性傳播疾病的實驗室檢測

性傳播疾病的實驗室檢測

南康市疾病預防控制中心2012-08-22一、概述-梅毒病原體（一）、名詞由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病是我國衛(wèi)生部規(guī)定的重點防治性病之一《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見的50種傳染病之一

梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體

(二）、免疫以細胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用當螺旋體從體內清除后可再感染，而且仍可出現一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)的原因可能與體內產生的免疫力有關（三）、抗原1．表面特異性抗原：刺激機體產生特異凝集抗體及密螺旋體制動或溶解抗體，后者加補體可溶解螺旋體2．螺旋體內類屬抗原：可產生補體結合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復合抗原：當螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復合抗原，此種復合抗原可刺激機體產生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動物心肌提取的類脂質抗原起沉淀反應（康氏試驗）或補體結合反應（華氏試驗）二、檢測方法-病原體檢查梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法。診斷一期梅毒、二期梅毒時，可取患者的滲出液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體的特征性形態(tài)和運動方式.病原學檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實驗室必備項目之一。螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色

檢測方法-血清學檢測

根據檢測所用抗原不同，臨床血清試驗分為兩大類：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗2.梅毒螺旋體抗原血清試驗

檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗性病研究實驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應素試驗（USR）血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗所有的非梅毒螺旋體血清試驗的抗原基本成分都一樣,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結合形成復合物凝集成網狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似RPR結果TRUST結果檢測方法非梅毒螺旋體血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現1周-2周后，血清可呈陽性。經治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗特點前帶現象

指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現的弱陽性、不典型或陰性反應的結果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現了陽性的結果，該現象稱為前帶現象。檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗

采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原體反應。梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）、梅毒螺旋體酶聯免疫試驗（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB-Test）梅毒螺旋體血清試驗的臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。梅毒患者經過抗梅治療后，ELSA、TPPA試驗仍可陽性，故TPPA試驗陽性不能作為療效觀察的指標。ELSA、TPPA陽性不能區(qū)分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。梅毒血清假陽性反應技術性假陽性反應：如實驗室操作錯誤，標本溶血等，如重復試驗，無梅毒患者血清試驗成為陽性。生物學假陽性反應：因非螺旋體抗原血清試驗是非特異性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病，也可釋放心擬脂至血液中，產生反應素，如麻風、麻疹、瘧疾、傳染性肝炎、病毒性肺炎、傳染性單核細胞增多癥，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出現陽性，但這類患者血清反應滴度低，很少超過1：8。而且半年內漸轉成陰性。另外可用特異性的梅毒血清反應證實。如用FTA－ABS試驗假陰性反應在梅毒螺旋體感染后1～2周內可呈陰性反應梅毒螺旋體感染不久即開始治療晚期梅毒患者的血清中反應素含量低，敏感性低的梅毒血清試驗易出現陰性反應在二期梅毒時RPR試驗也可出現陰性反應，前帶現象(prozonephenomenon)血清學檢測的幾個特點在最初的兩周可能是陰性結果FTA、TPPA和ELISA在所有階段都最敏感VDRL和RPR在三期梅毒期可能為陰性VDRL-CSF僅用于診斷神經性梅毒淋球菌實驗室診斷技術概況-病原學淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,簡稱淋球菌)引起的各種化膿性感染，是一種經典的常見的性傳播疾病.淋球菌為革蘭陰性雙球菌，大小約0.6~0.8μm。通常成對生長，兩菌接觸面平坦。淋球菌與奈瑟屬的另一種致病菌腦膜炎球菌及其他共棲奈瑟菌在生物學上有許多相似性，可通過生化特性加以鑒別。淋球菌原發(fā)性感染部位主要為男性尿道或女性宮頸管內膜概況-流行病學淋病的傳播途徑有以下二種：

1)直接性接觸感染：成人淋病幾乎全部通過性接觸感染。

2)間接接觸感染：兒童可通過污染了淋球菌的物品間接感染。新生兒可通過母親產道分泌物間接感染。淋病的實驗室診斷方法直接顯微鏡檢查，觀察淋球菌細胞；分離培養(yǎng)淋球菌；非培養(yǎng)技術檢測淋球菌細胞成份如抗原或DNA（EIA,PCR/LCR）

標本的采集和運送

取材的部位

年齡性別性接觸方式臨床表現取材拭子

藻酸鈣拭子普通棉拭子滌綸拭子標本的采集和運送-取材部位男性異性戀者:采集尿道標本，有口淫史者加取咽部標本；同性戀者:采集尿道、直腸及咽部標本.女性采集宮頸標本，必要時從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材；幼女采集陰道分泌物；新生兒眼炎患者采集眼結膜分泌物，對其母親采集宮頸、尿道及直腸標本。標本的采集和運送-取材方法尿道男性患者用手指從陰莖根部向尿道口方向擠壓，有癥狀患者可擠出膿液，用取樣拭子蘸取膿液作涂片或培養(yǎng)。對擠壓后無明顯分泌物時，采用男用取材拭子插入尿道2～3cm，稍用力轉動，保留數秒鐘再取出，以采集到粘膜上皮細胞。女性患者可抵著恥骨聯合輕輕按摩尿道口，擠壓出分泌物。如果無明顯分泌物，可用同男性相似的上述方法取材。標本的采集和運送-取材方法宮頸取材前用溫水或生理鹽水濕潤擴陰器。應避免使用防腐劑和潤滑劑，因為這些物質對淋球菌有抑制作用。仔細檢查陰道壁和宮頸，如果宮頸口外面的分泌物較多，先用無菌棉拭清除過多的宮頸粘液。將一取樣拭子插入宮頸管內1～2cm，稍用力轉動，保留10～30秒后取出。標本的采集和運送-取材直腸將取樣拭子插入肛門2～3cm，從緊靠肛環(huán)邊的隱窩中取材。避免接觸糞便。陰道青春期前女孩可采集陰道標本。將取樣拭子置于陰道后穹窿10～15秒，采集陰道分泌物。咽部從咽后壁或扁桃體隱窩取材

標本的采集和運送-運送淋球菌的抵抗力弱，對熱敏感，不耐干燥。取材后標本若不能立即接種于選擇性培養(yǎng)基上時，需采用運送系統(tǒng)。置于非營養(yǎng)型運送培養(yǎng)基中的標本應在12小時內送到實驗室，接種于選擇性培養(yǎng)基，分離陽性率可達90%以上。超過24小時則分離陽性率下降。直接顯微鏡檢查染色方法:

革蘭染液美蘭染液姬姆薩染液熒光抗體

革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，因簡便、快捷及價廉、仍然為最廣泛采用的方法。革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標本敏感性及特異性可高達95%～99%，具診斷價值。宮頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅40～70%。

不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)法為診斷淋病的金標準.對女性淋病的確診應做淋球菌培養(yǎng)從選擇性培養(yǎng)基上分離出淋球菌即可診斷淋病。培養(yǎng)的敏感性81~100%。培養(yǎng)的優(yōu)點有：

—特異性極高（100%）；

—可發(fā)現無癥狀淋球菌感染患者；

—可確診兒童性虐待；

—可用于進一步作藥敏試驗；

—可用于治療后的判愈試驗。淋球菌培養(yǎng)-培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件：35℃～36℃，含5%～10%CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。

CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時間：24~48小時淋球菌培養(yǎng)-培養(yǎng)條件淋球菌培養(yǎng)-觀察結果培養(yǎng)24小時后檢查平皿，此時沒有菌生長的平皿應繼續(xù)培養(yǎng)至48小時，仍無菌生長才可丟棄，作出淋球菌培養(yǎng)陰性的報告。對選擇性培養(yǎng)基上分離的直徑在0.5～1mm，無色、灰白色的半透明菌落應作進一步鑒定。淋球菌培養(yǎng)-觀察結果淋球菌培養(yǎng)-淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的主要依據

菌落特征 氧化酶試驗革蘭染色淋球菌氧化酶陽性淋球菌培養(yǎng)-淋球菌的確證試驗糖發(fā)酵試驗免疫學試驗

-熒光抗體染色

-協(xié)同凝集試驗酶底物試驗DNA探針試驗

淋球菌的鑒定特征菌落形態(tài)淋球菌樣革蘭染色革蘭陰性雙球菌氧化酶試驗陽性過氧化物酶試驗陽性快速糖發(fā)酵試驗G+L-M-S-β-內酰胺酶陽性﹙PPNG﹚或陰性非培養(yǎng)診斷技術

非培養(yǎng)技術的特點不依賴于活的病原體的存在，無需特殊運送條件；僅適合尿道或宮頸標本，以及尿液（PCR/LCR）；不能進行抗生素敏感性試驗用于判愈試驗需在治療后至少3周以上進行.

生殖道沙眼衣原體感染生殖道沙眼衣原體感染-病原體沙眼衣原體有15個血清型，A,B,Ba,C,D-K,LI,L2,L3-A,B,Ba和C型最常引起沙眼－D-K型主要感染泌尿生殖道－LI,L2,L3型引起性病性淋巴肉芽腫生殖道沙眼衣原體感染-病原體非淋菌性尿道炎（NGU)是指由性接觸傳染的一種尿道炎，它在臨床上有尿道炎的表現，但在尿道分泌物中查不到淋球菌。40-50%由沙眼衣原體引起，20-30%由支原體引起，尚有10-20%由陰道毛滴蟲、白色念珠菌和單純皰疹病毒等引起。病原學革蘭陰性、專性細胞內寄生的微生物衣原體有特殊的發(fā)育周期,可見2種不同的結構

－原體：感染型，較小，呈球形

－始體：增殖型，大，呈圓形或卵圓形沙眼衣原體感染的并發(fā)癥附睪炎前列腺炎Reiter病直腸炎多發(fā)于男性同性戀者，由LGU株引起在男性同性戀者中，直腸沙眼衣原體的分離率為4％－8％；而在男性直腸炎患者中，分離率為12％臨床表現：輕者無癥狀，重者有直腸疼痛、出血、腹瀉及粘液性分泌物女性感染－宮頸炎約1/3左右的病人無任何臨床癥狀陰道分泌物：稀薄至膿性，正常至增多有氣味宮頸充血，水腫，脆性增加宮頸管口粘液膿性分泌物尿道炎大多數女性尿道沙眼衣原體感染無癥狀急性尿道綜合癥：可與急性細菌性膀胱炎的癥狀相似，如排尿困難、尿頻、尿急60％－80％的尿道感染者同時合并宮頸感染盆腔炎（PID）衣原體宮頸炎20％－40％上生殖道感染10－40％有癥狀PID新生兒感染分娩時傳播沙眼衣原體活動性感染的孕婦，其新生兒的感染率－在任何部位的感染－50％－70％新生兒結膜炎黃0％－50％至少有50％的結膜炎患兒同時有鼻咽感染－30％的鼻咽感染發(fā)展為衣原體肺炎男性感染－非淋菌性尿道炎潛伏期：1－3周癥狀：尿道粘液性或粘液膿性分泌物，并有尿痛、尿道不適等癥狀。沙眼衣原體感染-實驗室檢測細胞培養(yǎng)抗原檢測試驗（酶聯免疫吸附實驗、直接熒光法、快速抗原試驗）直接涂片顯微鏡檢查核酸擴增檢測(NAAT)法抗體檢測衣原體的培養(yǎng)評價敏感性70％～80％特異性100％缺點費時（需3～5天），費力，技術要求高不宜作為臨床常規(guī)檢查不宜用于大規(guī)模的篩查和流行病學調查

抗原檢測評價酶聯免疫吸附試驗敏感性和特異性與直接免疫熒光法相似敏感性：79－97％高特異性:97－99％高試