Agilent-1260-HPLC-工作原理及簡(jiǎn)單操作

Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作

10-12-2012Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作培訓(xùn)目的：

1.了解HPLC各模塊的原理；

2.掌握HPLC各模塊日常維護(hù)的要點(diǎn)；

3.掌握開(kāi)機(jī)，關(guān)機(jī)。Agilent1260HPLC工作原理及簡(jiǎn)單操作內(nèi)容：一、HPLC各模塊的原理及維護(hù)；二、開(kāi)機(jī)/關(guān)機(jī)操作；

三、討論；四、評(píng)估。一、HPLC各模塊工作原理及維護(hù)HPLC：高效液相色譜儀（HighPerformancesLiquidChromatography）。

由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾個(gè)部分組成。工作時(shí)儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)樣品進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。關(guān)于溶劑HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)所有溶劑應(yīng)為HPLC級(jí)，水應(yīng)為二次超純水；所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾。過(guò)濾水應(yīng)使用水相濾膜，過(guò)濾有機(jī)相應(yīng)使用有機(jī)相濾膜，不能混用。每一次濾膜只能用一次，不能重復(fù)使用；如果沒(méi)有在線脫氣機(jī)，所有溶劑應(yīng)經(jīng)過(guò)超聲脫氣；水易滋生藻類，避免直接照射，過(guò)濾水最好使用不要超過(guò)兩天；如果條件允許可向溶劑中加入0.001-0.0001M的疊氮化鈉；注意溶劑的相容性，避免使用不相容的溶劑；避免使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有機(jī)氯等腐蝕性溶劑；在溶劑瓶中的溶劑過(guò)濾頭可能會(huì)堵塞，必要時(shí)小心拿下用強(qiáng)酸（35%硝酸）浸泡時(shí)，用水沖洗，但不要使用超聲處理。關(guān)于在線真空脫氣機(jī)在線真空脫氣機(jī)的管路容量為12ml，壓力范圍為110Torr-190Torr。為保證脫氣機(jī)的良好使用性能，在下述情況下需要用注射器抽洗脫氣機(jī)管路，每個(gè)通道使用不低于30ml的異丙醇。1，新的脫氣機(jī)或新的管路；2，更換了溶劑，尤其是緩沖鹽與有機(jī)相之間、兩個(gè)不相容流動(dòng)相之間的互換時(shí)；3，輸液泵關(guān)閉了一段時(shí)間，或使用揮發(fā)性溶劑混合物。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于泵：（四元泵）HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于泵（泵頭組件）出口球閥BOV清洗閥PurgeValve柱塞桿Piston主動(dòng)輸入閥AVHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)活塞外框架SealWash組件泵頭密封墊泵腔更換過(guò)濾白頭在清洗閥中的過(guò)濾白頭需要更換，在清洗狀態(tài)下，設(shè)置流量為5ml/min，此時(shí)系統(tǒng)壓力如果超過(guò)10bar，則需更換過(guò)濾白頭。更換步驟：1，關(guān)閉泵電源；2，用扳手去掉通往進(jìn)樣器上的毛細(xì)管，拔掉廢液管；3，用專用扳手小心把清洗閥卸下來(lái)；4，輕輕去掉聚四氟乙烯密封墊和金密封墊，將過(guò)濾白頭拿出；5，更換新的過(guò)濾白頭，裝上聚四氟乙烯密封墊和金密封墊；6，裝上清洗閥；7，連接管路。過(guò)濾白頭聚四氟乙烯密封墊金密封墊清洗閥PurgeValveHPLC各模塊的工作原理及維護(hù)更換過(guò)濾白頭1，去掉毛細(xì)管，廢液管2，卸掉清洗閥3，更換過(guò)濾白頭4，更換白頭，裝好清洗閥HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)泵的注意事項(xiàng)1，溶劑的過(guò)濾、脫氣；2，避免使用腐蝕性溶劑；3，在滿足分析的前提下，盡可能使用較低的流速—較低的系統(tǒng)壓力。4，更換過(guò)濾白頭；5，考慮溶劑的相容性；6，盡可能使用新鮮的水；7，使用0.01M以上濃度的緩沖溶液要選配柱塞清洗組件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶劑比如環(huán)己烷時(shí)，建議使用聚乙烯密封墊，部件號(hào)為0905-1420，在0—200Bar下使用聚乙烯密封墊比標(biāo)準(zhǔn)密封墊更耐磨損。四元泵：四元泵多通道比例閥MCGV使用時(shí)注意，緩沖溶液要放在A、D通道，以避免鹽顆粒析出。建議A通道：水；B、C通道：有機(jī)溶劑；D通道：緩沖溶液。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)樣品準(zhǔn)備樣品完全溶解在流動(dòng)相中樣品沒(méi)有完全溶解過(guò)濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣量盡量小關(guān)于進(jìn)樣器HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于進(jìn)樣器準(zhǔn)備位置調(diào)用樣品瓶吸樣品進(jìn)樣和運(yùn)行位置標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過(guò)程...HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)自動(dòng)進(jìn)樣器樣品要干凈、經(jīng)過(guò)過(guò)濾。洗針：把樣品殘留降低到最小限度，可降低進(jìn)樣的記憶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶墊。多次吸液

用于進(jìn)樣量大于100ul

HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于恒溫柱箱控制范圍：最高80oC，低溫低于室溫10oC。預(yù)熱塊體積左面為3ul，右面為6ul，除非有特殊要求，左右溫度應(yīng)保持一致。一定要關(guān)閉前面板。HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于原理HPLC各模塊的工作原理及維護(hù)關(guān)于色譜柱保護(hù)過(guò)濾所有的溶劑和樣品使用保護(hù)柱儀器在使用完畢，