標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本

1、 原則曲線本質(zhì)分析檢測(cè)中原則曲線是指一系列已知含量（濃度/量）物質(zhì)與儀器響應(yīng)/信號(hào)之間關(guān)系,數(shù)學(xué)解決就是曲線方程，圖形表達(dá)就是原則曲線（圖1）。原則曲線目是可以依照原則曲線查出待測(cè)物質(zhì)含量。當(dāng)咱們得到一系列已知含量物質(zhì)響應(yīng)后,就會(huì)去建立函數(shù)關(guān)系,數(shù)學(xué)上稱曲線擬合，由于直線最為簡(jiǎn)樸,因此常慣用直線方程加以擬合,固然會(huì)用到多項(xiàng)式擬合等其她方式。原則曲線核心問題要解決：1、 能找到確切濃度原則物質(zhì)或原則品。2、 原則系列和待測(cè)物質(zhì)一定要有相似和一致基體,由于樣品基體也許會(huì)干擾儀器響應(yīng)，從這個(gè)意義上講，樣品前解決實(shí)際就是提供原則和樣品同樣基體環(huán)境，盡量祛除干扌mK因此最佳原則系列應(yīng)當(dāng)是樣品基體匹配原則系列。而辦法建立過程中一方面要考慮固然是基體干擾問題準(zhǔn)薦用原則加入曲線和Youden曲線分別考察樣品基體所帶來乘積性干擾和加和性干擾。原則加入曲線就是在樣品中加入一系列原則，然后考察該原則加入曲線和原則曲線斜率記錄學(xué)差別,若有差別需考慮用原則加入法定量；而Youden曲線就是對(duì)樣品做一系列稀釋,然后用稀釋倍數(shù)如1/10,1/5,1/2,1對(duì)儀器響應(yīng)做曲線,考察該

Youden曲線截距與0差別,若有差別則提示有加和性干擾，此時(shí)測(cè)定值要減去該截距才是真實(shí)值。只有解決了原則曲線與樣品基體匹配問題,咱們定量才可靠。內(nèi)標(biāo)法和代替物使用則是為理解決儀器和前解決影響問題。SignalConcQntraVonSignalConcQntraVon圖1標(biāo)準(zhǔn)曲線（LOD檢出限，LOQ定童限，LOL線性上限）2、原則曲線做法按《基于原則樣品線性校準(zhǔn)》推薦:1、 原則曲線濃度范疇?wèi)?yīng)覆蓋正常操作條件下被測(cè)量范疇；2、 原則樣品組分盡量與被測(cè)樣品組分一致；3、 原則樣品濃度值應(yīng)等距離分布在被測(cè)量范疇；4、原則樣品個(gè)數(shù)至少應(yīng)有3個(gè)濃度;

5、每個(gè)原則點(diǎn)至少重復(fù)2次,這個(gè)重復(fù)是指從稀釋開始;如果國(guó)標(biāo)有相應(yīng)濃度系列推薦，盡量按國(guó)標(biāo)，如果你要偷懶,例如我要減少原則點(diǎn)，至少要有理論原則支撐，例如至少要3個(gè)濃度。工作中咱們經(jīng)常采用線性校準(zhǔn)，由于線性方程最為簡(jiǎn)潔。3、原則曲線檢查原則曲線檢查是實(shí)際操作中最大難點(diǎn)，也是工作中誤區(qū)和爭(zhēng)議最多話題，例如GB/T5750.3-就將原則曲線檢查分為：精密度檢查，截距檢查和斜率檢查，但并未出示詳細(xì)檢查辦法?！矫嬷v講這三個(gè)檢查，原則曲線精密度檢查，實(shí)際含義就是做出來實(shí)驗(yàn)點(diǎn)在我擬合直線方程左右分布狀況，原則曲線是所有點(diǎn)以最小二乘算法（OLS）擬合岀來,這條曲線到所有點(diǎn)垂直距離和（殘差）是最小。因而這條曲線并非通過所有點(diǎn)而是非常接近所有點(diǎn)，精密度檢查就是看這些實(shí)驗(yàn)點(diǎn)距離擬合直線距離有無異常，因此也稱線性檢查（擬合檢查）。這時(shí)精密度（線性檢查）需用F檢查，P<0.05作為線性檢查合格原則。原則曲線截距檢查和斜率檢查分別考察Y二a+bX中a和b與0記錄學(xué)差別，a與0有差別闡明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別闡明儀器敏捷度主線達(dá)不到分析規(guī)定。尋常工作中咱們通慣用有關(guān)系數(shù)來作為原則曲線好壞原則，這點(diǎn)有一定道理，但并不全面。決定系數(shù)是有關(guān)系數(shù)平方，就是咱們經(jīng)常在儀器軟件中看到“或Fit,它提示是我建立回歸方程所解釋X對(duì)Y變化占Y變量比值，例如決定系數(shù)是0.99也就是說我這個(gè)回歸方程可以解釋Y變化99%,剩余1%就是殘差。前面提到精密度（線性檢查）就是用這兩某些變化做F檢查，由于記錄檢查臨界值比較大，普通0.90以上有關(guān)系數(shù)都會(huì)通過這個(gè)F檢查，固然還與實(shí)驗(yàn)點(diǎn)數(shù)（自由度）關(guān)于。這里要提到GB/T22554-《基于原則樣品線性校準(zhǔn)》中關(guān)于失擬檢查問題,這里失擬檢查是要看曲線擬合后剩余殘差與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)自身隨機(jī)誤差（變異）之間差別,同樣采用F檢查，此時(shí)失擬檢查P應(yīng)當(dāng)＞0.05,也就是說殘差應(yīng)當(dāng)跟實(shí)驗(yàn)測(cè)定中隨機(jī)誤差（變異）沒有差別，你要看每次測(cè)定隨機(jī)誤差（變異）就必要多次測(cè)定同一濃度,因而失擬檢查規(guī)走每個(gè)濃度點(diǎn)至少重復(fù)2次。除此之外,最后咱們還要看看這些殘差分布與否是正態(tài),由于正態(tài)才符合隨機(jī)誤差特性。綜上所述，原則曲線檢查應(yīng)當(dāng)是線性檢查結(jié)合失擬檢查，以及殘差正態(tài)性檢查結(jié)合才是記錄學(xué)上比較完備。關(guān)于原則曲線記錄檢查細(xì)節(jié)請(qǐng)參看如下帖子《原則曲線究竟該如何檢查》普通咱們采用有關(guān)系數(shù)0.99以上說法缺少記錄完備性。正如人們經(jīng)?？吹阶兓瘮M合參數(shù)個(gè)數(shù)，如二次方程明顯能提高有關(guān)系數(shù)，但是咱們經(jīng)常沒有勇氣去用二次曲線方程，由于你沒有記錄學(xué)上完備支撐。如果你發(fā)現(xiàn)原則曲線在低濃度和高濃度點(diǎn)變異限度不同（非等方差），此時(shí)你應(yīng)當(dāng)考慮權(quán)重最小二乘（WLS）。4、原則曲線使用中問題4.1原則曲線需要人為增長(zhǎng)（0,0）點(diǎn)嗎?不能。普通原則系列多是配制0,123mg/L系列這樣說法，沒做實(shí)驗(yàn)人為添加（0,0）很不當(dāng)，由于諸多時(shí)候0管進(jìn)入儀器也許也有響應(yīng)值,這也是咱們考察試劑空白一種重要環(huán)節(jié)。這個(gè)0管在某些時(shí)候非常重要，例如全血鉛測(cè)定，咱們采用牛血清來基體匹配原則系列，如果此時(shí)你用酸做空白或沒做實(shí)驗(yàn)人為添加（0,0）,那你就很難做好原則曲線。因此原則曲線0管也是做好原則曲線重要考慮點(diǎn)。4.2原則曲線需要減掉試劑空白來做嗎？不需要。儀器測(cè)出來原則系列響應(yīng)值可以減掉試劑空白或減掉0管響應(yīng)值來做,工作中咱們也慣用0管來做儀器調(diào)零。其實(shí)沒有必要那么麻煩,雖然空白或0管有響應(yīng)值,在構(gòu)建原則曲線時(shí)，咱們已經(jīng)以為該響應(yīng)值就是0濃度，也就是扣除了這個(gè)空白。4.3什么時(shí)候用Y二bX和二次曲線呢？原則曲線咱們普通采用是Y二a+bX,曲線擬合完必要要做記錄檢查，且要做記錄完備線性檢查和失擬檢查，然后再做a與0差別檢查，如果a與0記錄學(xué)上無差別，你就可以考慮用Y二bX擬合曲線，擬合出來后同樣做線性檢查和失擬檢查,如果線性檢查合格（P<0.05歸失擬檢查合格（P>0.05他時(shí)你就可以采用Y二bX。二次曲線采用同樣是這樣道理，如果你Y二a+bX時(shí)擬合不合格，你就考慮用Y二a+bX+cX2,同樣做失擬檢查,考察擬合符合狀況。如果Y二a+bX和Y二a+bX+cX2都滿足擬合檢查和失擬檢查合格,貝｝J采用Y二a+bX形式,這樣符合記錄學(xué)上參數(shù)至少記錄簡(jiǎn)潔性原則。4.4原則曲線去査含量時(shí)是先減空白信號(hào)算樣品含量還是先算出空白含量相減呢？工作中咱們常要減掉空白得到樣品含量，既有國(guó)標(biāo)辦法有推薦先算出空白含量,用樣品含量相減,也有推薦先用樣品信號(hào)減空白信號(hào)然后去原則曲線推算含量。并且這兩種算法經(jīng)常差距很大。其實(shí)這種差距往往是低含量水平時(shí)才浮現(xiàn)，在低含量水平通過原則曲線推算含量時(shí),自身不擬定度就很大。這兩種辦法都可以。個(gè)人推薦先用樣品信號(hào)減空白信號(hào)然后去原則曲線推算含量,由于這樣出來含量不擬定度要小某些,而先算出空白含量再相減就增長(zhǎng)了1次原則曲線推算含量時(shí)不擬定度，由于好測(cè)量永遠(yuǎn)是不擬定度小測(cè)量。4.5如何做兩條原則曲線檢査呢？1、先從原理上講：判斷兩條或多條原則曲線差別，須檢查殘差，截距和斜率三【頁，分別有不同記錄學(xué)參數(shù),殘差用F檢查,截距和斜率采用較為復(fù)雜記錄量。2、從實(shí)際操作講:多用協(xié)方差分析檢查截距和斜率差別，以SPSS為例：1?先重新整頓數(shù)據(jù)，將y2數(shù)據(jù)列加到y(tǒng)l下面,變成一種變量y;將x2數(shù)據(jù)列加到xl下面,變成一種變量x;然后再設(shè)定一種新分組變量group,本來第1組值為1,第2組值為2.2?進(jìn)行協(xié)方差分析（第一步分析斜率與否無差別）.Analyze->GeneralLinearModel->UnivariateDependentList:填入y 將y做為因變量FixedFactor:填入groupCovaraites:填入x 將x做為協(xié)變量Model:選CustomModel:填入xgroupx*group 注意如果變量填入順序不同樣，成果也會(huì)不同樣.Sumofsquares下拉列表框:選Typel然后點(diǎn)擊ok,當(dāng)作果里x*group這一行Sig.P值,若不不大于0.05,則接受原假設(shè),即兩條回歸直線斜率無差別，否則回絕.3?再來進(jìn)行截距無差別分析其實(shí)過程跟上面同樣，只是Model里去掉了x*group交叉項(xiàng).Analyze->GeneralLinearModel->UnivariateDependentList:填入y 將y做為因變量FixedFactor:填入groupCovaraites:填入x 將x做為協(xié)變量Model:選CustomModel:填入xgroup 注意如果變量填入順序不同樣，成果也會(huì)不同樣.Sumofsquares下拉列表框:選Typel點(diǎn)擊ok后，看group—行Sig.P值若P值不不大于0.05闡明兩條回歸直線截距也無差別,若不大于0.05闡明截距是有差別。4.6原則系列原則溶液體積取用中有效數(shù)字該如何寫呢？原則溶液體積取用有效數(shù)字跟你采用體積量具備直接關(guān)系。例如說量取或精確量取等字眼,10mL和lO.OmL提示你要采用不同量具。當(dāng)咱們使用某個(gè)量具完畢某次體積取用后,讀數(shù)是按照量具最小允差決走,而最小允差是針對(duì)最小分度線而言。當(dāng)取用10mL體積時(shí)，如果用A級(jí)10mL分度吸管，那么lO.OmL應(yīng)當(dāng)是擬定，由于它分度線為O.lmL。當(dāng)取用lmL體積時(shí)，如果用A級(jí)ImL分度吸管，那么l.OOmL應(yīng)當(dāng)是擬定，由于它分度線為O.OlmL。因此我個(gè)人意見,究竟寫10.00還是10.0以最小分度線來擬定,最小分度線如下都為估讀。如果你以為估讀也是有效數(shù)字話,lO.OOmL也可以,由于此時(shí)容量允差為0.05mL,但l.OOOmL就沒有太大意義了，由于A級(jí)ImL分度吸管容量允差已經(jīng)是0.008mL了。4.7原則曲線有關(guān)系數(shù)有效數(shù)字該如何保存呢？GB5750.3-8.2.7項(xiàng)有如下規(guī)走:校準(zhǔn)曲線有關(guān)系數(shù)只舍不入，保存到小數(shù)點(diǎn)后浮現(xiàn)非9―位，如0.99989-0.999&如果小數(shù)點(diǎn)后都是9時(shí)，最多保存小數(shù)點(diǎn)后4位。4.8原則曲線可以用同一濃度不同體積進(jìn)樣來做嗎?原則系列普通都是配制不同濃度,進(jìn)樣相似體積來做（濃度法）。但實(shí)際工作中咱們還用到同一濃度來進(jìn)樣不同體積方式來做（體積法）,濃度法與體積法區(qū)別在于濃度法中與待測(cè)物質(zhì)存在溶劑/待測(cè)物質(zhì)比例與體積法不同。濃度法中溶劑壞境（體積）基本是一致，這樣好處就是濃度法在判斷溶劑（或溶劑中干擾物質(zhì)）和待測(cè)物質(zhì)指認(rèn)上更加容易。體積法中干擾物質(zhì)也會(huì)隨原則系列增長(zhǎng)，不容易實(shí)現(xiàn)待測(cè)物質(zhì)指認(rèn)。從逬樣針,進(jìn)小體積時(shí)不擬定度比較大,帶來直接成果時(shí)原則曲線不如濃度法容易做直。并且物理體積限制,體積法不太容易實(shí)現(xiàn)較大跨度濃度系列設(shè)立?？傊w積法和濃度法本質(zhì)上是一致，但濃度法有:容易做好原則曲線,容易實(shí)現(xiàn)較大濃度跨度和容易實(shí)現(xiàn)待測(cè)物質(zhì)指認(rèn)等長(zhǎng)處。4.9原則曲線査出樣品是負(fù)值，如何報(bào)告成果呢？這種狀況下咱們普通選取四種方式報(bào)告成果:未檢出，＜檢出限,＜定量限,＜原則曲線第一點(diǎn)所推算樣品濃度。四種均有道理,實(shí)際區(qū)別是埋在四種選取下面成果報(bào)告人風(fēng)險(xiǎn)。未檢出所有含義應(yīng)當(dāng)是本實(shí)驗(yàn)室本儀器本辦法未檢出,如果沒有這些界定，未檢出歧義諸多,并且沒有提供其他任佢冋用信息。因此我建議學(xué)生普通不采用這種報(bào)告辦法;檢出限是定性檢出標(biāo)志,它是跟空白記錄比較計(jì)算出來。每臺(tái)儀器，每次測(cè)定均有其檢出限，檢岀限計(jì)算當(dāng)前有兩大類計(jì)算辦法:單濃度辦法和校正設(shè)計(jì)法(Anal.Chem.1997,69:3069),常規(guī)采用單濃度辦法需要額外工作,因此當(dāng)前趨向用校正設(shè)計(jì)法，既運(yùn)用原則曲線直接計(jì)算檢出限，但檢出限I類和II類錯(cuò)誤皆控制在0.05。定量限是可以定量檢出標(biāo)志，其RSD定為10%,其II類錯(cuò)誤t匕檢岀限小諸多。＜原則曲線第一點(diǎn)所推算樣品濃度,是咱們儀器比較可信測(cè)定濃度?？傊瑘?bào)告＜檢岀限，＜定量限，v原則曲線第一點(diǎn)所推算樣品濃度所犯I類和II類錯(cuò)誤依次減少，但如果這個(gè)報(bào)告成果已經(jīng)超過你要判斷限值,那么你檢測(cè)就一點(diǎn)意義都沒有了。因此當(dāng)前檢測(cè)單位甚至直接報(bào)告不大于國(guó)標(biāo)規(guī)定限值，從概率記錄角度講,它出錯(cuò)誤幾率最小”但又解決了客戶檢測(cè)問題。4.10空白測(cè)出來是負(fù)值，該不