提高結(jié)核菌痰培養(yǎng)陽性率的體會

提高結(jié)核菌痰培養(yǎng)陽性率的體會目的視不同質(zhì)量標本，通過規(guī)范的操作，提高痰標本結(jié)核菌培養(yǎng)陽性率。方法簡單法（羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)法）培養(yǎng)，以中國疾控中心國家結(jié)核病參比實驗室、中國疾控中心結(jié)核病預防控制中心的《結(jié)核菌培養(yǎng)標準化操作及質(zhì)量保證手冊》，衛(wèi)生部疾控預防控制局、中國疾病預防控制中心的《全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測實施手冊》為標準做參考和比對。結(jié)果在2013年1月至2013年12月實行的全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測中，對照《全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測實施手冊》：涂陽培陰率應小于10%，污染率應小于5%。本監(jiān)測點很好地控制在標準以內(nèi)。合計培養(yǎng)陽性率53%，高于多篇文獻的報道的水平。結(jié)論本監(jiān)測點按照規(guī)范操作程序和本人的實際經(jīng)驗相結(jié)合，使全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測這一艱巨的任務圓滿完成，各項指標符合國家標準。特別是涂陰病例培養(yǎng)陽性比例增大，為涂陰病例增加了明確診斷的標準，為耐藥監(jiān)測增加了龐大的隊伍，為大批患者提供了治療的用藥依據(jù)。標簽：結(jié)核菌;培養(yǎng);陽性率;標準化操作【引言】隨著中國結(jié)核病控制規(guī)劃（NTP）工作不斷深入，耐藥結(jié)核病呈上升趨勢【1】。單純依靠基本現(xiàn)代結(jié)核病控制策略（DOTS）中痰涂片顯微鏡檢查（涂片鏡檢）已不能滿足工作需要，這對實驗室工作提出了新的要求。痰標本結(jié)核菌培養(yǎng)既能提高結(jié)核病的診斷率[2]，而且分枝桿菌培養(yǎng)是目前實驗室耐藥性診斷的前提和重要療效評價方法。結(jié)核菌培養(yǎng)是結(jié)核病細菌學檢查的重要方法之一。目前在我國公共衛(wèi)生領域結(jié)核菌培養(yǎng)開展的并不普遍。為了明確涂片陰性患者的診斷以及應對日益突出的耐藥結(jié)核病問題，培養(yǎng)工作逐步被提上日程。而結(jié)核病實驗室分枝桿菌培養(yǎng)檢查水平參差不齊，因此，怎樣規(guī)范操作以提高痰培養(yǎng)陽性率顯得尤為迫切。【材料和方法】1.1方法：簡單法1.2設備材料①Ⅱ級生物安全柜。②恒溫培養(yǎng)箱。③渦輪振蕩器。④帶螺旋蓋的前處理管。⑤2ml無菌刻度吸管（每份標本需要一支吸管）等等。2.試劑：4%氫氧化鈉（NaOH）溶液和酸性改良羅氏培養(yǎng)基3.環(huán)境、設備、材料準備3.1將酸性羅氏培養(yǎng)管從冷藏環(huán)境取出，室溫放置。3.2將所需材料置于生物安全柜內(nèi)。3.3啟動生物安全柜，預運行3～5分鐘，檢查生物安全柜運行是否正常。3.4在生物安全柜外將病人姓名標記在前處理管上。3.5待酸性羅氏培養(yǎng)基恢復至室溫，擦除培養(yǎng)管外壁的冷凝水，在培養(yǎng)管斜面的背面標記姓名、實驗序號、接種日期。4.操作步驟（1）參照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標準化操作程序》。（2）附本人的經(jīng)驗總結(jié)：①所用試劑必須在有效期內(nèi)且存放于合適條件。所用試劑和材料必須無菌無毒。②所用設備運行正常。③標本及時處理，不能及時處理的盡快放置2～8oC冰箱儲存，最好不超過7天。④以標本的濃稠度加入NaOH，濃稠的標本取1～2ml，加2倍的NaOH;稀薄的痰液可以取3～4ml，再加入0.5～1倍的NaOH。這樣，既保證標本量，又使前處理管內(nèi)的液體不要過多或過少而影響震蕩液化。堿化的時間在NaOH加入到接種最好控制在15～20分鐘，時間長了，會殺死結(jié)核菌，時間短了起不到去污染的目的。接種前處理后的痰標本，痰液膿的接種2～3滴，稀薄的接種3～5滴。一定要讓痰液鋪滿整個培養(yǎng)管的斜面并保持斜面水平24小時或更長。5.培養(yǎng)結(jié)果觀察：接種后第3日和第7日觀察培養(yǎng)情況，此后每周觀察一次（最好中間增加一次），直至第八周末。每次觀察結(jié)果登記。一般在前二周之內(nèi)出現(xiàn)的黃色、光滑、濕潤的菌落可能為非結(jié)核分枝桿菌。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基液化或長霉菌則報告污染?！窘Y(jié)果評價】在2013年1月至2013年12月實行的全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測中，本監(jiān)測點總共涂片培養(yǎng)有效納入患者215例。其中培陽115例，涂陽培陰1例，，涂陰培陰99例，見表1。表1本監(jiān)測點在2013年全國結(jié)核病耐藥監(jiān)測中的涂片培養(yǎng)結(jié)果對照《全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測實施手冊》：涂陽培陰率應小于10%，污染率應小于5%。本監(jiān)測點很好地控制在標準以內(nèi)。合計培養(yǎng)陽性率53%，高于多篇文獻的報道的水平[3][4][5]。首先，我們始終叮囑患者留取高質(zhì)量的痰，好的樣本是準確診斷的關(guān)鍵[6]。涂陰病例培養(yǎng)陽性數(shù)為50，占培養(yǎng)陽性總數(shù)的43%。為何如此多的涂陰病例培養(yǎng)陽性？原因：1.接收的標本絕大多數(shù)不合格，標本量不足且唾液居多，或者極少量的痰混合大量唾液，無法滿足涂片質(zhì)量，涂陽的概率也就降低。2.患者重新留取標本的依從性很差，所以我們收到任何標本都具體問題具體分析，按標準操作進行。3.培養(yǎng)時，對質(zhì)量差的標本，在允許的范圍內(nèi)盡量增大接種量?！窘Y(jié)論】本監(jiān)測點按照規(guī)范操作程序和本人的實際經(jīng)驗相結(jié)合，使全國結(jié)核病耐藥性監(jiān)測這一艱巨的任務圓滿完成，各項指標符合國家標準。特別是涂陰病例培養(yǎng)陽性比例增大，為涂陰病例增加了明確診斷的標準，為耐藥監(jiān)測增加了龐大的隊伍，為大批患者提供了治療的用藥依據(jù)。參考文獻：[1]DrobniewskiF，NikolayevskyyV，MaxeinerH，BalabanovaY，CasaliN，KontsevayaI，IgnatyevaO.Rapiddiagnosticsoftuberculosisanddrugresistanceintheindustrializedworld：clinicalandpublichealthbenefitsandbarrierstoimplementation[J].BMCMed.2013，11（8）：190.[2]何斌，賀鋼楓.805例肺結(jié)核病人痰培養(yǎng)結(jié)果分析[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志，2011，43（2）：241-242.[3]武潔.結(jié)核分枝桿菌及耐藥結(jié)核分枝桿菌快速的檢測研究[D].復旦大學2011.[4]李國剛，董彬，李俊娟.運用不同實驗方法提高菌陽肺結(jié)核患者檢出率的實施性研究[J].河北醫(yī)藥，2009，31（21）：2860-2861.[5]李秋根、劉江紅、邊澤源.不同檢測方法對肺結(jié)核診斷價值的探討[J].中國危重病急救醫(yī)學，2002，14（9）：543-544.[6]SakundarnoM，NurjazuliN，JatiS，etal.Insufficientqualityofsputumsubmittedfo