cd4+h1細胞、h17細胞及調節(jié)性細胞平衡失調與強直性脊柱炎患者強直性脊柱炎評分的關系

cd4+h1細胞、h17細胞及調節(jié)性細胞平衡失調與強直性脊柱炎患者強直性脊柱炎評分的關系

免疫調節(jié)的平衡對維持身體的正常生活活動和預防自身免疫性疾病非常重要。調節(jié)性T細胞(regulatoryTcells,Treg)是一類控制體內自身免疫反應性的細胞群,具有減輕機體炎癥損傷,控制免疫應答效應的作用。Th17是近年發(fā)現(xiàn)可分泌白細胞介素(interleukin,IL)17輔助T細胞,而IL-17可誘導機體組織損傷及引發(fā)炎性反應。目前已有發(fā)現(xiàn)多種自身免疫疾病的發(fā)生與Th17細胞調節(jié)失衡有關。Th1輔助細胞具有抵抗機體免疫反應的作用,其主要為IL-12誘導產生。強直性脊柱炎(ankylosingspondylitis,AS)是一種累及脊柱及骶髂關節(jié)的系統(tǒng)性、慢性炎癥疾病。目前不少研究表明免疫細胞調控失衡與AS發(fā)病及病情進展具有密切的關系。本研究將通過測定Th1、Th17、Treg細胞比率及其相關炎癥因子水平,探討AS患者外周血Th1/Th17/Treg細胞失衡情況及其與強直性脊柱炎疾病活動評分(ankylosingspondylitisdiseaseactivityscore,ASDAS)的關系,旨在為AS臨床防治提供指導。1數(shù)據(jù)和方法1.1asdas診斷標準選取2012年1月至2014年1月涉縣中醫(yī)院風濕骨病科收治的60例AS患者(AS組)為研究對象。其中男48例、女12例,年齡18~62(39.0±3.2)歲,病程1~12(4.8±1.2)年。參照國際強直性脊柱炎協(xié)會(ASAS)2009年制訂的ASDAS診斷標準將AS患者分為病情穩(wěn)定(ASDAS<1.3)14例,病情中度活動(1.3≤ASDAS<2.1)28例,重度(ASDAS≥2.1)18例。另選取同期在本院行正常體檢者60例為對照組,男48例、女12例,年齡20~62(39.2±3.1)歲,均不符合AS診斷標準,其余排除標準與AS組相同。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。1.2排除標準標準(1)均符合1984年修訂AS紐約標準;(2)所有受試者均簽署知情同意書。排除標準:(1)肝腎功能不全、血液系統(tǒng)疾病、內分泌疾病、多發(fā)性硬化疾病者;(2)近3個月內應用過激素或免疫抑制劑者;(3)查體時發(fā)現(xiàn)心肺、內分泌系統(tǒng)感染者;(4)活動性肺結核、惡性腫瘤、炎性腸病者。1.3方法1.3.1離心條件及離心穩(wěn)定性AS組與對照組于清晨8:00~9:00點空腹抽取靜脈血5mL,加入肝素鈉抗凝,置于離心機中以離心半徑15cm,3000r/min離心10min后,棄去上清液,并置于-80℃中待測。1.3.2免疫組織化學取上述樣品于常溫下復溫后,加入淋巴細胞分離液(北京寶來生物科技公司),應用密度梯度離心法分離外周血單核細胞,采用RPM1640將細胞濃度調整為2×106mL-1,將細胞接種于6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),收集對數(shù)生長期的細胞于測定管中,分別加入鼠抗人CD8單抗(美國Sigma公司)及鼠抗人CD3單抗(美國Sigma公司),與4℃避光反應20min,采用固定液于室溫下固定15min后離心處理10min棄去上清液,磷酸鹽緩沖液洗滌2次后,分別加入IL-17A-FTTC(澳大利亞eBioscience公司)及IFN-γ-FTTC(澳大利亞eBioscience公司)進行細胞質染色。染色后采用美國貝克曼公司提供的BeckmEpics流式細胞儀測定外周血CD4+Th17、CD4+Th1及CD4+CD+25Treg細胞比率。1.3.3細胞因子檢測采用酶聯(lián)免疫法測定兩組血清IL-6、IL-8、IL-17、IL-23及TNF-α水平,各血清細胞因子試劑盒均由北京中杉金橋生物有限公司提供,操作方法嚴格按照試劑盒說明書進行。1.4統(tǒng)計分析方法應用SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析,計量資料用均數(shù)±標準差(ue0af±s)表示,兩樣本均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗,多均數(shù)的比較采用方差分析,多均數(shù)的兩兩比較采用LSD-t檢驗,相關性分析采用Pearson相關分析法,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1cd4+th1及cd4+cd5/cd4+cd4+cdg細胞水平比較AS組患者CD4+Th17細胞水平高于對照組,而CD4+Th1及CD4+CD+25Treg細胞水平低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表1)。2.2在兩組炎癥因素的水平分析中，as組的il-6、il-17、il-23和tnf蛋白水平顯著高于對照組p-0.05表22.3cd4+th1、cd4+cd5/25teg細胞與病情穩(wěn)定、中度活動患者相比,重度患者CD4+Th17細胞水平顯著升高,而CD4+Th1、CD4+CD+25Treg細胞顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表3)。2.4患者il-6、il-17、il-33及tnf-蛋白水平的比較與病情穩(wěn)定、中度活動的患者相比,重度患者的IL-6、IL-17、IL-23及TNF-α蛋白水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表4)。2.5il-17、tnf-,p,tnf-經Pearson相關分析可知,ASDAS與IL-6(r=0.412,P=0.000)、IL-17(r=0.396,P=0.000)、IL-23(r=0.384,P=0.000)及TNF-α(r=0.318,P=0.004)呈正相關,而與IL-8無相關(r=-0.146,P=0.128)。3th17細胞免疫平衡失調研究表明AS的發(fā)生與T細胞亞群比例失調具有密切的關系,其發(fā)病過程與T細胞亞群功能異常及其下游Th17/IL-23被激活和未折疊的蛋白免疫應答反應增強有關。CD4+T是機體免疫應答反應中的主要部位,根據(jù)CD4+T細胞分化功能性可分為Th1、Th2、Th17、Treg等亞群,在正常情況下這些Th細胞亞群彼此間相互聯(lián)系、相互牽制,處于動態(tài)平衡,但當機體發(fā)生感染、慢性炎癥損傷或遺傳異常時,這些T細胞亞群彼此間的平衡將被打破,從而導致機體免疫調控失衡,引起自身免疫性疾病。Treg是一類控制體內自身免疫反應性的細胞群,其具有抑制T細胞增殖及調節(jié)機體免疫力的作用。Zhao等通過體外動物實驗發(fā)現(xiàn),Treg細胞可通過抑制Th17細胞分化或下調IL-17,IL-23表達來抑制Th17細胞增生。Xueyi等對應用Th17受體拮抗劑治療的小鼠敲除或阻斷Th17受體阻斷后能有效抑制骨關節(jié)炎的發(fā)生,減少骨組織及關節(jié)組織損傷。本研究結果顯示,AS組患者CD4+CD+25Treg細胞水平低于對照組,且隨著ASDAS的增加,其水平顯著下降(P<0.05),而AS組患者CD4+Th17細胞水平顯著高于對照組,且隨著ASDAS的增加,其水平顯著升高。這提示在AS患者中外周血Treg水平受到抑制,而Th17細胞則處于活躍狀態(tài),Treg/Th17免疫格局偏向Th17,從而可以推測AS患者機體內免疫調控機制紊亂與Treg細胞數(shù)量減少導致Treg/Th17免疫格局失衡有關。Th1細胞與Th17細胞均源于CD4+T細胞,初始CD4+T細胞在干擾素γ、IL-2等細胞因子的介導下可分化為Th1細胞,在IL-1、IL-6、轉化生長因子β介導下則可分化為Th17細胞。Chen等研究指出,Th1細胞與Th17細胞可相互拮抗,Th1在特異情況下可轉化為Th17,而Th17在特殊情況下也可轉化為Th1。本研究結果顯示,AS組患者CD4+Th17的比率顯著高于對照組,而CD4+Th1比率低于對照組,且隨著ASDAS的增加,CD4+Th17水平顯著升高,而CD4+Th1水平顯著下降,從而表明AS患者體內存在Th17與Th1相互拮抗的現(xiàn)象,且CD4+Th1水平低下可介導細胞功能低下。IL-6、IL-17、IL-23及TNFα是由Th17分泌的促炎因子,這些炎性因子可激活機體T細胞及其他相關免疫細胞大量生成細胞黏附因子、化學增活素及自由基等,從而進一步加劇機體炎性反應,引起機體炎癥損傷。本研究結果顯示,AS組IL-6、IL-17、IL-23及TNFα蛋白水平顯著高于對照組(P<0.05),且隨著AS