食用菌制種定稿2

第一節(jié)食用菌菌種概述

第二節(jié)菌種培養(yǎng)基第三節(jié)菌種的分離

第四章食用菌菌種生產(chǎn)第一節(jié)食用菌菌中概述

一、菌種的概念菌種（廣義）：是指以保藏、試驗、栽培和其它用途為目的，具有繁衍能力，遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子、組織或菌絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體。菌種（狹義）：是指以適宜的營養(yǎng)培養(yǎng)基為載體進行純培養(yǎng)的菌絲體，也就是培養(yǎng)基質和菌絲體的聯(lián)合體?；蛘哒f是指人工培養(yǎng)，并供進一步繁殖的食用菌的純菌絲體。第一節(jié)食用菌菌中概述

一、菌種的概念二、菌種類型三、制種程序首先是制作菌種，即通過孢子或菇體組織分離出菌絲體，并加以擴大繁殖形成生產(chǎn)菌種；其次是將制好的菌種接于培養(yǎng)基質，生產(chǎn)出食用菌子實體。孢子菇體組織菌絲體菌種培養(yǎng)基質子實體萌發(fā)分離食用菌的栽培一般包含幾個步驟：菌種按生產(chǎn)程序一級種(母種）

二級種（原種）

三級種(栽培種）

菌種分為母鐘、原種和栽培種:①一級種一級種又稱母種、試管種。

將經(jīng)孢子分離法或組織分離法得到的純培養(yǎng)物，移接到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)而得到的純種。

采用分離法獲得的母種數(shù)量有限，一般可將菌絲再次轉接到新的斜面培養(yǎng)基上進行轉管繁殖，能得到更多的母種，稱為再生母種，即可用于生產(chǎn)，也適用于純種的保藏。

一支長滿菌絲體的試管母種可分移成10多支新試管。試管種若不馬上使用，可置于4℃的冰箱中保存。

②二級種

二級種又稱原種，這是由母種轉接到裝有麥粒等固體培養(yǎng)基質的專有菌種瓶中經(jīng)過培養(yǎng)后形成。原種可采用750mL菌種瓶或500mL罐頭瓶作為培養(yǎng)容器。一般一支母種可擴大繁殖6-8瓶原種。

若原種直接用于生產(chǎn)，則成本太高，因此，原種還必須進一步擴大繁殖成三級種，使菌種數(shù)量增多，才能用于栽培。由于原種的培養(yǎng)基質接近栽培所用的基質，因此原種也可用于小規(guī)模的栽培。

③三級種

三級種又稱栽培種，它是由二級種進一步擴大繁殖而得。栽培種的培養(yǎng)基質與二級種相似，更接近于栽培基質。三級種數(shù)量多、成本低。

栽培種一般采用固體培養(yǎng)基，用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶作堵養(yǎng)容器。通常一瓶原種可繁殖30-50袋栽培種。

二、菌種類型使用目的的不同保藏用菌種

實驗用菌種

生產(chǎn)用菌種

物理性狀

固化菌種固體菌種液體菌種

外觀形態(tài)顆粒狀菌種片狀菌種磚狀菌種培養(yǎng)容器袋裝菌種瓶裝菌種培養(yǎng)基的主料糞草菌種谷粒菌種木塊菌種木屑菌種

菌種生產(chǎn)是指通過無菌操作，大量培養(yǎng)繁殖菌種的過程。三、制種程序

食用菌菌種有特定的制作程序，只有掌握了制種技術，才能生產(chǎn)出優(yōu)良菌種，使食用菌栽培獲得成功。1、菌種生產(chǎn)的主要設備（l）配料設備

切片機是將本材切成規(guī)格木片的專用機械，是食用菌培養(yǎng)基質粉碎處理的預前工序設備。

切片機

（l）配料設備

粉碎機是將木片、秸稈等原料粉碎成一定粗細度碎屑的專用機械。

粉碎機攪拌機是將培養(yǎng)料通過攪拌使其分布充分均勻的專業(yè)機械。攪拌機攪拌機自動上料加水原料攪拌機（l）配料設備

裝袋機是將攪拌混合均勻后的培養(yǎng)料裝入塑料薄膜筒內的機械。裝袋機（l）配料設備

將培養(yǎng)料裝入料瓶的機械。生產(chǎn)上采用的均勻螺旋擠入式裝瓶機。裝瓶機（2）滅菌設備

高壓滅菌鍋是密閉耐壓的金屬滅菌容器。其工作原理是在驅盡鍋內空氣的前提下，通過加熱把密閉鍋內的水蒸氣壓力升高，從而使蒸汽溫度相應提高到100℃以上。壓力在98Pa時，蒸汽溫度可達121℃。常見的高壓滅菌鍋有手提式、立式與臥式，也有自制的高壓滅菌鍋。手提式主要用于一級種制作，立式和臥式主要用于二級種、三級種和栽培瓶、袋的制作。

（2）滅菌設備

手提式高壓滅菌鍋的容積小，適用于試管培養(yǎng)基、三角瓶或平皿、無菌水、少量菌種瓶及一些器皿的滅菌。手提式高壓滅菌鍋（2）滅菌設備立式高壓滅菌鍋容量大，可用于菌種瓶、罐頭瓶及塑料袋裝培養(yǎng)基的滅菌。立式高壓滅菌鍋（2）滅菌設備臥式高壓滅菌鍋容量大、盛物多，滅菌徹底，效果好。臥式高壓滅菌鍋（2）滅菌設備

常壓滅菌灶是在自然壓力下產(chǎn)生100℃蒸汽進行滅菌的爐灶，如土蒸鍋。常壓灶制作簡單，造價低，很受菇農(nóng)歡迎。

常壓滅菌灶（3）接種設備

超凈工作臺是一種局部層流(平行流)裝置，它能在局部造成高潔凈度的工作空間；使小房間內的空氣經(jīng)預過濾器和高效過濾器除塵、潔凈后，以垂直或水平層流狀態(tài)通過操作區(qū)，因此，可使操作區(qū)保持既無塵又無菌的環(huán)境。超凈工作臺（3）接種設備

接種箱是用木材與玻璃制成密閉箱。有單人式或雙人對接式。接種箱前后斜面為玻璃窗，便于操作時觀察，可開啟，以便取放物品。玻璃窗下的木板有一對橢圓形開孔，操作孔裝有白布袖套，一端固定在圓孔上，另一端套口用松緊帶箍住操作者的手腕·，以防雜菌進入。箱內可安裝20W日光燈和30W紫外線燈管。

接種箱（3）接種設備A、接種針B、接種鉤C、接種環(huán)D、接種鏟E、接種鋤F、接種耙G、接種刀H、接種勺I、接種鑷接種工具（4）培養(yǎng)設備在制作一級種和少量二級種時，可采用電熱恒溫箱或隔水式電熱恒溫箱，目的是控制溫度，適溫培養(yǎng)

恒溫箱2、制種用品及材料

(1)藥品①基物藥品制作母種時常用的藥品有瓊脂、葡萄糖、蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏和維生素B1等。原種和栽培種常用藥品有石膏粉、碳酸鈣、過磷酸鈣、蔗糖、紅糖、尿素、硫酸銨等。2、制種用品及材料

(1)藥品②消毒及殺菌藥品

5％甲醛5％石碳酸0.l％高錳酸鉀75％酒精2％～5％漂白粉0.1％升汞1％～2％煤酚皂溶液(又稱來蘇爾)0.25％新潔而滅2、制種用品及材料

(2)配料用具

常見的配料用具有

攪拌機天平桿秤水桶鐵鏟、鋁鍋、鐵鍋、搪瓷杯、大燒杯、筐、木箱、塑料箱臉盆(3)分裝及檢測用具

分裝用具有

鐵架臺

漏斗

試管筐

菌種袋(17cmX33cm、14cmX28cm等的聚乙烯或聚丙烯插角、平底袋)

試管(18mmXl80mm、20mmX200mm)

量杯(100、250、500mL)

菌種瓶(750mL、500mL鹽水瓶或罐頭瓶)

培養(yǎng)皿(d＝9cm)

三角瓶250mL

(3)分裝及檢測用具檢測用具有生物顯微鏡溫度計

干濕球溫度計pH試紙

卡尺2、制種用品及材料

(4)分離及其用具常用分離用具鐘罩棉花

紗布記錄本、標簽紙、筆

尖頭鑷子

酒精燈廣口瓶

手術剪95％酒精其他用具及材料有：紗布、工作衣、托鞋、口罩、無菌水、頸圈、繩線、回形針、釘書機等。第二節(jié)菌種培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基(料)的配制原則二、培養(yǎng)基的類型三、菌種培養(yǎng)基的制備四、消毒與滅菌第二節(jié)菌種培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基(料)的配制原則①選擇適宜的營養(yǎng)物質

食用菌所需的營養(yǎng)物質，不外是碳源、氮源和礦質元素等，對每一種營養(yǎng)物質的種類和數(shù)量要求又有所不同。如培養(yǎng)木耳、猴頭等木腐菌原種和栽培時，多采用木屑、棉籽殼等為主要原料的培養(yǎng)基；而培養(yǎng)雙孢蘑菇、草菇等草腐菌的原種和栽培種時，要采用糞草為主要原料的培養(yǎng)基。在整個菌種制備過程中，從母種，原種到栽培種各個階段的目的和要求不同，所選用的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分也應有不同。

母種的初生菌絲比較嫩弱，分解養(yǎng)分能力差，因此要求營養(yǎng)豐富、完全，氮源和維生素的比例要高，需選用容易被菌絲吸收利用的物質，如葡萄糖、蔗糖、馬鈴薯、玉米粉、麥芽汁、酵母膏、蛋白胨、無機鹽類和生長素等為原料。

原種、栽培種所需培養(yǎng)基數(shù)量較多，而且菌絲分解物質能力強，可利用大量農(nóng)作物秸稈、糞草，鋸木屑、棉籽殼、麩皮和米糠等原料作為培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)基(料)的配制原則②注意各種營養(yǎng)成分的比例培養(yǎng)基(料)中各種營養(yǎng)物質的比例是影響菌絲生長的重要因素。營養(yǎng)物質比例適當，菌絲生長發(fā)育就好，否則就差。應根據(jù)不同培養(yǎng)對象的需要，配以適當比例。菌絲生長要求培養(yǎng)基(料)有一定的碳氮比，一般碳氮比(C：N)以20:1為好。如培養(yǎng)基(料)中碳源供應不足時，容易引起菌絲的過早衰老和自溶，如氮源過多或過少時，會引起菌絲的過于旺盛生長或生長緩慢，對菌絲生長造成不良影響。③調節(jié)適宜的酸堿度(pH)培養(yǎng)基(料)需要保持菌絲生長發(fā)育所需要的酸堿度，因此配制培養(yǎng)基(料)時，要用氫氧化鈉、石灰或過磷酸鈣等調節(jié)pH值。各種食用菌所需要的pH值不同，培養(yǎng)基(料)的酸堿度也應不同。如猴頭菌絲喜歡酸性環(huán)境，需調節(jié)pH值為4—5;又如草菇菌絲喜堿性環(huán)境，需將pH值調為7．5～8。一、培養(yǎng)基(料)的配制原則一、培養(yǎng)基(料)的配制原則④選擇經(jīng)濟實用的原料制做培養(yǎng)基(料)的原料，有些價格比較貴、成本高，可用一些價格低廉的代用原料理，可用一些農(nóng)副產(chǎn)品代替化學藥品，常用的有馬鈴薯、麥芽，玉米面、麥麩等。在食用菌制種中，原種和栽培種因原料用量較大，選擇合適的代用原料，其經(jīng)濟意義就更大。過去多用麥粒和玉米，現(xiàn)在可用鋸木屑和棉籽殼等來代替。但是選用代用料時，必須就地取材，來源豐富、價格便宜的原則，而且原料沒有毒性。二、培養(yǎng)基的類型

培養(yǎng)基的類型①營養(yǎng)來源

②物理狀態(tài)

③表面形式④用途天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基平面培養(yǎng)基

高層培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基原種培養(yǎng)基栽培種培養(yǎng)基三、菌種培養(yǎng)基的制備1、母種（一級種）培養(yǎng)基的配制種菇或種木的選擇和處理孢子、組織、種木分離馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖等原料裝入試管的培養(yǎng)基排成斜面的培養(yǎng)基母種接種配制滅菌培養(yǎng)2、母種（一級種）培養(yǎng)基的配制方法工藝流程計算配方各物用量按比例稱量各物質

配制

調pH分裝試管

塞棉塞

滅菌及擺斜面

無菌檢查

2、母種（一級種）培養(yǎng)基的配制方法工藝流程3、二級種、三級種培養(yǎng)基的配制方法工藝流程設計培養(yǎng)基質配方

按比例稱量各物質

天然材料如棉籽殼、木屑等主料的預處理

混合調節(jié)含水量裝瓶裝袋滅菌冷卻使用3、二級種、三級種培養(yǎng)基的配制方法為便于觀察和接種，原種容器一般采用透明的專用菌種瓶；瓶口內徑為32—25MM，瓶徑高度為40MM，容量為750ML。也可采用500ML罐頭瓶；但因其瓶徑大，易造成污染和干燥，且瓶頸過短，棉塞塞不牢固，易脫落。四、消毒與滅菌1、消毒與滅菌的概念物品上存在著的微生物，為培養(yǎng)出食用菌的純菌體，必須對食用菌栽培的各環(huán)節(jié)進行殺菌，這是生產(chǎn)中的一項基本技術。

消毒具有殺死致病微生物的作用或方法，稱為消毒。就食用菌菌種生產(chǎn)而言，消毒是指用物理或化學方法殺滅或消除對食用菌生長發(fā)育有害的微生物，通常只能消滅物體表面或環(huán)境中的一部分微生物，有能達到消滅所有微生物。滅菌指徹底殺菌，用物理或化學等方法，殺死物體上的一切微生物，以及它們的芽孢和孢子，使物體成為無菌狀態(tài)。防腐

指防止或抑制微生物的生長繁殖，是一種抑菌作用，不能殺死微生物群體2、常用消毒和滅菌方法①熱力滅菌

干熱滅菌烘烤滅菌法焚燒滅菌法濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌法常壓蒸汽滅菌法間歇滅菌法煮沸消毒法巴氏消毒法②輻射滅菌

紫外線輻射電離輻射第三節(jié)菌種的分離一、概念二、菌種分離的方法三、菌種的接種培養(yǎng)四、食用菌菌種的質量鑒定五、食用菌菌種的退化、復壯和保藏第三節(jié)菌種的分離一、概念：將子實體的局部組織或孢子移接在斜面試管培養(yǎng)基上，獲得純培養(yǎng)菌絲的操作稱為菌種分離，菌種分離主要指一級種(母種)的分離。有些與高等植物共生的菌根菌，如紅菇、松菇以及有些要在動物（如白蟻）存在下才產(chǎn)生子實體的菌類，因營養(yǎng)條件復雜，在目前實驗條件下，較難在簡單的培養(yǎng)基上獲得純菌種。菌種分離孢子分離法

組織分離法

菇木分離法

孢子彈射分離法整菇插種法鉤懸法貼附法菌褶上涂抹法孢子印分離法單孢子分離法二、菌種分離的方法平板稀釋法連續(xù)稀釋法子實體組織分離法菌核組織分離法