正相色譜串聯(lián)氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)董酒中烯類化合物

正相色譜串聯(lián)氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)董酒中烯類化合物

董酒是中國(guó)的著名酒（白），屬于藥品類型（東方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方方。其生產(chǎn)工藝獨(dú)特:采用大曲和小曲兩種工藝,制曲時(shí)添加中藥材,特殊的窖泥材料,以及特殊的串香工藝。制取大曲用40味中藥材,制取小曲用95味中藥材。董酒的生產(chǎn)采用特殊的串香工藝,在制曲時(shí)添加少量的中藥材勢(shì)必會(huì)對(duì)董酒的品質(zhì)與風(fēng)味產(chǎn)生重要的影響。萜類化合物廣泛存在于植物中,以異戊二烯為結(jié)構(gòu)單位倍數(shù)的烴類及其含氧衍生物,包括單萜烯類、倍半萜烯類以及二萜烯類化合物等。中藥材中含有大量的萜烯類化合物。這類化合物具有抗癌癥、抗病毒、以及抗炎癥等活性。酒類產(chǎn)品中的萜烯類化合物具有呈香或呈味作用。研究人員對(duì)葡萄酒、蘋(píng)果酒等發(fā)酵水果酒中萜烯類化合物的研究較多,如2004年P(guān)i觡eiro等人應(yīng)用固相萃取技術(shù)檢測(cè)葡萄酒中萜烯類化合物。2007年Xu和Fan等人應(yīng)用液液微萃取(LLE)與頂空固相微萃取(HS-SPME)研究蘋(píng)果酒的特征香氣成分時(shí)檢測(cè)到萜烯類化合物。同年姜文廣和范文來(lái)等人應(yīng)用溶劑輔助蒸餾(SAFE)-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)到釀酒葡萄中30種游離態(tài)萜烯類化合物。這些化合物主要來(lái)源于葡萄原料。白酒中萜烯類化合物的研究報(bào)道甚少。1997年、1998年有研究人員在董酒中檢測(cè)到3個(gè)萜烯類化合物,分別為杜松烯、雪松烯與茴香醚(腦)。本實(shí)驗(yàn)研究目標(biāo)是采用液液萃取與正相色譜技術(shù)結(jié)合GC-MS檢測(cè)藥香型董酒中的萜烯類物質(zhì),旨在更加全面的分析藥香型董酒,為進(jìn)一步研究藥材在白酒風(fēng)味中的作用奠定基礎(chǔ)。1材料和方法1.1色譜、質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)藥香型董酒(54%vol,董酒股份有限公司提供)。戊烷(德國(guó)CNW公司,色譜純),無(wú)水乙醚、NaCl、無(wú)水Na2SO4(上海國(guó)藥集團(tuán),分析純),乙醇、鑒定中標(biāo)明有RI的化合物(Sigma-Aldrich公司,色譜純);C5-C30烷烴標(biāo)樣(天津光復(fù)精細(xì)化工研究所,色譜純)。1.2ass-sifte-msd、msd/msd/msd/斷裂劑-氫火焰離子化分離器氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀AgilentGC6890-5975massselectivedetector(MSD)、氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)器AgilentGC6890-FID(美國(guó)安捷倫公司);DC-12氮?dú)獯祾邇x(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1萃取-溶劑-水nahco3-u液液萃取參照Fan等人的實(shí)驗(yàn)方法。將50mL酒樣用超純水稀釋至10%vol,加NaCl至飽和,再用90mL重蒸后的戊烷∶乙醚(體積比為1∶1)分3次進(jìn)行萃取。在分液漏斗中合并3次萃取的有機(jī)相共90mL。加入50mL的超純水,用10%的NaHCO3溶液調(diào)pH為10。靜置,有機(jī)相用10mL的超純水水洗。水洗后剩下的有機(jī)相即為中性/堿性成分,氮吹濃縮到2mL。1.3.2重蒸戊烷fps的制備由于中性/堿性組分復(fù)雜,采用硅膠柱進(jìn)一步分離。參照Fan等人的方法,稱取20g硅膠,用甲醇溶液浸泡過(guò)夜,濕法裝柱,依次用50mL甲醇、50mL重蒸乙醚和50mL重蒸戊烷洗柱。將氮吹濃縮后至2mL的中性/堿性組分加入柱中,依次用50mL的重蒸戊烷(F1),100mL重蒸的戊烷:乙醚(體積比為95∶5,F2),50mL重蒸的戊烷:乙醚(體積比分別為90∶10,F3;80∶20,F4;70∶30,F5;50∶50,F6)和50mL甲醇(F7)洗脫得到7個(gè)組分(控制洗脫流速在1~1.5mL/min)。收集各組分,無(wú)水Na2SO4干燥過(guò)夜,氮吹濃縮至200μL,待GC-MS分析。1.3.3色譜條件與色譜柱升溫程序采用極性與非極性雙柱定性。FFAP柱(60m×0.25mm×0.25μm)分離的色譜條件:氣相色譜進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度為250℃,載氣為氦氣,流速2mL/min;進(jìn)樣量為1μL,不分流進(jìn)樣;色譜柱升溫程序:初溫50℃,保持2min,以3℃/min升至170℃,170℃保持2min再以6℃/min升至230℃,保持15min。HP-5柱(30m×0.25mm×0.25μm)分離的色譜條件:初溫50℃,保持2min,再以6℃/min升至230℃,保持15min。其他條件同F(xiàn)FAP柱。質(zhì)譜條件:EI電離源;電子能量:70eV;離子源溫度:230℃;掃描范圍:35~350amu。1.3.4保留指數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品的定性分析萜烯類化合物的定性通過(guò)與NIST05質(zhì)譜庫(kù)(AgilentTechnologiesInc.)中標(biāo)準(zhǔn)譜圖比對(duì),以及標(biāo)準(zhǔn)品的保留指數(shù)(RI)定性;沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品的,采用文獻(xiàn)報(bào)道的RIL定性;否則為臨時(shí)性鑒定。采用歸一化法計(jì)算峰面積百分比。2結(jié)果與討論2.1烯類化合物通過(guò)正相色譜實(shí)現(xiàn)各物質(zhì)的充分分離,結(jié)果較理想,見(jiàn)表1。從表1結(jié)果可知,董酒中共分離鑒定了52種萜烯類化合物,包括14種單萜烯類化合物、38種倍半萜烯類化合物。其中F1組分分離得到了34種萜烯烴類(見(jiàn)圖1),F3和F4組分分離得到了6種萜烯醛和酮類化合物,F5組分分離得到12種萜烯醇類物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)采用正相色譜法分離與鑒定出董酒中的萜烯類物質(zhì)較文獻(xiàn)報(bào)道的多檢測(cè)到49種。2.2烯及其他烯類化合物通過(guò)峰面積百分比計(jì)算得,p-茴香醛濃度最高(27.21%),其次是白菖油萜(11.31%),δ-杜松烯(7.38%),卡拉烯(5.11%),樟腦(4.13%),(-)-龍腦(3.65%),α-雪松烯(3.29%)。從種類和總峰面積百分比看,倍半萜烯類化合物(54.7%)是董酒中的主要萜烯類化合物,含量較高的有白菖油萜、δ-杜松烯、卡拉烯、α-雪松烯;單萜烯類化合物峰面積百分比合計(jì)為45.27%,濃度較大的有p-茴香醛、樟腦和(-)-龍腦。從萜烯是否含氧分類分析,萜烯烴類有34種,氧化萜烯類有18種;萜烯烴類占總峰面積的52.73%,氧化萜烯類占總峰面積的47.24%。在氧化萜烯類中,只檢測(cè)到6種萜烯醛和酮,但它們卻占了總峰面積的34.21%,尤其是p-茴香醛,說(shuō)明萜烯醛和酮對(duì)董酒的質(zhì)量影響較大;共檢測(cè)到12種萜烯醇,含量占總峰面積的13.03%。3烯類化合物中p-香辛料的檢測(cè)應(yīng)用正相色譜技術(shù)分離藥香型董酒中萜烯類化合物,實(shí)現(xiàn)了各物質(zhì)的較好分離,結(jié)合GC-MS檢測(cè),極性與非極性柱定性,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。通過(guò)與質(zhì)譜譜庫(kù)檢索、標(biāo)準(zhǔn)品保留指數(shù)(RI)比對(duì)及參考文獻(xiàn)的保留指數(shù)(RIL)比對(duì)分析,共鑒定出52種萜烯類化合物。通過(guò)峰面積百分比分析,發(fā)現(xiàn)p-茴香醛所占萜烯總峰面