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血涂片制備和染色【目的】掌握血涂片的制備和染色?!驹怼堪蜒褐瞥杉毎植季鶆虻谋∧ね科萌鹗先疽喝旧?。不同的細胞種類及細胞的不同成分,對酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同,而使各種細胞呈現(xiàn)出各自的染色特點?!酒鞑摹枯d玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液?!緲吮尽縀DTA,靜脈血。瑞氏染色法【試劑】1.瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、純甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8),含磷酸二氫鉀0.3g、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。【操作】(1)采血(2)推片,推片與載片夾角30~45°平穩(wěn)地向前移動,血膜應呈舌狀,頭、體、尾三部分,且清晰可見。(3)干燥:晃動。37℃溫箱中促干。(4)染色:將玻片平置于染色架上,滴加(Ⅰ液)3~5滴,約0.5~lmin后,滴加等量緩沖液(Ⅱ液),搖動玻片混勻。(5)沖洗:5-10min后用流水沖去染液,待干。(6)觀察結(jié)果:將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細胞。一張良好血涂片的要求:
厚薄適宜頭體尾明顯細胞分布均勻邊緣整齊兩端和兩邊留有空隙標準血涂片血涂片分布不均主要原因:推片邊緣不齊、用力不均勻、載片不清潔
四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分:
①
美藍(亞甲藍):M+堿性染料,易氧化稱為天青。
②伊紅:E-酸性染料
③
瑞氏染料:M++E-ME↓(伊-美中性物)
④甲醇:溶解染料;固定細胞形態(tài);蛋白質(zhì)呈顆?;蚓W(wǎng)狀,增加細胞與染料的接觸。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)
1.
染液成分:
①
美藍(亞甲藍):M+堿性染料
②伊紅(曙紅):E-酸性染料
③
瑞氏染料:M++E-ME↓(伊-美中性物)
④
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