第8章腸桿菌科2課件

第8章腸桿菌科第8章腸桿菌科1腸桿菌科（Enterobactericaeae）概述是棲居在人和動物的腸道內(nèi)的一大群形態(tài)、生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌。廣泛分布在自然界中，包括植物、土壤、水以及人和動物的腸道中，多數(shù)是正常人腸道菌群的重要成員，在機(jī)體的其他部位相對較少。腸桿菌科（Enterobactericaeae）概述2腸桿菌科（Enterobactericaeae）包括致病性較強(qiáng)、能引起人類傳染病的菌屬：鼠疫耶爾森菌、傷寒沙門菌引起人類腹瀉和腸道感染的菌屬（四個）埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬（重點）腸桿菌科（Enterobactericaeae）包括致病性較3與醫(yī)院感染有關(guān)的條件致病菌枸櫞酸桿菌屬克雷伯菌屬腸桿菌屬泛菌屬沙雷菌屬變形桿菌屬普羅威登菌屬摩根菌屬與醫(yī)院感染有關(guān)的條件致病菌枸櫞酸桿菌屬沙雷菌屬4正常菌群與條件致病菌有許多細(xì)菌既是腸道的正常菌群，也是條件致病菌。在一定的條件下，能引起機(jī)會感染或二重感染。1）機(jī)體抵抗力下降2）寄居部位的改變3）腸道菌群失調(diào)約40種以上腸桿菌科菌種可以在臨床標(biāo)本中出現(xiàn)。正常菌群與條件致病菌有許多細(xì)菌既是腸道的正常菌群，也是條件致5返回返回6腸桿菌科的共同特性1.形態(tài)染色相似革蘭陰性桿菌2.培養(yǎng)特性相同普通培養(yǎng)基上生長良好3.生化反應(yīng)活潑發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性，觸酶陽性，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，O/F試驗為發(fā)酵型。4.抗原構(gòu)造復(fù)雜5.抵抗力弱6.易變異（重點）腸桿菌科的共同特性1.形態(tài)染色相似革蘭陰性桿菌（重7O-F試驗氧化型發(fā)酵型（埃希菌）產(chǎn)堿型O-F試驗氧化型產(chǎn)堿型8氧化酶試驗

陽性：紫紅色（假單胞菌與奈瑟菌）

陰性：無色（腸桿菌）氧化酶試驗

陽性：紫紅色（假單胞菌與奈瑟菌）

陰性：無色（9硝酸鹽還原試驗

陽性：紅色（腸桿菌）陰性：淡黃色（醋酸不動桿菌）

硝酸鹽還原試驗

陽性：紅色（腸桿菌）陰性10腸桿菌科細(xì)菌抗原模式圖腸桿菌科細(xì)菌抗原模式圖11菌毛或菌毛樣結(jié)構(gòu)莢膜或微莢膜外膜蛋白內(nèi)毒素外毒素致病物質(zhì)（重點）菌毛或菌毛樣結(jié)構(gòu)致病物質(zhì)（重點）12所致疾病

腸道感染腹瀉、食物中毒、腸熱癥腸道外感染鼠疫（烈性傳染病）、泌尿道感染、肺炎、腦膜炎、傷口化膿、菌血癥（重點）所致疾?。ㄖ攸c）13腸桿菌科與其它革蘭陰性桿菌區(qū)別

（重點）腸桿菌科與其它革蘭陰性桿菌區(qū)別（重點）14苯丙氨酸脫氨酶試驗

陽性：綠色（變形桿菌）陰性：黃色（大腸埃希菌-）

苯丙氨酸脫氨酶試驗

陽性：綠色（變形桿菌）陰15葡萄糖酸鹽試驗

陽性：黃綠色（腸桿菌）陰性：藍(lán)色葡萄糖酸鹽試驗

陽性：黃綠色（腸桿菌）陰性：藍(lán)16大腸埃希菌

埃希菌屬（Escherichia）包括5個種。1.大腸埃希菌（E．coli）是最常見的臨床分離菌，也是腸道中革蘭陰性桿菌的主要成員，常引起各種腸內(nèi)外的感染，是腹瀉和泌尿道感染的主要病原菌，又分為正常（Normal）和不活潑（Inactive）2個亞種。大腸埃希菌埃希菌屬（Escherichia）包括5172.蟑螂埃希菌（E．blattae）不常見，偶可從人類標(biāo)本中檢出并有潛在的致病性。3.弗格森埃希菌（E．fergusonii）4.赫爾曼埃希菌（E．hermannii）5.傷口埃希菌（E.vulneris）。本菌屬細(xì)菌的DNAG＋C為48～52mol％。本節(jié)以大腸埃希菌為代表敘述。2.蟑螂埃希菌（E．blattae）不常見，偶可從18一、臨床意義

（一）致病因素1．侵襲力

本菌的K抗原和菌毛與侵襲力有關(guān)。K抗原：能抗吞噬，并能夠抵抗抗體和補(bǔ)體的作用。菌毛：能幫助細(xì)菌黏附于黏膜表面，使細(xì)菌在腸道內(nèi)定殖，產(chǎn)生毒素而引起相應(yīng)癥狀。有侵襲力的菌株能直接侵犯腸道黏膜上皮引起炎癥。（重點）一、臨床意義

（一）致病因192．內(nèi)毒素

大腸埃希菌的細(xì)胞壁有內(nèi)毒素活性，其毒性部位在類脂A（lipidA），與所有革蘭陰性桿菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素一樣，具有相似的病理生理作用，如發(fā)熱、休克、DIC等。2．內(nèi)毒素203．腸毒素

不耐熱腸毒素（heatlabiletoxin，LT），加熱65℃、30分鐘即被破壞；耐熱腸毒素（heatstabletoxin，ST）LT和ST均可使腸道細(xì)胞中cAMP的水平升高，引起腸液大量分泌而導(dǎo)致腹瀉。3．腸毒素21所致疾病腸道外感染泌尿道感染（最常見）膽道感染、腹膜炎、肺炎、菌血癥、新生兒腦膜炎腸道感染：ETEC、EPEC、EIEC、EHEC、EAEC

（重點）所致疾病腸道外感染泌尿道感染（最常見）（重點）22引起腸道感染的大腸埃希菌的主要致病特征菌株致病機(jī)制感染類型主要臨床表現(xiàn)發(fā)病年齡危險因素ETECLT和ST腹瀉，旅行者腹瀉大量水樣便，腹痛、惡心、脫水成人、兒童海外旅行EPEC黏附因子急性腹瀉水樣便、發(fā)熱、嘔吐、黏液便＜2歲嬰兒、成人EIEC侵入結(jié)腸黏膜上皮志賀樣膿血便膿血便，便中含紅、白細(xì)胞和黏液，發(fā)熱、腹痛成人海外旅行EHEC類志賀毒素腹瀉、出血性腸炎腹瀉（無WBC），腹痛、血便、發(fā)熱、HUS（溶血性尿毒性綜合征

）兒童、老人未熟牛肉牛奶EAEC未明急、慢性腹瀉水瀉、嘔吐所有年齡（重點）引起腸道感染的大腸埃希菌的主要致病特征致病機(jī)制感染類型主要臨23二、細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌特性形態(tài)特征24大腸埃希菌革蘭染色形態(tài)特征大腸埃希菌革蘭染色形態(tài)特征25大腸埃希菌電鏡圖返回大腸埃希菌電鏡圖返回26培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高在普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，形成較大的圓形、光滑、濕潤、灰白色的菌落（重點）培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高（重點）27大腸埃希菌菌落特征（血平板）培養(yǎng)特性在血瓊脂上某些菌株可產(chǎn)生β-溶血，（重點）大腸埃希菌菌落特征（血平板）培養(yǎng)特性在血瓊脂上某些菌株可產(chǎn)生28大腸埃希菌菌落特征（MAC）返回在腸道選擇培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳糖，形成有色菌落。（重點）大腸埃希菌菌落特征（MAC）返回在腸道選擇培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳糖29生化反應(yīng)（重點）發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，吲哚、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽（IMVC）等4個試驗的結(jié)果為＋＋――，在克氏鐵瓊脂（KIA）上斜面和底層均產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，H2S陰性（AA＋―），在動力、吲哚、脲酶（MIU）培養(yǎng)基上的反應(yīng)結(jié)果為＋＋―，生化反應(yīng)（重點）發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，30大腸埃希菌抗原結(jié)構(gòu)返回（重點）大腸埃希菌抗原結(jié)構(gòu)返回（重點）311．O抗原是多糖磷脂復(fù)合物（LPS），耐熱，加熱100℃不能滅活，目前已知有171種，是血清學(xué)分型的基礎(chǔ)。2．H抗原是不耐熱的蛋白質(zhì)，已知有56種，均為單相菌株。3．K抗原是多糖莢膜抗原，對熱穩(wěn)定，在K抗原存在時能阻止O凝集。已知有100種，不是每個菌株均有K抗原。大腸埃希菌的血清型別按O：K：H的順序，以數(shù)字表示，如O111：K58：H2、O157：H7等。（重點）1．O抗原是多糖磷脂復(fù)合物（LPS），耐熱，加熱100℃32（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集（三）檢驗方法

（四）耐藥性

（五）結(jié)果分析與報告三、微生物學(xué)檢驗（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集三、微生物學(xué)檢驗33大腸埃希菌檢驗程序（接種分離用）（重點）大腸埃希菌檢驗程序（接種分離用）（重點）341）ETEC：生化反應(yīng)加血清分型加腸毒素測定生化反應(yīng)符合大腸埃希菌，屬于一些特定的血清型別；主要依賴ST和LT腸毒素的檢測，常用生物學(xué)方法或細(xì)胞培養(yǎng)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)方法。1）ETEC：生化反應(yīng)加血清分型加腸毒素測定352）EPEC：生化反應(yīng)加血清分型，用多價抗血清檢測其O抗原。取5～10個乳糖陽性的大腸埃希菌菌落，進(jìn)行特異性抗血清的凝集試驗，3）EIEC：生化反應(yīng)加血清分型加毒素測定，本菌與志賀菌相似，多數(shù)EIEC為動力陰性，乳糖不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵。所有EIEC菌落均為賴氨酸脫羧酶陰性，無動力，其中最常見的血清型O152和O124為乳糖陰性，與志賀菌的抗血清有交叉反應(yīng)，兩菌屬十分相似，主要的鑒別試驗：醋酸鈉、葡萄糖銨利用試驗和粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗，大腸埃希菌三者均陽性，而志賀菌三者均陰性。毒力測定（豚鼠眼結(jié)膜試驗）：以被檢菌液接種于豚鼠眼結(jié)膜囊內(nèi)，產(chǎn)生典型的角膜結(jié)膜炎癥狀，并在角膜上皮細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量細(xì)菌者，為毒力試驗陽性。（重點）2）EPEC：生化反應(yīng)加血清分型，（重點）364）EHEC（類志賀毒素型）：血清分型加生化反應(yīng)可用山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）直接篩選不發(fā)酵山梨醇的菌落（35～37℃培養(yǎng)24～48h后選無色菌落），經(jīng)次代培養(yǎng)后可用膠乳凝集試驗檢測O157抗原。（重點）4）EHEC（類志賀毒素型）：（重點）37O157:H7菌落特征（山梨醇麥康凱瓊脂平板，無色菌落）（重點）O157:H7菌落特征（山梨醇麥康凱瓊脂平板，無色菌落）（重38沙門菌屬沙門菌屬39一、分類一、分類40二、細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)變異性抵抗力二、細(xì)菌特性形態(tài)特征41傷寒沙門菌革蘭染色（一）形態(tài)特征革蘭陰性直桿菌，較細(xì)長，大小0.7～1.5μm×2.0～5.0μm，多具有周鞭毛，能運動，有時會出現(xiàn)無鞭毛的突變型。無芽孢，無莢膜。

（重點）傷寒沙門菌革蘭染色（一）形態(tài)特征（重點）42傷寒沙門菌菌落特征（血平板）（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長溫度35～37℃，最適生長pH為6.8～7.8。本菌屬對營養(yǎng)的要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長的菌落為圓形、光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊的菌落，有時可出現(xiàn)粗糙型的菌落。（重點）傷寒沙門菌菌落特征（血平板）（二）培養(yǎng)特性（重點）43傷寒沙門菌菌落特征（MAC）

在腸道選擇性培養(yǎng)基上菌落小至中等，透明或半透明，乳糖不發(fā)酵，與志賀菌的菌落相似（重點）傷寒沙門菌菌落特征（MAC）在腸道選擇性培養(yǎng)基上44傷寒沙門菌菌落特征（SS）有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂上形成中心黑色的菌落。（重點）傷寒沙門菌菌落特征（SS）有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SS瓊脂45傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）（三）生化反應(yīng)

乳糖陰性、在三糖鐵瓊脂中表現(xiàn)為產(chǎn)堿/產(chǎn)酸或產(chǎn)堿/產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S陽性、脲酶陰性（重點）傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）（三）生化反應(yīng)46沙門菌IMViC試驗（－＋－－）動力陽性、吲哚陰性、VP陰性、枸櫞酸鹽陰性、鳥氨酸陽性。凡臨床分離菌乳糖陽性、吲哚陽性或脲酶陽性者均不考慮為沙門菌。（重點）沙門菌IMViC試驗（－＋－－）動力陽性、吲哚陰性、VP47（四）抗原結(jié)構(gòu)主要有3種，即菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原及表面抗原（Vi抗原等）。1．O抗原為多糖－類脂－蛋白質(zhì)復(fù)合物，具耐熱性，能耐受100℃2.5h。O抗原共有58種，以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列，現(xiàn)已排至第67，但其中有9種被刪除，故數(shù)字是不連續(xù)的。每個沙門菌的血清型可含一種或數(shù)種O抗原。（重點）（四）抗原結(jié)構(gòu)主要有3種，即菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原及48凡含共同抗原成分的血清型歸為一個群，每個群以O(shè)加上阿拉伯?dāng)?shù)字及括號中大寫的26個英文字母（A～Z）順序編排，如O2群（A），O4群（B），O50群（Z）等，Z以后無英文字母標(biāo)記，直接以O(shè)加數(shù)字表示，如O51群～O67群。O抗原是分群的依據(jù)。其刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體以IgM為主，與相應(yīng)的抗血清反應(yīng)時呈顆粒狀凝集。凡含共同抗原成分的血清型歸為一個群，每個群以O(shè)加上阿拉伯?dāng)?shù)字49所致疾病傷寒和副傷寒急性胃腸炎或食物中毒

菌血癥（或敗血癥）（重點）所致疾病傷寒和副傷寒（重點）50腸熱癥即指傷寒和副傷寒。最典型的是由傷寒沙門菌引起的傷寒，表現(xiàn)為發(fā)熱、血培養(yǎng)或肥達(dá)反應(yīng)陽性。腸熱癥也可由其他沙門菌引起，常表現(xiàn)為輕度發(fā)熱和腹瀉。（重點）腸熱癥即指傷寒和副傷寒。最典型的是由傷寒沙門菌引起的傷寒，表51傷寒的發(fā)病過程細(xì)菌隨污染的食品或水經(jīng)口感染，穿過小腸上皮進(jìn)入黏膜下組織。細(xì)菌在此被吞噬細(xì)胞吞噬，但吞噬后不被消滅反在吞噬細(xì)胞內(nèi)繁殖，并隨吞噬細(xì)胞經(jīng)淋巴管到達(dá)淋巴結(jié)。在淋巴結(jié)內(nèi)大量繁殖后，經(jīng)胸導(dǎo)管進(jìn)入血流（第一次菌血癥）。此時黏膜在臨床上出現(xiàn)發(fā)熱、不適等癥狀。傷寒的發(fā)病過程細(xì)菌隨污染的食品或水經(jīng)口感染，穿過小腸上皮進(jìn)入52隨后，細(xì)菌隨血流播散至肝、脾、膽囊、腎和骨髓等實質(zhì)器官中，繼續(xù)大量繁殖，再次進(jìn)入血流（第二次菌血癥）并隨血液擴(kuò)散至全身各器官及皮膚，患者出現(xiàn)持續(xù)高熱、肝脾腫大、皮疹和全身（內(nèi)毒素）中毒癥狀。膽囊中的細(xì)菌隨膽汁進(jìn)入腸腔，可經(jīng)糞便排出，腎臟中的細(xì)菌隨尿排出體外。隨后，細(xì)菌隨血流播散至肝、脾、膽囊、腎和骨髓等實質(zhì)器官中，繼53本病潛伏期7～20天，典型病程3～4周，發(fā)病2周后機(jī)體出現(xiàn)免疫反應(yīng)，通過特異性抗體和致敏淋巴細(xì)胞消滅細(xì)菌，使疾病好轉(zhuǎn)，但同時也可引起遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致腸壁孤立和集合淋巴結(jié)的壞死和潰瘍，甚至造成腸穿孔而危及生命。攜帶者：傷寒沙門菌感染過后約3％患者可成為攜帶者，在糞便中可持續(xù)排菌長達(dá)1年或1年以上。本病潛伏期7～20天，典型病程3～4周，發(fā)病2周后機(jī)體出現(xiàn)免54（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集（三）檢驗方法四、微生物學(xué)檢驗（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集四、微生物學(xué)檢驗55沙門菌檢驗程序

、

（重點）（水泔樣便）（拭子）沙門菌檢驗程序、（重點）（水56標(biāo)本采集根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同分別采集不同的標(biāo)本。傷寒沙門菌分離培養(yǎng)原則上于發(fā)病第1周取血，第2、3周取糞便做培養(yǎng)的分離率高，第3周也可取尿液培養(yǎng)，全病程均可作骨髓培養(yǎng)。血清學(xué)診斷應(yīng)在病程的不同時期分別采集2～3份標(biāo)本。（重點）標(biāo)本采集根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同分別采集不同的標(biāo)本。57鑒定挑選疑為沙門菌的可疑菌落（EMB上無色或不透明琥珀色；MAC上較小、無色透明；SS上不透明或透明、無色或中央為黑色的菌落（膽鹽）；XLD上呈紅色或中央為黑色的菌落（去氧膽酸鈉））。將可疑菌落進(jìn)一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。（重點）鑒定挑選疑為沙門菌的可疑菌落（EMB上無色或不透明琥珀色；M58沙門菌血清學(xué)鑒定沙門菌血清學(xué)鑒定59第8章腸桿菌科2課件60抗體檢測（肥達(dá)反應(yīng)）用已知傷寒、副傷寒沙門菌的O、H抗原，檢測受檢血清中有無相應(yīng)的抗體的半定量凝集試驗，稱為肥達(dá)反應(yīng)（Widaltest）。與細(xì)菌分離培養(yǎng)同時進(jìn)行或在前者失敗的情況下，能輔助診斷傷寒、副傷寒A、B和C引起的腸熱癥。（重點）抗體檢測（肥達(dá)反應(yīng)）用已知傷寒、副傷寒沙門菌的O、H抗原，61330株沙門菌屬對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞胺培南頭孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/他唑巴坦氨芐西林/舒巴坦頭孢曲松環(huán)丙沙星左氧沙星頭孢吡肟頭孢呋辛頭孢唑啉第一代頭孢第二代頭孢廣譜氨基組青霉素第三代喹諾酮第二代喹諾酮類第三代頭孢第四代頭孢第三代頭孢廣譜脲基組青霉素碳青霉烯330株沙門菌屬對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞胺培南頭62志賀菌屬志賀菌屬63一、分類志賀菌屬分為A、B、C、D4群：A群為痢疾志賀菌（S.dysenteriae），B群為福氏志賀菌（S.flexneri），C群為鮑氏志賀菌（S.boydii），D群為宋內(nèi)志賀菌（S.sonnei）。

一、分類志賀菌屬分為A、B、C、D4群：A群為痢64二、細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)變異性抵抗力（重點）二、細(xì)菌特性形態(tài)特征（重點）65志賀菌革蘭染色（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)革蘭陰性桿菌，菌體短小，無芽孢，無莢膜，無鞭毛，有菌毛。（重點）志賀菌革蘭染色（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)（重點）66志賀菌菌落特征(MAC)（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長溫度為37℃，最適pH為7.2～7.4。對營養(yǎng)的要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長。在腸道鑒別培養(yǎng)基上形成乳糖不發(fā)酵、中等大小、無色半透明的菌落，宋內(nèi)志賀菌常形成粗糙型菌落。

（重點）志賀菌菌落特征(MAC)（二）培養(yǎng)特性（重點）67（四）抗原結(jié)構(gòu)無H抗原，有O抗原，部分菌種有K抗原。O抗原是分類的依據(jù)，有群特異性和型特異性兩種抗原，根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原的不同，將志賀菌屬分為4個血清群（A、B、C、D）和40余個血清型。O抗原耐熱，加熱100℃、60min不被破壞。K抗原存在時能阻斷O抗原與相應(yīng)抗血清的凝集作用。加熱100℃、60min可消除K抗原對O抗原的阻斷作用。（重點）（四）抗原結(jié)構(gòu)（重點）68（六）抵抗力本屬細(xì)菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細(xì)菌為低。在1％石炭酸中15～30min和加熱60℃10min即被殺死，對酸較敏感，在運送時須使用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。見p114,表8-11（主要通過血清學(xué)鑒定）（重點）（六）抵抗力本屬細(xì)菌對理化因素的抵抗力較其他腸桿菌科細(xì)菌為低69致病物質(zhì)：1）菌毛侵襲損傷與炎癥反應(yīng)2）內(nèi)毒素造成上皮細(xì)胞死亡，黏膜發(fā)炎，血管栓塞，壞死、脫落與潰瘍，膿血便。3）細(xì)胞毒：殺滅體細(xì)胞4）腸毒素：水樣瀉5）神經(jīng)毒：麻痹甚至死亡三、臨床意義致病物質(zhì)：三、臨床意義70所致疾病志賀菌屬引起細(xì)菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：急性細(xì)菌性痢疾（1）典型的細(xì)菌性痢疾：發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉，便中含多量血、粘液與白細(xì)胞（2）非典型菌?。?）中毒性菌痢慢性菌痢帶菌者所致疾病志賀菌屬引起細(xì)菌性痢疾，主要有以下3種臨床類型：71志賀菌檢驗程序

四、微生物學(xué)檢驗志賀菌檢驗程序四、微生物學(xué)檢驗72標(biāo)本采集在抗生素使用前采集新鮮糞便中膿、血、黏液部分，床邊接種或立即送檢，不能及時接種者可用卡-布運送培養(yǎng)基送檢，昏迷不能排便患者可用肛拭取樣。

一般不侵入血流。（重點）標(biāo)本采集在抗生素使用前采集新鮮糞便中膿、血、黏液部分，床邊接73275株志賀菌屬對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞胺培南頭孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/他唑巴坦氨芐西林/舒巴坦頭孢曲松環(huán)丙沙星左氧沙星頭孢吡肟頭孢呋辛頭孢唑啉275株志賀菌屬對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞胺培南頭74TSI（三糖鐵）試驗-主要應(yīng)用于腸桿菌鑒定成分：蛋白胨20.0g

牛肉膏3.0g

乳糖10.0g

蔗糖10.0g

葡萄糖1.0g

硫酸亞鐵銨(含6個結(jié)晶水)0.5g

酚紅0.025g或5g/L溶液5mL

氯化鈉5.0g

硫代硫酸鈉0.5g

瓊脂12.0g

蒸餾水1000.0mL原理：本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。TSI（三糖鐵）試驗-主要應(yīng)用于腸桿菌鑒定成分：752：志賀氏菌

3：沙門氏菌4：大腸埃希菌

（重點）2：志賀氏菌

3：沙門氏菌（重點）76第五節(jié)耶爾森菌屬一、分類二、鼠疫耶爾森菌三、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌四、其他耶爾森菌第五節(jié)耶爾森菌屬一、分類77其他尚有：假結(jié)核耶爾森菌（Y.pseudotuberculosis）奧氏耶爾森菌（Y.aldouae）伯氏耶爾森菌（Y.bercovieri）弗氏耶爾森菌（Y.frederiksenii）中間耶爾森菌（Y.intermedia）等9種耶爾森菌。均可從臨床標(biāo)本中分離得到，其相互之間的生化性狀相似，均能在4℃以及在CIN（含去氧膽酸鈉與結(jié)晶紫）上生長，可在冷凍食品中增殖，并具有潛在的致病性。

其他尚有：78細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)細(xì)菌特性形態(tài)特征79鼠疫耶爾森菌鏡下形態(tài)（Wayson染色）

G陰性菌，直桿狀或球桿狀，有莢膜，無芽孢，無鞭毛，偶有2極濃染，陳舊培養(yǎng)基或高鹽培養(yǎng)基呈球狀，棒狀或啞鈴狀等多形性。（重點）鼠疫耶爾森菌鏡下形態(tài)（Wayson染色）

G陰性菌，直桿狀或80鼠疫耶爾森菌菌落特征（MAC）兼性厭氧，耐低溫，MAC上形成細(xì)小、粘稠粗糙菌落。最適溫度25-28oC,血瓊脂上37oC，48h形成柔軟粘稠菌落，肉湯培養(yǎng)基開始渾濁生長，24h后沉淀生長，48h形成菌膜。（重點）鼠疫耶爾森菌菌落特征（MAC）兼性厭氧，耐低溫，MAC上形成81小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落特征（CIN瓊脂平板)

無色，半透明，扁平，較小菌落（重點）小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落特征（CIN瓊脂平板)

無色，半透明，821鼠疫耶爾森菌：IMVC(-+--),動力試驗（－），賴氨酸（－）、鳥氨酸脫羧酶（－）、脲酶（－）、H2S（－）；不液化明膠，穿刺培養(yǎng)時，培養(yǎng)物表面生長呈膜狀，沿穿刺線呈縱樹狀生長；能分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對大多數(shù)糖不分解。2小腸結(jié)腸炎耶爾森菌：KIA：AA--或KA--不分解乳糖和鼠李糖，能分解葡糖糖與蔗糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣與H2S；枸櫞酸鹽（-）；脲酶（+）；吲哚（-/+）；鳥氨酸脫羧酶（+）；動力、V-P反應(yīng)結(jié)果與孵育溫度有關(guān)（22℃～25℃陽性，35℃～37℃陰性）根據(jù)菌落特征，菌體形態(tài)染色特點、嗜冷性及典型生化結(jié)果即可初步診斷本菌。

生化反應(yīng)：（重點）1鼠疫耶爾森菌：生化反應(yīng)：（重點）83鼠疫耶爾森菌致病物質(zhì)侵襲力FI抗原（封套抗原）

V/W抗原（毒力抗原）內(nèi)毒素鼠毒素（外毒素）（重點）鼠疫耶爾森菌致病物質(zhì)侵襲力（重點）84所致疾病

甲類烈性傳染病——鼠疫常見臨床類型：腺鼠疫敗血型鼠疫肺鼠疫及其他所致疾病85第8章腸桿菌科2課件86（一）檢驗程序（二）標(biāo)本采集（三）檢驗方法

（四）結(jié)果分析與報告鼠疫耶爾森菌微生物學(xué)檢驗（一）檢驗程序鼠疫耶爾森菌微生物學(xué)檢驗87一旦疑為本菌，應(yīng)立即向本地區(qū)疾病控制中心等部門報告，并將菌種送檢驗中心或?qū)I(yè)實驗室作進(jìn)一步鑒定。診斷確立后除對患者進(jìn)行隔離治療外，對疫區(qū)及有關(guān)人員須采取有效的預(yù)防隔離措施，防止疫情擴(kuò)散。

一旦疑為本菌，應(yīng)立即向本地區(qū)疾病控制中心等部門報告，并將菌88鼠疫耶爾森菌檢驗程序

鼠疫耶爾森菌檢驗程序89鼠疫耶爾森菌標(biāo)本采集1.臨床標(biāo)本淋巴結(jié)穿刺液、血液或痰標(biāo)本2.非臨床標(biāo)本尸檢取病變組織，鼠標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格消毒體表，再進(jìn)行采集鼠疫耶爾森菌標(biāo)本采集1.臨床標(biāo)本淋巴結(jié)穿刺液、血液或痰90第六節(jié)枸櫞酸桿菌屬第六節(jié)枸櫞酸桿菌屬91與醫(yī)院感染有關(guān)的●弗勞地枸櫞酸桿菌（C.freundii）科澤枸櫞酸桿菌（C.koseri）布拉克枸櫞酸桿菌（C.braakii）臨床意義：人和動物腸道正常菌群，條件致病菌主要引起院感，包括腹瀉和腸道外感染如菌血癥、腦膜炎和腦膿腫，往往導(dǎo)致高病死率與延長住院天數(shù)?？茲设蹤此釛U菌引起嬰幼兒腦膜炎與腦膿腫一、分類與醫(yī)院感染有關(guān)的一、分類92細(xì)菌特性形態(tài)特征革蘭陰性桿菌，有動力，周鞭毛，無芽孢，無莢膜。培養(yǎng)特性兼性厭氧，能在普通瓊脂生長，血瓊脂平板形成灰白色、濕潤、隆起、邊緣整齊，直徑1-2mm不溶血菌落，腸道選擇培養(yǎng)基上乳糖發(fā)酵為渾濁菌落，弗勞地枸櫞酸桿菌產(chǎn)H2S，形成有黑色中心的菌落。生化反應(yīng)氧化酶（－）、觸酶（＋）、IMViC(＋＋－＋)、枸櫞酸鹽（＋）、葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、還原硝酸鹽（＋）、KIA(AA＋＋或kA＋＋)、三糖鐵（A/A產(chǎn)氣）、動力（＋）、Vp(－)、精氨酸（＋）、賴氨酸（－）（重點）細(xì)菌特性形態(tài)特征（重點）93弗勞地枸櫞酸桿菌菌落特征（MAC）

無色透明或紅色（重點）弗勞地枸櫞酸桿菌菌落特征（MAC）

無色透明或紅色（重點）94枸櫞酸桿菌IMViC(＋＋－＋)

枸櫞酸桿菌IMViC(＋＋－＋)95第7節(jié)克雷伯菌屬第7節(jié)克雷伯菌屬96

肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）產(chǎn)酸（催娩）克雷伯菌（K.axytoca）解鳥氨酸克雷伯菌（K.ornithinolytica）植生克雷伯菌（K.planticola）土生克雷伯菌（K.terrigena）肺炎克雷伯菌又可分為3個亞種：肺炎克雷伯菌肺炎亞種（subsp.pneumoniae）肺炎克雷伯菌臭鼻亞種（subsp.ozaenae）肺炎克雷伯菌鼻硬結(jié)亞種（subsp.rhinoscleromatis）

一、分類肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）一、分97二、細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)二、細(xì)菌特性形態(tài)特征98肺炎克雷伯菌革蘭染色（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，無鞭毛，無芽孢肺炎克雷伯菌革蘭染色（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)99肺炎克雷伯菌莢膜染色患者標(biāo)本直接涂片或在營養(yǎng)豐富培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物可見菌體外有明顯的莢膜。肺炎克雷伯菌莢膜染色患者標(biāo)本直接涂片或在營養(yǎng)豐富培養(yǎng)基上的培100肺炎克雷伯菌的菌落特征（血瓊脂平板）

（二）培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在初次分離培養(yǎng)基可形成較大、凸起灰白色黏液型的菌落。菌落大而厚實、光亮，相鄰菌落容易發(fā)生融合肺炎克雷伯菌的菌落特征（血瓊脂平板）

（二）培養(yǎng)特性101肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）在MAC培養(yǎng)基上發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，形成較大的黏液型、紅色的菌落，紅色可擴(kuò)散至菌落周圍的培養(yǎng)基中。肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）在MAC培養(yǎng)基上發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸102肺炎克雷伯菌粘絲試驗用接種針沾取時可挑出長絲狀細(xì)絲。肺炎克雷伯菌粘絲試驗用接種針沾取時可挑出長絲狀細(xì)絲。103克雷伯菌屬的細(xì)菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的條件致病菌。所致疾?。悍窝?、腦膜炎、腹膜炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥三、臨床意義克雷伯菌屬的細(xì)菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的104肺炎克雷伯菌是臨床標(biāo)本中常見的細(xì)菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎。該菌在正常人口咽部的帶菌率為1%～6%，在住院患者中可高達(dá)20%，是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并發(fā)肺部感染的潛在的危險因素。肺炎克雷伯菌是臨床標(biāo)本中常見的細(xì)菌，可引起典型的原發(fā)性肺炎。105肺炎克雷伯菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染，包括腸炎和腦膜炎（嬰兒），泌尿道感染（兒童和成人）及菌血癥。近年在一些亞洲地區(qū)（特別是臺灣和韓國）由肺炎克雷伯菌引起的肝膿腫等嚴(yán)重社區(qū)獲得性侵襲性感染有上升的趨勢。肺炎克雷伯菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染，包括腸炎和腦膜炎（106（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集（三）檢驗方法

（四）耐藥性四、微生物學(xué)檢驗（一）檢驗程序

（二）標(biāo)本采集四、微生物學(xué)檢驗107肺炎克雷伯菌檢驗程序肺炎克雷伯菌檢驗程序108鑒定（1）屬的鑒定：動力陰性，鳥氨酸脫羧酶陰性（解鳥氨酸勞特菌陽性）。（2）種的鑒定：肺炎克雷伯菌吲哚陰性，而產(chǎn)酸克雷伯菌吲哚陽性。

鑒定109克雷伯菌屬與其他條件致病菌鑒別

生化反應(yīng)

克雷伯菌屬腸桿菌屬泛菌屬哈夫尼菌屬沙雷菌屬肺炎克雷伯菌產(chǎn)酸克雷伯菌產(chǎn)氣腸桿菌陰溝腸桿菌成團(tuán)泛菌蜂房哈夫尼菌粘質(zhì)沙雷菌液化沙雷菌吲哚－+－－（－）－－－動力－－++（+）（+）++賴氨酸+++－－+++精氨酸－－－+－－－－鳥氨酸－－++－+++Dnase（25℃）－－－－－－+（+）明膠酶（22℃）－－－－－－++乳糖++++d－－－蔗糖++++d－++山梨醇++++d－++側(cè)金盞花醇+++（－）－－d－阿拉伯糖++++++－+克雷伯菌屬與其他條件致病菌鑒別

生化反應(yīng)

克雷伯菌屬腸桿菌屬11010533株肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞胺培南頭孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/他唑巴坦氨芐西林/舒巴坦頭孢曲松環(huán)丙沙星左氧沙星頭孢吡肟頭孢呋辛頭孢唑啉第一代頭孢第二代頭孢廣譜氨基組青霉素第三代頭孢第二代喹諾酮類第三喹諾酮第四代頭孢第三代頭孢廣譜脲基組青霉素碳青霉烯10533株肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率耐藥率(%)亞111第八節(jié)腸桿菌屬第八節(jié)腸桿菌屬112產(chǎn)氣腸桿菌（E.aerogenes）陰溝腸桿菌（E.cloacea）日勾維腸桿菌（E.gergoviae）阪崎腸桿菌（E.sakazakii）中間型腸桿菌（E.intermedium）泰洛腸桿菌（E.taylorac）河生腸桿菌（E.amnigenus）阿氏腸桿菌（E.asburiac）致癌腸桿菌（E.cancerogenus）溶解腸桿菌（E.dissolvens）超壓腸桿菌（E.nimipressualis）

一、分類產(chǎn)氣腸桿菌（E.aerogenes）一、分類113陰溝腸桿菌革蘭染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無芽胞，有些菌株有莢膜。細(xì)菌特性陰溝腸桿菌革蘭染色革蘭陰性粗短桿菌，有周身鞭毛，無芽胞，有些114陰溝腸桿菌菌落特征(MAC)兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上能夠生長，形成大而濕潤的黏液狀菌落，在血瓊脂上不溶血，在腸道選擇培養(yǎng)基上形成乳糖發(fā)酵（呈紅色）的菌落。陰溝腸桿菌菌落特征(MAC)兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培115產(chǎn)氣腸桿菌IMViC試驗（－－＋＋）重點產(chǎn)氣腸桿菌IMViC試驗（－－＋＋）重點116廣泛存在污水、土壤、蔬菜的腸道正常菌群，也是條件致病菌。腸桿菌屬是腸桿菌科中最常見的環(huán)境菌群，醫(yī)院感染的重要病原菌。在臨床微生物室檢出率最高的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，可引起泌尿道感染、呼吸道感染、傷口感染以及敗血癥。臨床意義重點廣泛存在污水、土壤、蔬菜的腸道正常菌群，也是條件致病菌。腸桿117

1）IMViC試驗：--++（比較大腸埃希菌）2）動力和鳥氨酸脫羧酶試驗肺炎克雷伯菌為陰性腸桿菌屬多數(shù)為陽性生化反應(yīng)

1）IMViC試驗：--++（比較大腸埃希菌）生化反應(yīng)118腸桿菌科細(xì)菌常產(chǎn)生AmpC酶，尤以陰溝腸桿菌最為突出。它是導(dǎo)致革蘭陰性菌尤其是陰溝腸桿菌對1～3代頭孢菌素、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類、頭霉素類及含酶抑制劑的復(fù)合制劑耐藥的重要原因。產(chǎn)AmpC酶細(xì)菌的治療，首選4代頭孢（頭孢吡肟）和碳青霉烯類抗生素。近年來已有質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶出現(xiàn)。

耐藥性：重點腸桿菌科細(xì)菌常產(chǎn)生AmpC酶，尤以陰溝腸桿119第九節(jié)沙雷菌屬第九節(jié)沙雷菌屬120