金標類檢測試劑注冊技術審查指導原則

附件4金標類檢測試劑注冊技術審查指導原則一、 前言本指導原則主要針對金標類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導性技術要求。本指導原則系對金標類檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應的科學依據(jù)。本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術的不斷發(fā)展，其相關內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。二、 適用范圍本指導原則適用于第三類體外診斷試劑中金標類試劑的注冊技術審查，其他類金標試劑可作參考。三、 基本要求（一）基本原則診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應當制定相應的質(zhì)量指標，并應符合有關法規(guī)的要求。診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應具備相應的專業(yè)技術人員、儀器設備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，生產(chǎn)企業(yè)應按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求建立相應的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產(chǎn)企業(yè)還應該通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。診斷試劑的研制應當按照科學、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。（二）原材料質(zhì)量控制主要生物原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。使用前應按照工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標準。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（1） 外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應具備相應外觀標準。（2） 純度和分子量主要經(jīng)SDS電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜29/7的聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5pg;電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質(zhì)量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。（3） 蛋白濃度蛋白濃度可通過Lowry法、280nm光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。（4） 效價效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規(guī)定的要求。（5） 功能性實驗功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關性。用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進行功能性實驗。生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標準應符合《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）》規(guī)定的質(zhì)量標準要求并檢驗合格，達到相應的質(zhì)量標準后方可用于生產(chǎn)。建議對牛血清白蛋白作以下檢驗：夕卜觀：應為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其他雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時間在18?261時應不大于15分鐘，pH值應為6.5?7.1?？偟鞍缀浚河秒p縮脲方法來測定，其標準為大于等于95%?？偟鞍字械呐Ｑ灏椎鞍祝˙SA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為Z95%。BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標準為Z90%。生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商?；瘜W原材料化學原材料的質(zhì)量標準參照《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）》分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：夕卜觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。其他物料硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時，其生產(chǎn)商必須提供該批次材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。（1） 硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜應具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性（切割時膜破損弓I起的廢品率）均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。（2） 玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。（3） 玻璃纖維膜適用于全血檢測的金標試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材/7料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點，應具有厚度、孔徑大小等要求。（4） 塑料襯片塑料襯片應具有厚度、硬度（切割時一次未能整條切下的百分率）尺寸（與標識吻合、粘性（切割時造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。（5） 其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定》建立相應質(zhì)量控制標準。（三）試劑盒的制備本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標記抗原或抗體的制備，膠體金標記的包被，檢測線及質(zhì)控線的制備，膠體金標記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。膠體金標記物的制備采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規(guī)定，膠體金標記物在510?560nm波長處應有最大吸收值，置2?81保存，應在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用合適的方法確定膠體金標記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。檢測線及質(zhì)控線的制備取已確定使用濃度的相關抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應具有間隔距離要求，應對所用的金標用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質(zhì)量檢測，如尺寸、夕卜觀、包裝及吸附性能等，并記/7錄批號、數(shù)目標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。貼膜、切割、裝袋貼膜、切割及裝袋應在具有相應濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。（四）質(zhì)量控制用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標，如具有國家標準品（參考品）的產(chǎn)品應使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化的企業(yè)參考品進行檢驗。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。半成品質(zhì)量控制（1） 半成品抽樣檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標記，待檢。（2） 半成品檢驗對所抽樣的半成品做陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質(zhì)量標準。企業(yè)應該對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究，并制定相應的質(zhì)量標準。穩(wěn)定性試驗可在在特定溫度或特定條件下完成。成品質(zhì)量控制每一批金標類檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。一般使用國家標準品（參考品）對成品進行檢驗，并達到相應質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同/7類產(chǎn)品的質(zhì)量。（1）物理檢查應進行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應符合質(zhì)量標準。（2）性能方面的檢測陰/陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質(zhì)量