú)法除去血漿蛋白；離心時(shí)轉(zhuǎn)速要低，時(shí)間要短，否則白細(xì)胞等會(huì)一同沉淀，達(dá)不到分離效果。②血紅蛋白釋放過(guò)程中，蒸餾水的作用是漲破紅細(xì)胞，甲苯的作用主要是溶解細(xì)胞膜。③為了加快干凝膠的膨脹，可將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，通常只需1～2h。這種方法不但節(jié)約時(shí)間，而且可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除膠粒內(nèi)的空氣。④滴加樣品時(shí)，吸管管口要貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)，防止破壞凝膠面。提醒①紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中，洗滌三次后，上清液對(duì)位訓(xùn)練6.為了提取血紅蛋白，從學(xué)校附近的屠宰場(chǎng)索取新鮮的豬血，對(duì)豬血處理的正確操作是 （）A.要在采血容器中預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)幟仕徕cB.取血回來(lái)后，馬上進(jìn)行高速長(zhǎng)時(shí)間離心C.將離心后的血細(xì)胞加入清水緩慢攪拌D.重復(fù)洗滌直到上清液呈紅色為止A對(duì)位訓(xùn)練A7.洗滌紅細(xì)胞時(shí)，離心所用方法為 （）A.低速長(zhǎng)時(shí)間離心B.低速短時(shí)間離心C.高速長(zhǎng)時(shí)間離心D.高速短時(shí)間離心B7.洗滌紅細(xì)胞時(shí)，離心所用方法為 （）B思維誤區(qū)警示易錯(cuò)分析

對(duì)DNA和蛋白質(zhì)提取與分離的原理不清楚（1）DNA溶解度與NaCl濃度的關(guān)系（2）兩次蒸餾水的目的不同：第1次是使紅細(xì)胞吸水漲破；第2次是降低NaCl濃度，析出DNA。解題思路探究思維誤區(qū)警示解題思路探究（3）血紅蛋白的分離方法及相關(guān)原理方法原理凝膠色譜法根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)電泳法根據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小、形狀的不同進(jìn)行分離（3）血紅蛋白的分離方法及相關(guān)原理方法原理凝膠色譜法根據(jù)相對(duì)1.（2008·江蘇卷，18）下列敘述中錯(cuò)誤的是()A.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出B.在沸水浴中，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色C.用電泳法可分離帶電性質(zhì)、分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)D.用透析法可去除蛋白質(zhì)樣品中的小分子物質(zhì)糾正訓(xùn)練1.（2008·江蘇卷，18）下列敘述中錯(cuò)誤的是糾正訓(xùn)練解析

在不同濃度的氯化鈉溶液中DNA的溶解度不同，在0.14mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最小,DNA析出,呈絲狀物,過(guò)濾后存在于黏稠物中;在2mol/L的氯化鈉溶液中溶解度最大，所以DNA呈溶解狀態(tài)，過(guò)濾后存在于濾液中。答案A解析在不同濃度的氯化鈉溶液中DNA的溶解度不2.使用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的行進(jìn)過(guò)程，可表示為圖中（）B2.使用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)分子質(zhì)量不B知識(shí)綜合應(yīng)用重點(diǎn)提示

通過(guò)“植物組織培養(yǎng)及題干中信息的分析推斷”的考查，提升“鑒別選擇試題給出的相關(guān)生物信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)生物學(xué)問(wèn)題”的能力。知識(shí)綜合應(yīng)用典例分析（2009·上海卷，36）回答下列有關(guān)植物組織培養(yǎng)的問(wèn)題。（1）用于植物組織培養(yǎng)的植物材料稱(chēng)為

。（2）組織培養(yǎng)中的細(xì)胞，從分化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槲捶只癄顟B(tài)的過(guò)程稱(chēng)為

。典例分析（3）在再分化階段所用培養(yǎng)基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐漸改變培養(yǎng)基中這兩種植物激素的濃度比，未分化細(xì)胞群的變化情況如下圖所示。據(jù)圖指出兩種激素的不同濃度比與形成芽、根、愈傷組織的關(guān)系：

（3）在再分化階段所用培養(yǎng)基中，含有植物激素X和植物激素Y。①當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比等于1時(shí),

；②

；③

。（4）若植物激素Y是生長(zhǎng)素，在植物組織培養(yǎng)中其主要作用是

；則植物激素X的名稱(chēng)是

。（5）生產(chǎn)上用試管苗保留植物的優(yōu)良性狀，其原因是

。①當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比等于1時(shí),

解析（1）植物組織培養(yǎng)時(shí)所取材料稱(chēng)為外植體。（2）讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程，稱(chēng)為脫分化。（3）據(jù)圖可得當(dāng)激素X與激素Y的濃度比為1時(shí)，未分化的細(xì)胞群形成愈傷組織；當(dāng)激素X與激素Y的濃度比大于1時(shí)，未分化的細(xì)胞群分化形成芽；當(dāng)激素X與激素Y的濃度比小于1時(shí)，未分化的細(xì)胞群分化形成根。（4）生長(zhǎng)素的作用是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂和分化；激素X能促進(jìn)細(xì)胞分裂，是細(xì)胞分裂素。（5）試管苗為無(wú)性繁殖系，能夠保持親本的一切性狀，不發(fā)生性狀分離。2011高考一輪復(fù)習(xí)ppt課件：植物的組織培養(yǎng)技術(shù)及DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)答案（1）外植體（2）去分化（脫分化）（3）①未分化細(xì)胞群經(jīng)分裂形成愈傷組織②當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比大于1時(shí)，未分化細(xì)胞群分化形成芽③當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比小于1時(shí)，未分化細(xì)胞群分化形成根（4）促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)（伸長(zhǎng)）、分裂和分化細(xì)胞分裂素（5）組織培養(yǎng)形成試管苗的過(guò)程屬于無(wú)性生殖，后代不發(fā)生性狀分離答案（1）外植體（2）去分化（脫分化）定時(shí)檢測(cè)組題說(shuō)明特別推薦識(shí)圖析圖綜合應(yīng)用題——3；流程圖解讀及知識(shí)拓展應(yīng)用——1、2、8?？键c(diǎn)題號(hào)植物組織培養(yǎng)1、2DNA提取與鑒定3PCR擴(kuò)增技術(shù)4、6血紅蛋白的提取與分離技術(shù)5、7、8定時(shí)檢測(cè)考點(diǎn)題號(hào)植物組織培養(yǎng)1、2DNA提取與鑒定3PCR擴(kuò)1.（2009·山東理綜，34）人參是一種名貴中藥材，其有效成分主要是人參皂苷。利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)人參皂苷的大致流程如下：1.（2009·山東理綜，34）人參是一種名貴中藥請(qǐng)回答：（1）配制誘導(dǎo)愈傷組織的固體培養(yǎng)基,分裝后要進(jìn)行

。接種前，要對(duì)人參根進(jìn)行

。（2）用于離體培養(yǎng)的根切塊，叫做

。培養(yǎng)幾天后發(fā)現(xiàn)少數(shù)培養(yǎng)基被污染，若是有顏色的絨毛狀菌落，屬于

污染；若是有光澤的黏液狀菌落，屬于

污染。（3）用少量

酶處理愈傷組織，獲取單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)，在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，可有效提高人參皂苷合成量。（4）人參皂苷易溶于水溶性（親水性）有機(jī)溶液，從培養(yǎng)物干粉中提取人參皂苷宜選用

方法，操作時(shí)應(yīng)采用

加熱。請(qǐng)回答：解析

(1)滅菌是指用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)的方法，殺死物體內(nèi)外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。在組織培養(yǎng)過(guò)程中要防止雜菌的污染，需要對(duì)固體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，對(duì)人參根進(jìn)行消毒。（2）用于離體培養(yǎng)的離體的植物組織或器官（根切塊）稱(chēng)為外植體。單個(gè)或少數(shù)微生物細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見(jiàn)、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。我們可以根據(jù)菌落的特征判斷微生物的種類(lèi)。霉菌的菌落較大，肉眼可見(jiàn)許多毛狀物，呈棕色、青色等，細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤(rùn)、黏稠，有光澤。解析(1)滅菌是指用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)的方法，殺（3）果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁和胞間層，使愈傷組織分離。（4）人參皂苷溶于水溶性有機(jī)溶劑，可以用萃取法從培養(yǎng)物干粉中提取。萃取時(shí)要采用水浴加熱，這是因?yàn)橛袡C(jī)溶劑都是易燃物，用明火加熱容易引起燃燒、爆炸。

答案（1）滅菌消毒（2）外植體真菌（霉菌）細(xì)菌（3）果膠（4）萃取(浸取)水?。?）果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁和胞間層，使愈傷組2.下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題：

（1）選用的材料合適與否是成功誘導(dǎo)出花粉植株的重要因素，一般來(lái)說(shuō)選用

期的花粉可提高成功率。選擇花粉時(shí)，一般要通過(guò)

來(lái)確定花粉是否處于合適的發(fā)育期，這時(shí)需要對(duì)花粉的細(xì)胞核進(jìn)行染色，常用的染色劑是

。2.下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途（2）上圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中

。（3）胚狀體與愈傷組織在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別在于愈傷組織的細(xì)胞排列疏松無(wú)規(guī)則，是一種高度的

薄壁細(xì)胞。胚狀體與

發(fā)育形成的胚有類(lèi)似的結(jié)構(gòu)，即具有胚芽、胚軸和胚根。（4）無(wú)菌技術(shù)也是成功誘導(dǎo)出花粉植株的重要因素，請(qǐng)說(shuō)明下列各項(xiàng)需要消毒，還是需要滅菌。（2）上圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組①培養(yǎng)基，②培養(yǎng)皿，③接種環(huán)，④花蕾，⑤實(shí)驗(yàn)操作者的雙手，⑥三角錐形瓶。

(填編號(hào))需要滅菌,

（填編號(hào)）需要消毒。（5）試管苗移栽到土壤前，通常要進(jìn)行壯苗處理，應(yīng)如何壯苗？

。①培養(yǎng)基，②培養(yǎng)皿，③接種環(huán)，④花蕾，⑤實(shí)驗(yàn)解析（1）并不是任何時(shí)期的花粉都可以培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，只有花粉發(fā)育到一定時(shí)期對(duì)離體的刺激才最敏感。對(duì)大多數(shù)植物而言，單核中期至晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈傷組織。在培養(yǎng)花藥之前，通常用醋酸洋紅染色制片法制片鏡檢以確定花粉發(fā)育時(shí)期。（2）花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株一般有兩種途徑：其一是花藥中的花粉通過(guò)胚狀體階段發(fā)育為小植株；其二是花藥中花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再誘導(dǎo)其分化成植株。兩種途徑并無(wú)絕對(duì)界限，主要取決于培養(yǎng)基中的激素種類(lèi)及其濃度配比。（3）愈傷組織是一團(tuán)高度液解析（1）并不是任何時(shí)期的花粉都可以培養(yǎng)產(chǎn)生泡化的薄壁細(xì)胞，植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體與正常受精卵發(fā)育成的胚均有胚芽、胚根和胚軸。（4）滅菌是用理化方法殺死環(huán)境中所有的微生物細(xì)胞、芽孢和孢子。消毒是殺死物體表面的病原微生物。在微生物培養(yǎng)過(guò)程中通常對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角錐形瓶，進(jìn)行滅菌處理；對(duì)花蕾、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒處理。泡化的薄壁細(xì)胞，植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體與正答案（1）單核鏡檢（顯微鏡觀察）醋酸洋紅（2）激素的種類(lèi)及其濃度配比（3）液泡化正常受精卵（或受精卵）（4）①②③⑥④⑤（5）將試管苗移栽到經(jīng)消毒過(guò)的培養(yǎng)基中生活一段時(shí)間，等幼苗長(zhǎng)壯后再移栽到土壤中答案（1）單核鏡檢（顯微鏡觀察）醋酸洋紅3.下圖為“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)回答問(wèn)題。3.下圖為“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)（1）實(shí)驗(yàn)材料選用雞血細(xì)胞液，而不用雞全血，主要原因是雞血細(xì)胞液中

含量較高。（2）在圖A所示的實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸餾水20mL的目的是

，通過(guò)

圖B所示的步驟取得濾液,再在濾液中加入2mol/L

的NaCl溶液的目的是

；圖C所示實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸餾水的目的是

。（3）為鑒定實(shí)驗(yàn)所得絲狀物的主要成分是DNA，可滴加

溶液，結(jié)果絲狀物被染成綠色。（1）實(shí)驗(yàn)材料選用雞血細(xì)胞液，而不用雞全血，（4）a試管為對(duì)照組，b試管為實(shí)驗(yàn)組。①a試管現(xiàn)象

；b試管現(xiàn)象

。②在沸水中加熱的目的是

，同時(shí)說(shuō)明DNA對(duì)高溫有較強(qiáng)的

。③a試管在實(shí)驗(yàn)中的作用是

。④b試管中溶液顏色的變化程度主要與有關(guān)

。（4）a試管為對(duì)照組，b試管為實(shí)驗(yàn)組。解析“DNA粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)材料選用雞血細(xì)胞液，而不用雞全血，主要原因是DNA主要儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)，而不在血漿內(nèi)，使用雞血細(xì)胞液提高材料中的細(xì)胞數(shù)量和DNA含量，從而可以保證實(shí)驗(yàn)提取到的DNA數(shù)量。圖A、B、C所示為本實(shí)驗(yàn)的三個(gè)關(guān)鍵步驟。圖A通過(guò)添加蒸餾水，血細(xì)胞與蒸餾水相混合而使血細(xì)胞處于極低濃度的溶液中，細(xì)胞因大量吸水而導(dǎo)致最終破裂，并釋放出胞內(nèi)物。圖B通過(guò)紗布過(guò)濾使血細(xì)胞釋放出的DNA濾入收集的濾液中（將大量膠狀物濾出），再在濾液中加入2mol/L的NaCl溶液使DNA的溶解度增加。圖C在DNA濃鹽溶解析“DNA粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)材料選用雞血細(xì)液中加入蒸餾水（大量），可使溶液的NaCl濃度降至較底，由于DNA在較低濃度的NaCl溶液中溶解度很低（在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，濃度再變小則DNA溶解度將增大），使DNA析出，經(jīng)過(guò)濾等手段可以收集到DNA。甲基綠為比較常用的細(xì)胞核染色劑，染色后細(xì)胞核中染色體呈綠色，屬堿性染料，可以用來(lái)鑒定DNA。液中加入蒸餾水（大量），可使溶液的NaCl濃度降答案

（1）DNA（2）使血細(xì)胞吸水漲破，放出DNA使濾液中的DNA溶于濃鹽溶液使DNA析出（3）甲基綠（4）①溶液不變藍(lán)溶液變藍(lán)②加快顏色反應(yīng)速度耐受性③對(duì)照④加入DNA（絲狀物）的多少答案（1）DNA（2）使血細(xì)胞吸水漲破，放出4.2008年5月20日民政部等制訂汶川大地震遇難人員遺體處理意見(jiàn)指出，無(wú)法確認(rèn)遇難者身份的，由公安部門(mén)提取可供DNA檢驗(yàn)的檢材以便事后身份辨認(rèn)。事后的遺體辨認(rèn)可借助于DNA雜交技術(shù)，即從遺體細(xì)胞與死者家屬提供的死者生前生活用品中分別提取DNA，然后借助DNA雜交技術(shù)對(duì)遺體進(jìn)行確認(rèn)。據(jù)此回答：（1）為了確保辨認(rèn)的準(zhǔn)確性，需要克隆出較多的DNA樣品。這需借助PCR技術(shù)。使用PCR技術(shù)的具體實(shí)驗(yàn)操作順序是：4.2008年5月20日民政部等制訂汶川大地震遇難人按配方準(zhǔn)備好各組分→→離心使反應(yīng)液集中在離心管底部→設(shè)計(jì)好PCR儀的循環(huán)程序→進(jìn)行PCR反應(yīng)。請(qǐng)寫(xiě)出圖中方框的步驟:

，該步操作應(yīng)特別注意的問(wèn)題是

。按配方準(zhǔn)備好各組分→→離心使反應(yīng)液（2）上表所示為分別從死者遺體和死者生前的生活用品中提取的三條相同染色體上的同一區(qū)段DNA單鏈的堿基序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)情況進(jìn)行判斷，A、B、C三組DNA中不是同一人的是

。（3）為什么從死者體細(xì)胞與死者家屬提供的其生前生活用品中分別提取的DNA可以完全互補(bǔ)配對(duì)？

。（2）上表所示為分別從死者遺體和死者生前的生解析

PCR技術(shù)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，它能以極少量的DNA為模板，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝。這項(xiàng)技術(shù)有效地解決了因?yàn)闃悠分蠨NA含量太低而難以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的問(wèn)題，被廣泛地應(yīng)用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學(xué)、基因克隆和DNA序列測(cè)定等領(lǐng)域。DNA雜交技術(shù)方法是從遺體細(xì)胞和死者家屬提供的死者生前的生活用品中分別提取DNA，在一定溫度下，水浴共熱，使DNA氫鍵斷裂，雙鏈打開(kāi)。若兩份DNA樣本來(lái)自同一個(gè)體，在溫度降低時(shí)，兩份樣解析PCR技術(shù)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技本中的DNA單鏈通過(guò)氫鍵連接在一起，若不是來(lái)自同一個(gè)體，則兩份樣本中的DNA單鏈在一定程度上不能互補(bǔ)，DNA雜交技術(shù)就是通過(guò)這一過(guò)程對(duì)面目全非的死者進(jìn)行辨認(rèn)的。答案（1）用微量移液器在微量離心管中依次加入各組分PCR實(shí)驗(yàn)使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌（2）B、C（3）人體所有體細(xì)胞均由一個(gè)受精卵有絲分裂產(chǎn)生，其細(xì)胞核中均含有相同的遺傳物質(zhì)本中的DNA單鏈通過(guò)氫鍵連接在一起，若不是來(lái)自5.對(duì)血紅蛋白（Hb）的研究結(jié)果表明，血紅蛋白實(shí)際上是由珠蛋白、原卟琳和二價(jià)鐵離子（Fe2+）所組成的結(jié)合蛋白質(zhì)，由4條肽鏈各結(jié)合一個(gè)輔基即血紅素，O2結(jié)合于Fe2+上，血紅蛋白與氧疏松結(jié)合形成氧合血紅蛋白（HbO2）,這種氧合作用在氧分壓高時(shí)容易進(jìn)行，在氧分壓低時(shí)易于解離。紅細(xì)胞結(jié)合和攜帶O2的過(guò)程并不影響Fe2+，也就是說(shuō)不會(huì)使之氧化為Fe3+。Fe3+無(wú)攜帶O2的能力。CO與Hb的親和力大于O2，結(jié)合成HbCO后不能分離，致使Hb喪失運(yùn)輸O2和CO2的機(jī)能，這稱(chēng)為一氧化碳中毒即煤氣中毒。5.對(duì)血紅蛋白（Hb）的研究結(jié)果表明，血紅蛋白實(shí)際（1）用凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)，待

接近色譜柱底端時(shí)，才用試管收集。血紅蛋白因含

而呈現(xiàn)紅色。（2）要使血紅蛋白從紅細(xì)胞中釋放出來(lái)，可選用的方法是

。（3）紅細(xì)胞具有運(yùn)輸氧的功能，是因?yàn)?/p>

。（4）亞硝酸鹽為強(qiáng)氧化劑，進(jìn)入人體后，可使血紅蛋白失去運(yùn)輸氧的功能，導(dǎo)致人體組織缺氧，其可能的原因是

。（1）用凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)，待接解析用凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)，血紅蛋白因含血紅素而呈現(xiàn)紅色，待紅色區(qū)帶接近色譜柱底端時(shí)，才用試管收集。將紅細(xì)胞置于蒸餾水中,加40%體積的甲苯，攪拌使紅細(xì)胞破裂并釋放出血紅蛋白。紅細(xì)胞中的血紅蛋白與氧在氧分壓高時(shí)容易結(jié)合，在氧分壓低時(shí)又容易分離。亞硝酸鹽可將血細(xì)胞中低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，從而使其失去與氧結(jié)合的能力。解析用凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)，血紅蛋白因答案

（1）紅色區(qū)帶血紅素（2）將紅細(xì)胞置于蒸餾水中，加40%體積的甲苯，攪拌使之破裂并釋放血紅蛋白（3）紅細(xì)胞中的血紅蛋白與氧在氧分壓高時(shí)容易結(jié)合，在氧分壓低時(shí)又容易分離（4）亞硝酸鹽可使血細(xì)胞中低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白答案（1）紅色區(qū)帶血紅素（2）將紅細(xì)胞置于6.PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)，下圖表示合成過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖分析回答：（1）A過(guò)程高溫使DNA變性解旋，對(duì)該過(guò)程的原理敘述，正確的是

。A.該過(guò)程用到耐高溫的解旋酶破壞氫鍵B.該過(guò)程用到限制酶破壞磷酸二酯鍵C.該過(guò)程不需要解旋酶的作用D.該過(guò)程與人體細(xì)胞的過(guò)程完全相同6.PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外（2）C過(guò)程要用到的酶是。這種酶在高溫下仍保持活性，因此在PCR擴(kuò)增時(shí)可以

加入,

（需要/不需要）再添加。PCR反應(yīng)除提供酶外，還需要滿(mǎn)足的基本條件有:

。（3）如果把模板DNA的兩條鏈用15N標(biāo)記，游離的脫氧核苷酸不做標(biāo)記，控制“94℃~55℃~72℃”溫度循環(huán)3次，則在形成的子代DNA中含有15N標(biāo)記的

DNA占

。（4）如果模板DNA分子共有a個(gè)堿基對(duì)，其中含有胞嘧啶m個(gè)，則該DNA復(fù)制10次，需要加入胸腺嘧啶脫氧核苷酸個(gè)

。（2）C過(guò)程要用到的酶是。這種酶在高溫下仍保持（5）PCR中由堿基錯(cuò)配引起的變異屬于

。假設(shè)對(duì)一個(gè)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，第一次循環(huán)時(shí)某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯(cuò)配，則擴(kuò)增若干次后檢測(cè)所用DNA的擴(kuò)增片段，與原DNA相應(yīng)片段相同的占

。解析（1）高溫所起的作用類(lèi)似于解旋酶，使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湣＃?）C過(guò)程為PCR技術(shù)的延伸階段，當(dāng)系統(tǒng)溫度上升至72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下合成新的DNA鏈。TaqDNA聚合酶是耐熱的，高溫下不變性，所以一次性加入即可。（3）PCR技術(shù)遵循半保留復(fù)制的特（5）PCR中由堿基錯(cuò)配引起的變異屬于點(diǎn)。經(jīng)過(guò)三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個(gè)DNA分子，其中有2個(gè)DNA分子含有15N標(biāo)記。（4）在一個(gè)雙鏈DNA分子中，C+T占?jí)A基總數(shù)的一半，故T的數(shù)目為a-m，復(fù)制10次，相當(dāng)于新增加了210-1個(gè)DNA分子。故需補(bǔ)充T的數(shù)目為（210-1）（a-m）。（5）基因中的堿基對(duì)改變屬于基因突變。對(duì)一個(gè)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，第一次循環(huán)時(shí)某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯(cuò)配，以后按正常配對(duì)方式進(jìn)行擴(kuò)增，錯(cuò)配鏈作模板擴(kuò)增的都是錯(cuò)誤的DNA分子，原正常鏈擴(kuò)增得到的DNA分子都是正常的DNA分子，故若干次后檢測(cè)所用DNA的擴(kuò)增片段，與原DNA相應(yīng)片段相同的占3/4。點(diǎn)。經(jīng)過(guò)三次循環(huán)，共產(chǎn)生23個(gè)DNA分子，其中有答案（1）C（2）TaqDNA聚合酶一次不需要DNA模板，分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物，四種脫氧核苷酸，同時(shí)通過(guò)控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行（3）25%（4）（210-1）（a-m）（5）基因突變75%答案（1）C（2）TaqDNA聚合酶7.紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的,血紅蛋白的主要功能是攜帶O2

或CO2，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白，請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：（1）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步:

、