APE1、VEGF在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

優(yōu)秀畢業(yè)論文天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文APE1、VEGF在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系姓名：沈春燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)；腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：佟仲生I方法：結(jié)果：APE1主要在肺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，78例非小細(xì)胞肺癌組織中61例(78.2%)呈高表達(dá)，17例(21.8%)呈低表達(dá)。而APE1在30例正常肺組織中表達(dá)較弱，表達(dá)率較低6.7%(2/30)。Ⅱ50例(64.1%)呈高表達(dá)，17例(35.9%)呈低表達(dá)。而在30例正常肺組織中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和APE1表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌患者生存率的獨立危險因素。APE1對判斷NSCLC的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有一定幫性發(fā)展有密切關(guān)系。關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌人類脫嘌呤核酸內(nèi)切酶1血管內(nèi)皮生長因子免疫組化ⅢNSCLCRecentlyWiththedevelexcisionrepairredoxdependeenttumorsproliferationinvasionandexpressionofAPElandVEGFinNSCLCandtcasesofnormallungtissueExpressionofAPEVEGFandMstudiedbyinununohistexpressionrateofAPE1was78.2%(61/78)inNSCLC.matastasisthePositiveexpressionartesorelatedtotumersizelymphnodematastasisexprmetastasisandAPEexpressionmaybThereweresignificantcorrelationswcarainomaTheexpressionofAPEcloselexpressionmaybetheindepenprognosisevaluation.nodematastasisitcanevaimportantrolesinthecareinogene matrixmetalloproteinase中文全稱1 研究現(xiàn)狀、成果肺癌是當(dāng)前世界各國最常見的惡性腫瘤之一，也是對人類健康與生命危害最大的惡性腫瘤疾病。近半個多世紀(jì)以來，肺癌的發(fā)病率和死亡率呈明顯上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計，肺癌的總發(fā)病數(shù)占全部惡性腫瘤的20%,死亡率則是全部惡性腫瘤的23.8%,居首位。隨著我國工業(yè)化發(fā)展，人口持續(xù)增長，老齡化加劇以及肺癌危險因素的變化，肺癌已成為中國近年來發(fā)病死亡最常見、增長幅度最大的惡性腫瘤之一。我國肺癌的死亡率70年代為7.17/10萬，90年代陡增至數(shù)將超過100萬，患病人數(shù)將居世界之首。肺癌是預(yù)后較差的幾種惡性腫瘤之肺癌患者總的5年生存率仍然不到15%。轉(zhuǎn)錄及復(fù)制，從而發(fā)揮抗腫瘤作用3。生物體包括腫瘤細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)修復(fù)過程需要AP內(nèi)切酶修復(fù)系統(tǒng)，屬于無誤差的修復(fù)4。這種修復(fù)過程中最重要的修復(fù)因子。當(dāng)DNA堿基受到損傷時，首先是特異的糖基化酶切除被修飾的APE1又稱氧化還原因子-1,是人體內(nèi)一種重要的多功能蛋白，它既是細(xì)胞約37KD,含有318個氨基酸殘基，完整的轉(zhuǎn)錄區(qū)全長約2.6kb,包括4個內(nèi)含子和5個外顯子，分界處符合GT/AG規(guī)律f。APE1蛋白包含2個不同的功能域，2基因轉(zhuǎn)錄后外顯子經(jīng)選擇性剪接可產(chǎn)生共9種不同的蛋白亞型5。大部分能產(chǎn)3本研究采用免疫組化的方法，檢測術(shù)后非小細(xì)胞肺癌組織中的APE1及341.材料與方法1.1臨床資料自2004年1月至2005年1月在天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院和武警醫(yī)學(xué)院1.2主要試劑和主要儀器1.3實驗準(zhǔn)備水沖洗20～30遍，置于鹽酸酒精中浸泡24小時，再用蒸餾水沖洗，51.4免疫組化實驗PBS洗3次，每次2分鐘，加育15分鐘。6觀察計數(shù)1000個細(xì)胞。陽性細(xì)胞數(shù)記分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%~50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；染色強(qiáng)度記分：淡黃色為1分，4~5分為(++),6～7分為(+++),其中-和+記為低表達(dá)，而+和+++記為高表達(dá)。細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞數(shù)的10%以下；陽性(++):陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞數(shù)的10%~50%;強(qiáng)陽性(+++):陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞數(shù)的50%以上。為了便于統(tǒng)計分析，71APE1在NSCLC與正常肺組織中的表達(dá)特點APE1陽性產(chǎn)物呈棕黃色細(xì)顆粒狀，有3種細(xì)胞內(nèi)表達(dá)模式，分別為：細(xì)胞主要在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)(見圖1～2);其中61例(78.2%)呈高表達(dá)，17例(21.8%)呈低表達(dá)。正常肺組織中APE1表達(dá)以陰性為主，部分細(xì)胞核著色 (見圖3),高表達(dá)率僅6.7%(2/30)。正常肺組織與NSCLC組織APE1表達(dá)比較，見表1。表1NSCLC組織與正常肺組織中APE1表達(dá)情況比較高表達(dá)低表達(dá)NSCLC組織正常肺組織28優(yōu)秀畢業(yè)論文天津醫(yī)科大學(xué)碩上學(xué)位論文圖2非小細(xì)胞肺癌組織中APE1移位于細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)SP×400圖3正常肺組織中APE1蛋白在細(xì)胞核的表達(dá)SP×2009間質(zhì)細(xì)胞可見陽性染色，強(qiáng)陽性染色的細(xì)胞大多位于腫瘤浸潤的邊緣部位。78例非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF高表達(dá)率為64.1%(50/78),見圖4～5;而在30例正常肺組織中未見表達(dá)。圖5非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF蛋白的表達(dá)SP×400CD34陽性產(chǎn)物定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞漿，為淺棕至深棕色顆粒，主要標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞。78例非小細(xì)胞肺癌微血管計數(shù)范圍為7.34～44.54,中位數(shù)為26.94,平均值為26.39。見圖6～7;圖6非小細(xì)胞肺癌組織中CD34免疫組化染色示腫瘤內(nèi)MVDSP×100圖7非小細(xì)胞肺癌組織中CD34免疫組化染色示腫瘤內(nèi)MVDSP×200天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文與性別、年齡、吸煙、病理類型及分化程度無關(guān)。見表2:表2APE1、VEGF表達(dá)及MVD計數(shù)與NSCLC臨床病理因素的關(guān)系nAPE1 Pp計數(shù)p性別男女6年齡<65歲9≥65歲8吸煙是6否腫瘤大小89病理類型鱗癌腺癌79分化程度高分化中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7無5有對臨床、病理各因素以及APE1、VEGF蛋白表達(dá)情況與NSCLC患者的預(yù)后進(jìn)行單因素Kaplan-Meier法生存分析，log-rank檢驗結(jié)果顯示：腫瘤cm≥5cm組之間生存曲線存在顯著差異(P=0.000),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間生存曲線存在顯著差異(P=0.000),APE1高、低表達(dá)組之間生存曲線存在顯著差異(P=0.003),VEGF高、低表達(dá)組之間生存曲線存在顯著差異(P=0.009)。而性別、年齡、吸煙、病理類型、分化程度與預(yù)后無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3、圖8～11:天津醫(yī)科大學(xué)碩七學(xué)位論文結(jié)果表378例NSCLC預(yù)后因素的單因素分析結(jié)果例數(shù)生存期(月)P均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差性別男女年齡<65歲≥65歲吸煙是否腫瘤大小病理類型鱗癌腺癌分化程度高分化中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無有高表達(dá)低表達(dá)高表達(dá)低表達(dá)生集生集生存時間(月)圖878例NSCLC患者腫瘤小于5cm和大于等于5cm組生存曲線生存時間(月)天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文生集生存時間(月)圖1078例NSCLC患者APE1高表達(dá)和低表達(dá)組生存曲線生集生存時間(月)圖1178例NSCLC患者VEGF高表達(dá)和低表達(dá)組生存曲線進(jìn)一步以COX回歸模型，行多因素分析：進(jìn)入多因素分析的變量為本研大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和APE1表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌患者生存率的獨立危險因素；回歸系數(shù)為正值，表示隨因素程度的增加，患者的死亡危險度(RR)相對增加。見表4:表478例NSCLC預(yù)后因素的多因素COX回歸分析回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤腫瘤大小淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Spearman直線相關(guān)分APEVEGF高表達(dá)低表達(dá)高表達(dá)低表達(dá)5表678例NSCLC組織中APE1、VEGF表達(dá)與MVD的關(guān)系例數(shù)MVD(社S)高表達(dá)低表達(dá)高表達(dá)低表達(dá)原發(fā)性肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率分別居男性惡性腫瘤的首位和女性惡性腫瘤的第2位，而死亡率在男性和女性惡性腫瘤死因中均為第1位[7。肺癌的發(fā)病率和死亡率在多數(shù)發(fā)達(dá)國家及我國京津滬等城市已躍居常見惡性腫瘤之首，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占80%。因此，很多學(xué)者致力于探討有關(guān)肺癌新基因的治療靶點和通路，嘗試新的研究策略，提高治療效果，轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤局部血管生成的理論以為廣大學(xué)者認(rèn)可。腫瘤血管新生在腫瘤的早期形成、浸潤及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，腫瘤的血管生成是一個有局部微環(huán)境、癌基因與抑癌基因等因素共同參與的復(fù)雜的病理生理過程，受眾多相關(guān)血管生成因子的調(diào)控與影響[18,VEGF是唯一能特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的因子，是最強(qiáng)的可溶性血管形成因子，能選擇性地直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)其分裂、增殖[19];又可通過與其受體kdr、ft-1作用，改變內(nèi)皮細(xì)胞某些基因表等研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清和血漿中的VEGF水平較健康人均有顯著升高，血漿VEGF水平與組織中VEGF水平顯著相關(guān)，且血漿VEGF水平與MVD呈正相關(guān)。VEGF表達(dá)可作為肺癌患者腫瘤血管生成的指標(biāo)；同時，MVD是較為常用的評價相關(guān)基因，在多種惡性腫瘤中呈過度表達(dá)，并且與患者的預(yù)后密切相關(guān)[26],但其機(jī)制尚不明確，可能與增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性和促進(jìn)惡性腫瘤的揭示腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，預(yù)測腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能，有效地判斷預(yù)后和選擇合理的治療方案，延長患者的生存期，提高其生活質(zhì)量，是當(dāng)前腫瘤學(xué)研究的重要課題。人類生存在自然環(huán)境中，不可避免的接觸各種有毒物質(zhì)、藥物及射線等，加上新陳代謝過程中產(chǎn)生的ROS等及自發(fā)形成的DNA損傷。因此，DNA受損和基因突變不可避免，人體內(nèi)DNA修復(fù)系統(tǒng)對維持基因組的穩(wěn)定和防止腫瘤的發(fā)生發(fā)揮著重要作用。DNA損傷修復(fù)過程有許多基因產(chǎn)物的參與。在這些參與DNA修復(fù)的基因發(fā)生突變的同時，細(xì)胞內(nèi)包括腫瘤相關(guān)基因在內(nèi)的各種基因的突變頻率將大幅度地增加，細(xì)胞很容易老化和癌變。目前，對DNA修復(fù)基因的研究已經(jīng)成為腫瘤分子病理學(xué)的研究體長臂上(14q11.2-12),含5個外顯子、4個內(nèi)含子和1個單一的開放閱讀框架。全長2.6Kb,編碼含318個氨基酸的蛋白。APE1含有2個不同的結(jié)構(gòu)域，其C-表達(dá)，其在不同腫瘤細(xì)胞中表達(dá)水平的變化還影響細(xì)來，隨著腫瘤生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的進(jìn)展，發(fā)鍵打開成為兩個巰基鍵，維持轉(zhuǎn)錄因子的激活還原狀態(tài)，從P53蛋白對VEGF存在多種形式的副調(diào)控，可以導(dǎo)致血管生成降低野生型P53蛋白可以誘導(dǎo)MICRO-RNA107產(chǎn)生，從而抑制HIF-1a的表達(dá)，其中HIF-α通過VEGF依賴途徑和VEGF非依賴途徑影響血管生成。依賴途徑主要表現(xiàn)為增強(qiáng)VEGF的轉(zhuǎn)錄活性與增強(qiáng)VEGFmRNA的穩(wěn)定性兩個方面來調(diào)控血管生成VEGF以外的堿性成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子等多種途徑調(diào)節(jié)血管生成。同時，NF-xB、AP-1等轉(zhuǎn)錄因子也可以通過增加、促進(jìn)腫瘤血管生成因子的表達(dá)和降低抑制腫瘤血管生成因子的表達(dá)來調(diào)節(jié)腫瘤血管的生功能保護(hù)低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞對抗血管生成的敏感性。所以APE1表達(dá)增高也可以通過血管生成來保障腫瘤的生長。本組應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測了APE1蛋白在NSCLC及正常肺組織中物呈棕黃色細(xì)顆粒狀，在NSCLC及正常肺組織中的定位差異明顯，正常肺組織以細(xì)胞核表達(dá)為主，而NSCLC組織中以細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為主，這與國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報道一致4344];且研究發(fā)現(xiàn)，APE1表達(dá)定位及表達(dá)強(qiáng)度的型異常的決定性因素45。同時檢測了VEGF蛋白及MVD在NSCLC組織中的表達(dá)NSCLC組織中VEGF高表達(dá)率為64.1%(50/78);NSCLC微血管計數(shù)范圍為7.34~44.54,中位數(shù)為26.94,平均值為26.39。腫瘤微血管的生成，可增加腫瘤血供，為腫瘤提供氧和營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤的生長、發(fā)展；腫瘤微血管多為幼稚新生血管，其結(jié)構(gòu)缺乏完整性，增加癌細(xì)胞進(jìn)入血管的概率，使腫瘤更易于生長和轉(zhuǎn)移。本研究對78例NSCLC的臨床病理特征(性別、年齡、吸煙、腫瘤大小、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞的促進(jìn)分裂原和促運動原，是上調(diào)血管生成的重要因子，可與血管內(nèi)皮細(xì)胞的相因受體結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，還可以促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)滲出，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。本研究11.79月±1.56月，兩者經(jīng)log-rank檢驗差異具有顯著性(P=0.003)。繪制的天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文相關(guān)的260;此外，APE1蛋白可以通過減少和降低DNA損傷，同時發(fā)揮其氧化 增強(qiáng)可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的過程，而通路則有可能是通過直眾所周知，腫瘤的血管生成是腫瘤生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的先決條件，腫瘤的生長是一個有局部微環(huán)境、癌基因與抑癌基因等因素共同參與，最后通過影響酶和氧化還原調(diào)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子雙功能保護(hù)低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，進(jìn)而影響腫生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，胞核表達(dá)與低度血管生成及淋巴結(jié)陰性有關(guān)。在非小了NSCLC的危險性。因此有學(xué)者提出假說認(rèn)為，APE1在細(xì)胞內(nèi)的定位不同與DNA修復(fù)程序相關(guān)的特定功能有關(guān)，表達(dá)定位及表達(dá)強(qiáng)度的變化很可能是細(xì)胞組織中的表達(dá)移位及表達(dá)增強(qiáng)可能與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并可為臨床判斷NSCLC患者預(yù)APEVEGFMVD有助于全面了解腫瘤血管形成的生物學(xué)信息，并為進(jìn)一步研究腫瘤血管形成的性的深入研究，它也有可能成為將來癌癥治療的一個新的切入點[63],也將越來越多地被運用于抗腫瘤的臨床研究16468]。因此，更深入和廣泛地研究APE1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用以及對治療和預(yù)后的影響，對提高腫瘤相關(guān)性疾病的診治水平必有重大意義。誠然，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的、多因素共同參與的過程，我們在今后的研究工作中仍需不斷地探尋。1.APE1蛋白在NSCLC組織表達(dá)增強(qiáng)，明顯高于正常肺組織，表明APE1參與了NSCLC的發(fā)生。APE1表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表明APE1蛋白參與了NSCLC的發(fā)展。APE1蛋白表達(dá)增強(qiáng)和定位的改變在非小細(xì)胞肺癌的生長、浸潤過程中發(fā)揮重要作用。APE1是影響非小細(xì)胞肺癌患者生存率的獨立危險因素，表明APE1對判斷NSCLC的發(fā)展和推測預(yù)后有一定幫助。2.VEGF蛋白在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)增高與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，VEGF蛋白表達(dá)增高與微血管密度增加呈正相關(guān)，提示VEGF的表達(dá)增強(qiáng)與NSCLC的浸潤性發(fā)展有密切關(guān)系。VEGF高表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌患者生存期顯著低于低表達(dá)者。提示VEGF表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌組織生長、分化、轉(zhuǎn)移有關(guān)，并具有推測預(yù)后的意義。3.非小細(xì)胞肺癌組織APE1及VEGF高表達(dá)組MVD值均高于低表達(dá)組，且APE1、VEGF表達(dá)顯著相關(guān)，提示二者直接或間接地參與了腫瘤血管的生成，與肺癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)。4.APE1、VEGF蛋白表達(dá)以及MVD與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。并且，APE1、VEGF蛋白與非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后密切相關(guān)。PrevalenceworldwideVersionIARCCaneerBaseNoLyonIARPress,2004.detectionofChinesemalignanttermmortaltreatmentMiniRevMedCmechanism?[J].CeilCycle,2product[J].JBiolChem,2003,278andriskofnonsmallcelllungcancerCarcinogen[16]岳培彬，楊曉明.細(xì)胞生長因子和人類腫瘤，見詹啟敏主編.分子腫瘤學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.188-22[17]楊玲，李連弟，陳育德，等.中國2000年及2005年惡性腫瘤發(fā)病死亡的估carcinomabalanceofproandanlines[J].Cancer,2005,104Endocrinol,2005,153(5):天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文參考文獻(xiàn)天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文參考文獻(xiàn)inhibition[J]MolCancerTherPnysiol.2009,219(1):2cellssmallmoleculeinhibitionoftheredoxfunctionofApelAntioxidRoftheratpulmonaryart天津醫(yī)科大學(xué)碩十學(xué)位論文術(shù)后治療及預(yù)后關(guān)系的研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2007,36(19):1915-1917.endonucleaseincreaseswithprogressionof[47]朱志華，戎鐵華，曾燦光，等.I~Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF的表達(dá)和微血管密度與預(yù)后的關(guān)系[J].癌癥，2005,24(7):865-869.[50]呂喜英，張秀芹，李青山.P-gp、P53和VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2006,35(1):24-27.smokingAnticancerResJu[53]李宏云，賈寶輝，秦超，等.血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)[J].實用癌癥雜志，2005,20(2);131-134.[54]張云嵩，范士志，王東，等.APE1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)特點及其與預(yù)后的關(guān)系[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2007,29(9):776-778.天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文天天人類脫嘌呤核酸內(nèi)切酶1與惡性腫瘤關(guān)系的相關(guān)研究進(jìn)展紫外線、煙草、不完全確定的飲食因素及環(huán)境毒物所引起，大部分DNA損傷則則是DNA修復(fù)系統(tǒng)中最主要的一種修復(fù)途徑。人類脫嘌呤核酸內(nèi)切酶1參與該修復(fù)，為BER途徑的限速酶。1992年Xanthoudakis等[從Hela細(xì)胞中分離出一種相對分子質(zhì)量為37×103含5個外顯子、4個內(nèi)含子和1個單一的開放閱讀框架。人APEcDNA長1441個核苷酸，包括205個核苷酸的5'不翻譯區(qū)、編碼含31個核苷酸長的編碼區(qū)、216個核苷酸的3'不翻譯區(qū)和1個poly(A)尾。APE的AP核酸內(nèi)切酶和還原啟動活性分別定位于C端157氨基酸殘基和N端127氨基D283相互作用產(chǎn)生水解磷酸二酯鍵所必需的活性親合位點，而D283、D308對化活性分別下降為1/5000和1/25000,表明它們在催化反應(yīng)中具有重要作用，但其其在不同組織、器官中表達(dá)水平不一致，同一組織內(nèi)不同細(xì)胞亞群其表達(dá)模式也和胞核同時表達(dá)4。具體人體組織中的分布見表一。連接DNA堿基和脫氧核糖的N-糖苷鍵水解造成。AP位點可以自發(fā)產(chǎn)生，估計在哺乳動物細(xì)胞基因組中，每天每個細(xì)胞因N-糖苷鍵自發(fā)水解約丟失10000個嘌呤堿基和200個嘧啶堿基。AP位點的另一類來源是ROS等損傷DNA的物質(zhì)攻擊DNA,造成堿基錯配或氧化損傷，這些損傷被細(xì)胞內(nèi)存在的損傷特異性N-糖苷酶(如尿嘧啶糖苷酶、次黃嘌呤糖苷酶、3-甲基腺嘌呤糖苷酶和7-甲基尿嘌呤糖苷即AP位點。已證明AP位點具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性和誘變性。APE1是人類細(xì)胞AP位點可被AP核酸內(nèi)切酶特異性識別，并從損傷部位5'端將DNA單鏈切開一子包括AP-1、NF-kB、CREB、ATF、myb、Pax、HIF-1a、HLF、Egr-1、NF-Y、導(dǎo)致的細(xì)胞損害，抵抗細(xì)胞凋亡。的缺失可降低的活性和增加內(nèi)皮細(xì)胞對凋亡的3)、CBP/p300和APE組成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶(Src)依賴的缺氧刺的缺氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中APE是一個關(guān)鍵的成分[10,復(fù)合物中APE的存在對于HIF-1和其DNA識別序列的高親和力是必需的。APE1的多功能性見圖2。表1APE1在正常人器官組織的分布及亞細(xì)胞定位器官組織細(xì)胞定位表達(dá)腎上腺淺表皮質(zhì)細(xì)胞、髓質(zhì)細(xì)胞其它皮質(zhì)細(xì)胞核胞漿膀胱移行上皮平滑肌細(xì)胞核胞漿骨髓一些前體細(xì)胞、巨噬細(xì)胞胞漿腦神經(jīng)元、顆粒細(xì)胞胞漿胞漿/核乳腺導(dǎo)管和腺泡上皮細(xì)胞核子宮基底細(xì)胞分層的鱗狀上皮腺上皮細(xì)胞核胞漿胞漿/核腎腎小管細(xì)胞胞漿肝肝細(xì)胞、枯否細(xì)胞、膽管上皮胞漿肺肺細(xì)胞肺泡細(xì)胞胞漿/核核淋巴結(jié)生發(fā)中心其它淋巴細(xì)胞胞漿核卵巢表面上皮、基底細(xì)胞核胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞核胸腺上皮細(xì)胞胞漿/核天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PAXp53*$AIFI細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，它不同于細(xì)胞壞死，是機(jī)體維持穩(wěn)態(tài)所進(jìn)行的由基因調(diào)控的主動性細(xì)胞自我消亡過程。它參與細(xì)胞老化、胚胎發(fā)育、腫瘤和艾滋病等重要生理、病理過程，近年來一直是生命科學(xué)領(lǐng)域研究的重點。APE1蛋白與凋亡之間關(guān)系的研究比較廣泛。對小鼠、大鼠、人骨髓淋巴細(xì)胞系HL260、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及小牛肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞、人視網(wǎng)膜細(xì)胞及人腺癌細(xì)胞況下，APE1蛋白的表達(dá)下降均先于凋亡的發(fā)生。(2)在缺血和創(chuàng)傷所致的大小鼠損傷模型中，APE1免疫活性的喪失是在TUNEL(末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的APE1在時間上呈進(jìn)行性下降。APE1免疫活性的下降從損傷中心開始向邊緣下降的同時c2jun表達(dá)上升，再次提示蛋白的下降可能不是非特異性蛋白合成下天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文APE的調(diào)控還包括翻譯后的調(diào)控。APE是絲氨酸/蘇氨酸酪蛋白(casein完全消除了APE的修復(fù)酶活性。APE因子活性本身也對氧化還原作用敏敏感部分參與Fos-Jun復(fù)合物活性的還原。半胱胺能增加鼠十二指腸APE和Trx基切除修復(fù)有差異，在所有研究的組織中APEmRNA、蛋白和5端核酸內(nèi)切酶活性均減少40%~50%,但單功能糖基化酶啟動的BER活性呈組織特異性的改變，如肝臟減少35%,睪丸減少55%,而腦則無明顯差異。這些變化與βDNA聚合酶和位APE1與細(xì)胞內(nèi)另一個氧化還原系統(tǒng)硫氧還蛋/硫氧還蛋白還原酶相互獨立和(或)協(xié)同作用激活多種轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性。硫氧還蛋白是一種多效性的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，在細(xì)胞增殖、凋亡、基因表達(dá)等生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)AP-1不是硫氧還蛋白的直接底物，硫氧還蛋白單獨不能通過還原AP-1DNA結(jié)合域的半胱氨酸殘基來激活A(yù)P-1的DNA結(jié)合活性。日本學(xué)者APE1蛋白的HeLa細(xì)胞核內(nèi)，并與之結(jié)合相互作用。硫氧還蛋白活性中心的兩個半胱氨酸殘基Cys32和Cys35與此結(jié)合作用有關(guān)。APE1氧化還原域的兩個半胱氨酸殘基Cys63和Cys95對氧化還原敏感，是硫氧還蛋白結(jié)合的目標(biāo)。硫氧還蛋白和APE1交換各自氧化還原狀態(tài)，也是AP-1DNA結(jié)合活性增強(qiáng)的必需過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)APE1基因是一種腫瘤相關(guān)基因，在肺癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中APE1表達(dá)增強(qiáng)，并與腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、浸且是不依賴其他主要預(yù)后預(yù)測因子如組織學(xué)分級、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、和腫瘤大小的獨立因素[21。在卵巢癌中APE1胞漿表達(dá)通常是惡性的指征，和預(yù)后不良關(guān)在細(xì)胞內(nèi)的定位不同與DNA修復(fù)程序相關(guān)的特定功能有關(guān)，表達(dá)定位及表達(dá)強(qiáng)度的變化很可能是細(xì)胞表型異常的決定因素12。Kakolyris等(2)還研究了結(jié)腸正檢測其表達(dá)水平可以幫助預(yù)測該腫瘤治療效果或者選擇其他可替代的治療方案觀察細(xì)胞對DNA損傷藥物敏感性的改變以及APE1表達(dá)水平改變對臨床化療療發(fā)現(xiàn)APE1表達(dá)顯著受到抑制。Wang等報道，靶向APE1的小干擾RNA可以增強(qiáng)血管內(nèi)皮抑素對于骨肉瘤細(xì)胞的血管抑制作用，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生的胰腺癌細(xì)胞APE蛋白表達(dá)水平增加2~6倍，用反義封閉APE后減少APE表達(dá)率高(陽性細(xì)胞比率超過平均值11%)的腫瘤分包括p53,HIF-α、NF-kB,Fos/Jun(AP-1)等等414,其中HIF-a通過VEGF依賴途徑和VEGF非依賴途徑影響血管生成。依賴途徑主要表現(xiàn)為增強(qiáng)VEGF的轉(zhuǎn)錄通過誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)，而COX-2及其合成產(chǎn)物通過除VEGF以外的堿性成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子等多種途徑調(diào)節(jié)血管生成。而p53、NF-kB、AP-1也可通過增加促進(jìn)腫瘤血管生成因子的表達(dá)和降低抑制腫修復(fù)酶和氧化還原調(diào)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子雙功能保護(hù)低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，進(jìn)而影人類生存在自然環(huán)境中，不可避免的接觸各種有毒物質(zhì)、藥物及射線等，基因突變不可避免，人體內(nèi)DNA修復(fù)系統(tǒng)對維持基因組的穩(wěn)定和防止腫瘤的發(fā)生發(fā)揮著重要作用。DNA損傷修復(fù)過程有許多基因產(chǎn)物的參與。當(dāng)這些參與DNA修復(fù)的基因發(fā)生突變時，細(xì)胞內(nèi)包括腫瘤相關(guān)基因在內(nèi)的各種基因的突變成為腫瘤分子病理學(xué)的研究熱點，修復(fù)基因與癌基因和抑癌基因一起并列為3大因此，更深入和廣泛研究APE在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用以及對治療和預(yù)綜述參考文獻(xiàn)Res,1991,19(20):5519mechanism?[J].CellCycle,roleinhumandiseaseHistopatholendsjustifythemeans[J].MutatRes,2000,460(3-4):211-2pro-apoptoticfunctionsofp53invivo[J].EMBOJ,1999,18(20ofp53bypromotingp53tetramerization[J].Oncogene,oftheratpulmonaryarteischemiainratsimplicationofthefailureofDNAapoptosis[J].Stroke,199DNAbinding[MolCellBiolpolymerasebetadependentbaseeriskofnon-smallcelllungcancer[J].Carcinogenesis.20