貴州天麻中天麻素含量的測定

貴州天麻中天麻素含量的測定

1天麻素的應用天麻（英文名稱：gasticelata，拉丁語學名：gastcmlibonabl.）是一種常見的高質量藥物。他用了這個紀念碑。它含有許多化學成分，如胺水（gartic1）、二羥丁基苯基磺酸（gsta）和各種甲基苯基磺酸（琥珀酸）。天麻的主要有效成分是天麻素(C13H18O7),天麻素含量是天麻品質的一個重要指標?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明,天麻素有明顯的抗驚厥,鎮(zhèn)痛作用,主治頭痛、眩暈、失眠、肢體麻木、癲癇抽搐、小兒驚風、高血脂、高血壓等癥。至今已有三千年的臨床史。用以息風止痙,平肝潛陽。天麻主產(chǎn)于貴州、四川、云南、湖北、陜西等地。其中以貴州者為道地藥材,習稱“貴天麻”。目前可用熒光檢查、化學定性、光譜鑒別等理化方法對天麻的真?zhèn)芜M行鑒別。其中熒光檢查是利用天麻的乙醇提取液在紫外燈(365nm)下,顯碧綠色熒光;化學定性是利用天麻乙醇提取液與硝酸鹽作用,加熱,溶液呈玫瑰紅,并發(fā)生黃色沉淀;光譜鑒定根據(jù)天麻與偽品的特征峰位置不同來鑒別天麻的真?zhèn)?。紫外光譜法是光譜鑒別中的一種,有文獻記載用紫外光譜法鑒別天麻的真?zhèn)?以及用高效液相色譜法測定天麻素和紫外光譜法測定多糖來評價天麻的質量,但還未見用此方法測定天麻素來鑒定天麻的優(yōu)劣。本研究采用高效液相色譜法測定貴州天麻中天麻素的百分含量,同時測定樣品的紫外光譜,選擇在天麻素的吸收峰且最大吸收波長223nm處,分析天麻素含量與紫外光譜之間的相關性,采用先聚類后回歸的分析方法,進一步估測天麻中天麻素的含量。為系統(tǒng)評價天麻的品質提供理論依據(jù)和控制技術。2實驗部分2.1實驗材料從貴陽市藥材公司購買4種等級家種貴州天麻樣品和一個野生貴州天麻樣品,分別記為T1,T2,T3,T4,T5。分析溶劑為乙醇。2.2測量量法2.2.1測量儀器UV-VisAgilent8453型紫外分光光度計(美國安捷倫公司)。2.2.2%乙醇浸診斷法用精確度為萬分之一的電子天平稱取通過60目粉碎機粉碎的天麻試樣T160mg、T290.4mg、T362.6mg,T4180mg,T548mg,分別加入80%乙醇,浸一夜。過濾,濾液分別置于100mL容量瓶中,加80%乙醇至刻度。精密量取濾液25、20、16、12、8、5mL分別置于25mL容量瓶中,用80%乙醇稀釋至刻度,搖勻,備用。2.2.3乙醇的最大吸收波長用1cm吸收池,以80%乙醇作空白。由于溶劑本身在紫外光區(qū)有吸收峰,選擇溶劑時,組分的測定波長必須大于溶劑的極限波長。有文獻記載乙醇的極限波長為204nm、210nm、215nm、220nm,以及天麻素在紫外可見光區(qū)的吸收峰為221nm和268nm(也有270nm)、224nm和272nm。對樣品在220—400nm范圍內掃描,在紫外光區(qū)有兩個吸收峰,分別為223nm和270nm,且223nm處的吸光度明顯強于270nm處,見圖1。于223nm左右波長處分別測定上述制備好的30個樣本溶液的吸光度。2.2.4天麻素百分含量用高效液相色譜法測定5種天麻樣品T1、T2、T3、T4、T5的天麻素百分含量分別為0.60%、0.695%、0.52%、0.35%、1.085%。根據(jù)天麻素的含量高低,野生天麻T5的品質最好,其次是家種天麻T1、T2、T3,最次的是家種天麻T4。3結果與討論3.1數(shù)據(jù)處理和分析利用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)DPS(v8.01版)對上述實驗所采集到的紫外光譜吸光度數(shù)值進行數(shù)據(jù)處理。3.1.1天麻素的光譜從圖2中可知,天麻素吸收光譜的特征值基本相同,都在223nm左右處有最大吸收波長,且吸光度隨著天麻素的濃度升高而增大。當發(fā)生電子能級之間的躍遷時,不可避免地要發(fā)生振動和轉動能級之間的躍遷,因此紫外可見光譜不只是一條譜線,而是一系列的譜線。天麻的最大吸收波長也就出現(xiàn)在222nm,223nm,224nm處,即紫外光譜是寬帶吸收光譜。根據(jù)紫外光譜測得的吸光度數(shù)值來估測天麻素的含量。3.1.2天麻素含量與聚類分析在建立模型之前,先對數(shù)據(jù)進行預處理。第一,將配制的溶液濃度除以吸光度所得數(shù)值作為系統(tǒng)聚類分析數(shù)據(jù)。第二,根據(jù)高效液相色譜方法測定的天麻素百分含量,將天麻的濃度換算成天麻素的含量C(μg/mL)。天麻素的含量C和紫外光譜的吸光度作為建立回歸模型的依據(jù)。第三,在223nm左右處對天麻T1、T2、T3、T4、T5的系列濃度進行測定,共采集樣本30個。因樣本服從正態(tài)分布,故用DPS系統(tǒng)中的3S法檢測,顯著水平P值取0.01,無異常值。隨機挑選出具有代表性的22個樣本(分別標記為1—22)作為校正集,其余8個樣本(分別標記為23—30)作為檢驗集。系統(tǒng)聚類分析采用歐氏距離作為距離系數(shù)計算方法,比較離差平方和法、類平均法、重心法和最短距離法,從聚類分析的結果來看,離差平方和的聚類分析效果最好。它把校正集中的22個樣本分成4類:第一類包含8個樣本(1、2、3、4、9、10、11、12、13),第二類包含4個樣本(5、6、7、8),第三類包含5個樣本(13、14、15、16、17),第四類包含5個樣本(18、19、20、21、22)。由天麻素的含量及其對應的吸光度分別對四類樣本建立回歸模型,見表1。其中C表示天麻素的濃度(μg/mL),A是紫外光譜吸光度。3.2天麻素濃度的聚類分析依然采用歐氏距離作為距離系數(shù)計算方法,離差平方和的聚類分析法。把檢驗集(8個樣本)和22個校正集一起作聚類分析。分析結果表明,檢驗集中的4個樣本屬于第一類,3個樣本屬于第二類,1個樣本屬于第四類。將8個檢測樣本分別代入各自對應的回歸模型,得檢驗集的8個樣本的天麻素濃度(μg/mL)的預測值。8個樣本天麻素濃度的實測值(μg/mL)和預測值(μg/mL)見表2。4天麻素含量的測定方法應建立在先聚類后回歸的聚類分析的基礎上,對于有機溶劑的天麻從以上分析可知,樣品的天麻素含量與其最大吸收峰處吸光度具有顯著相關,紫外吸光度數(shù)值隨著天麻素濃度的增加而增大。理論上可以通過紫外光譜的特征值來估測天麻中天麻素的含量,但當樣品濃度過大時(有文獻記載濃度>0.01mol/L),或濃度偏小時(如檢驗集中的第29號樣本),線型關系將發(fā)生偏離。理論上物質濃度與吸光度數(shù)值成正比,這是將配制的溶液濃度除以吸光度所得數(shù)值作為聚類分析數(shù)據(jù)的依據(jù)。之所以建立多個回歸方程,是因為不同品種的天麻所含成分略有不同和成分含量的高低的差異,這將影響天麻素的紫外光譜吸光度數(shù)值,即不同種天麻的回歸方程會略有不同,故采用先聚類后回歸的方法是合理的。對于多種成分,即多變量的情況,如何處理原始數(shù)據(jù)得到合理的聚