微生物的實驗室培養(yǎng)2

是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。一、微生物微生物病毒細菌放線菌真菌原生生物原核生物是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。一、微生物1.分類真核生物不具有細胞結構特點：小簡低

菌落單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。養(yǎng)豬需要準備一些什么？養(yǎng)豬場豬飼料仔豬試管培養(yǎng)皿一、培養(yǎng)基

人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。2、營養(yǎng)及功能五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源氮源生長因子水無機鹽不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方標準培養(yǎng)基類型配制特點主要應用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計數(shù)等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運動等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂

增菌、工業(yè)生產(chǎn)化學組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學藥品

鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加(或缺少)某種化學物質(zhì)

培養(yǎng)、分離出特定的微生物固體培養(yǎng)基菌落液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒定大腸桿菌選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)分解尿素細菌選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基防止外來雜菌的入侵獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？二、無菌技術1.無菌技術主要包括哪些方面？2.消毒與滅菌的的區(qū)別？常見的消毒與滅菌的方法有哪些？

二、無菌技術1.無菌技術主要方面：（1）對操作者和操作空間消毒。（2）對工具和培養(yǎng)基滅菌。（3）在酒清燈火焰附近操作。（4）避免已經(jīng)消毒和滅菌的材料用具再污染。（1）消毒：用較溫和的辦法殺死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。2.消毒與滅菌的的區(qū)別（2）滅菌：用強烈的理化因素殺死所有微生物（包括芽孢和孢子）。（1）消毒：煮沸、巴氏消毒、酒精、氯氣、紫外線。3.消毒與滅菌的方法（2）滅菌：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1.器具、培養(yǎng)基的配制和滅菌2.倒平板3.微生物接種4.恒溫箱中培養(yǎng)5.菌種的保存1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容在1000mL碳源、氮源、磷酸鹽和維生素碳源、氮源和維生素無機鹽氫元素、氧元素三、實驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細菌)三、實驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細菌)計算稱量溶化滅菌倒平板倒平板操作倒平板技術1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？關于倒平板操作的問題討論：1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。關于倒平板操作的問題討論：2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物?？偨Y培養(yǎng)基微生物的實驗室培養(yǎng)無菌技術制備培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基提供碳源、氮源、無機鹽、水和生長因子消毒：滅菌：煮沸、巴氏、酒精等灼燒、干熱、高壓蒸汽滅菌等計算稱量溶化滅菌倒平板（二）純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法微生物的接種技術：①平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次劃線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.平板劃線的操作方法取菌種一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。劃線一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。劃線問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：第一步灼燒是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？

答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。（1）接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次（2）劃線首尾不能相接（3）劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)平板劃線法注意事項:稀釋涂布平板法注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰1~2cm處.應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)菌種的保存1.臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。2.長期保存：甘油冷凍管藏法四、實驗操作成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。

（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接