松茸多肽對(duì)小鼠耐缺氧和抗疲勞能力的影響

松茸多肽對(duì)小鼠耐缺氧和抗疲勞能力的影響

鹿鹿最初出現(xiàn)在《神農(nóng)本草經(jīng)》中。這是一種傳統(tǒng)的稀有中藥。它來(lái)自動(dòng)物、鹿科動(dòng)物、梅花或鹿科動(dòng)物的幼角，沒(méi)有骨頭，所以它有一個(gè)微妙的角度來(lái)產(chǎn)生毛發(fā)。具有生精補(bǔ)髓、養(yǎng)血益腎、強(qiáng)筋健骨的功效。鹿茸多肽(PAP)是從梅花鹿茸中提取的一種多肽類生物活性因子,是鹿茸的主要活性成分。前期研究發(fā)現(xiàn)鹿茸多肽能夠提高機(jī)體免疫力,為了更好地推廣鹿茸的應(yīng)用范圍,本實(shí)驗(yàn)將對(duì)鹿茸多肽進(jìn)行耐缺氧和抗疲勞實(shí)驗(yàn)研究。1材料和方法1.1分組、給藥及灌胃雄性昆明種小鼠200只,體重20~22g。由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。于實(shí)驗(yàn)室條件適應(yīng)一周后稱重,并對(duì)相關(guān)的行為學(xué)指標(biāo)進(jìn)行訓(xùn)練,淘汰體重及運(yùn)動(dòng)能力與平均水平有明顯差異者,隨機(jī)分為4組,每組50只,分別為對(duì)照組、PAP低劑量組、PAP中劑量組和PAP高劑量組,各組灌胃PAP劑量分別對(duì)應(yīng)為:0、10、20和30mg/kg·d,對(duì)照組給同PAP低劑量組體積的生理鹽水,各組連續(xù)灌胃30d。1.2鈉石灰arPAP的提取分離由本室完成;全血乳酸測(cè)定試劑盒南京建成生物工程研究所;鈉石灰(AR)上?；瘜W(xué)試劑公司;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。玻璃游泳缸(80cm×80cm×70cm)、玻璃桿(φ25cm×0.8cm)、鉛絲、722型分光光度計(jì)、水浴鍋、溫度計(jì)、秒表及電子稱。1.3抗缺氧試驗(yàn)1.3.1u3000小鼠的存活率測(cè)定每組取10只小鼠,在末次給予受試物60min后,將小鼠放入盛有5g鈉石灰的250ml的磨口瓶?jī)?nèi),瓶口用凡士林密封蓋嚴(yán),記錄小鼠存活時(shí)間。1.3.2斷頭缺氧實(shí)驗(yàn)每組取10只小鼠,末次給予受試物60min后,用大剪刀在小鼠雙耳連線處快速斷頭,記錄小鼠斷頭后至張后喘氣停止時(shí)間。1.4抗疲勞試驗(yàn)1.4.1玻璃桿上檢查每組取10只小鼠,于末次給予受試物30min后,將小鼠放在垂直懸掛的玻璃桿上,使其肌肉處于緊張狀態(tài),記錄小鼠由于肌肉疲勞從玻璃桿上跌落下來(lái)的時(shí)間。第3次跌落時(shí)終止實(shí)驗(yàn),累計(jì)3次的時(shí)間作為爬桿時(shí)間。1.4.2u3000小鼠的游泳每組取10只小鼠,末次給予受試物30min后,每組小鼠按其體重的5%在其尾根部以鉛絲負(fù)重(用醫(yī)用膠布纏繞于小鼠尾根部),將小鼠置于玻璃游泳缸中游泳,水溫25℃,水深30cm。記錄小鼠從游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間。1.4.3游泳lmin法每組取10只小鼠,在末次灌喂結(jié)束30min后,剪尾進(jìn)行第一次取血,處理好傷口后每只小鼠不負(fù)重,放入游泳缸中游泳l0min后取出,剪尾進(jìn)行第二次取血,安靜20min后剪尾進(jìn)行第三次取血。每次取血0.1ml,分別測(cè)定血清乳酸含量。1.5統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS8.0軟件作t檢驗(yàn),結(jié)果以表示。2結(jié)果與分析2.1對(duì)小鼠10d不同劑量10的影響結(jié)果如表1所示,實(shí)驗(yàn)組小鼠在常壓缺氧環(huán)境中存活時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組小鼠,并且高劑量組小鼠存活時(shí)間長(zhǎng)于低劑量和中劑量組小鼠;斷頭缺氧模型中,高劑量組小鼠喘氣時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組小鼠。2.2兩組患者不同時(shí)點(diǎn)樣的比較見(jiàn)表1如表2所示,中劑量組和高劑量組小鼠爬桿時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組(p<0.05);負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組小鼠游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組,且高劑量組小鼠游泳時(shí)間長(zhǎng)于低劑量和中劑量組。2.3小鼠血清乳酸測(cè)定結(jié)果如表3所示,游泳實(shí)驗(yàn)前各組小鼠的血清乳酸量無(wú)明顯差異,即基礎(chǔ)狀態(tài)相同。游泳10分后立即采血測(cè)定的血清乳酸量顯示,低劑量和中劑量組小鼠血清乳酸低于對(duì)照組(p<0.05),高劑量組顯著低于對(duì)照組(p<0.01),給藥組之間無(wú)明顯差異。休息20min后再次測(cè)定血清乳酸值,低劑量組低于對(duì)照組(p<0.05),中劑量和高劑量組顯著低于對(duì)照組(p<0.01),血清乳酸值的下降呈現(xiàn)明顯的給藥劑量依賴性。3對(duì)小鼠一般情況的影響缺氧影響機(jī)體各種代謝,特別是機(jī)體的氧化功能,最終導(dǎo)致心、腦等重要器官供氧供能不足而死亡,小鼠在缺氧環(huán)境中存活時(shí)間越長(zhǎng)表示對(duì)缺氧的耐受力越強(qiáng),本實(shí)驗(yàn)中給予PAP的小鼠在缺氧環(huán)境中存活時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組,說(shuō)明PAP可以提高小鼠的耐缺氧能力。動(dòng)物斷頭后,由于腦供血終止,在短時(shí)間內(nèi)腦中原有的血液和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持短暫時(shí)間,顯示出有規(guī)律地張口喘氣,喘氣時(shí)間越長(zhǎng)表示抗缺氧能力越強(qiáng),在斷頭缺氧模型中,PAP高劑量組小鼠喘氣時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組小鼠,進(jìn)一步說(shuō)明PAP能夠提高小鼠的耐缺氧能力。爬桿實(shí)驗(yàn)和游泳實(shí)驗(yàn)是觀察動(dòng)物抗疲勞能力的公認(rèn)觀察指標(biāo),本實(shí)驗(yàn)通過(guò)這兩個(gè)實(shí)驗(yàn),客觀地反應(yīng)了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力。實(shí)驗(yàn)組小鼠的爬桿時(shí)間和負(fù)重游泳時(shí)間均長(zhǎng)于對(duì)照組,直觀反映了PAP可以延長(zhǎng)小鼠的運(yùn)動(dòng)時(shí)間。糖酵解是生物體內(nèi)普遍存在的一種代謝方式。在肌肉劇烈收縮時(shí),因供氧不足而啟動(dòng)無(wú)氧糖酵解,產(chǎn)生大量乳酸。乳酸解離生成的氫離子占肌肉中酸性物質(zhì)解離的85%以上。乳酸的增加使肌肉中H+濃度上升,pH下降,進(jìn)而引起一系列生化變化,導(dǎo)致疲勞的發(fā)生。乳酸在肌肉中堆積越多,疲勞程度就越嚴(yán)重,所以能夠降低血乳酸含量的物質(zhì)。能起到減輕疲勞的作用。游泳實(shí)驗(yàn)后當(dāng)時(shí),給予PAP的小鼠血清乳酸值明顯小于對(duì)照組,休息20min后,PAP組小鼠血清乳酸含量進(jìn)一步降低,高劑量給藥組小鼠乳酸降低的幅度更為明顯,提示PAP能夠降低疲