實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR,RT-PCR)的原理及應(yīng)用

2013-11-26實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

的原理及應(yīng)用

（RealTimeQuantitativePCR）Contents一、實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定義二、RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程三、RT-PCR技術(shù)的數(shù)據(jù)分析四、RT-PCR技術(shù)的應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR目錄PCR電泳實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定義

普通PCR在PCR結(jié)束后對(duì)進(jìn)行定量分析終點(diǎn)產(chǎn)物PCR技術(shù)和熒光檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，通過(guò)儀器和相應(yīng)的軟件分析結(jié)果，對(duì)待測(cè)樣品的初始模板進(jìn)行定量或定性分析。

克服了普通PCR：1、終點(diǎn)定量重復(fù)性不好2、EB有毒，熒光太貴等缺點(diǎn)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定義

PCR技術(shù)和熒光檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，通過(guò)儀器和相應(yīng)的軟件分析結(jié)果，對(duì)待測(cè)樣品的初始模板進(jìn)行定量或定性分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定義

？為什么選擇對(duì)初始模板定量而不是終產(chǎn)物定量RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

RT-PCR反應(yīng)體系模板4.5μlTagmixture5.0μlF(F’)0.25μlR(R’)0.25μl熒光染料

SYBRGreenI熒光標(biāo)記的探針TaqMan探針法RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

MonitoringPCRwiththeSYBRGreenIDye（SYBRGreen法）變性退火延伸RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

SYBRGreen法優(yōu)缺點(diǎn)RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

MonitoringPCRwithTaqMan（TaqMan法）RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

TaqMan法

TaqMan探針法優(yōu)缺點(diǎn)

RT-PCR技術(shù)的原理及試驗(yàn)流程

?絕對(duì)定量(AbsoluteQuantification，AQ)

病原體檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)基因表達(dá)研究?相對(duì)定量(RelativeQuantification，RQ)