生物化學(xué)課件：第四節(jié) 蛋白質(zhì)的性質(zhì)

第四節(jié)蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)一.膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)的分子量1萬~100萬之間，其分子直徑1~100nm之間，在膠體顆粒的范圍。所以蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì)，如布朗運動、光散射、電泳、不能透過半透膜及具有吸附能力等。二.相對分子量測定方法：超速離心法凝膠過濾法聚丙烯酰胺電泳等三.

兩性解離及等電點蛋白質(zhì)分子上有許多可解離的基團，如所以蛋白質(zhì)具有兩性性質(zhì)1.兩性解離肽鏈末端的氨基肽鏈末端的羧基酸性aa殘基的側(cè)鏈堿性aa殘基的側(cè)鏈三.

兩性解離及等電點2.蛋白質(zhì)的帶電情況蛋白質(zhì)的帶電情況與溶液的pH有關(guān)+-0NetChargeofaProtein34567891011EnvironmentalpH三.

兩性解離及等電點3.蛋白質(zhì)的等電點+-0NetChargeofaProtein34567891011EnvironmentalpH當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在一定的pH的溶液中，所帶的正負電荷相等，它在電場中既不向陽極也不向陰極移動，此時溶液的pH值叫做該蛋白質(zhì)的等電點(pI)。等電點(pI)三.

兩性解離及等電點3.應(yīng)

用電泳分離純化蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)受到某些理化因素的影響，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)功能隨之改變或喪失，但未導(dǎo)致蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的改變，這種現(xiàn)象叫變性作用（denaturation）。

1、蛋白質(zhì)變性的概念四.蛋白質(zhì)的變性2、蛋白質(zhì)變性的因素物理因素：加熱、紫外線、超聲波、高壓等；化學(xué)因素：強酸、強堿、脲、鹽酸胍、去垢劑、重金屬鹽等；四.蛋白質(zhì)的變性生物活性喪失（酶）；溶解度降低，粘度增大，擴散系數(shù)變?。ǖ扒澹换鶊F位置改變；對蛋白酶敏感性增大。3、蛋白質(zhì)變性后的表現(xiàn)四.蛋白質(zhì)的變性4、蛋白的復(fù)性蛋白質(zhì)的變性作用若不過于劇烈，則是一種可逆過程。高級結(jié)構(gòu)松散了的變性蛋白質(zhì)通常在除去變性因素后，可緩慢地重新自發(fā)折疊形成原來的構(gòu)象，恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性，這種現(xiàn)象稱為復(fù)性(renaturation)。四.蛋白質(zhì)的變性大多蛋白質(zhì)變性后，很難復(fù)性。五、蛋白質(zhì)的沉淀加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層，蛋白質(zhì)的膠體溶液就不在穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：

1）高濃度中性鹽

（NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl

（中和蛋白質(zhì)的電荷）這種加入鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象稱為鹽析，用于蛋白質(zhì)分離制備。2）有機溶劑

丙酮、乙醇

(破壞蛋白質(zhì)水膜)五、蛋白質(zhì)的沉淀加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層，蛋白質(zhì)的膠體溶液就不在穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑有：3）重金屬鹽

Hg2+、Ag+、Pb+

（與蛋白質(zhì)中帶負電基團形成不易溶解的鹽）

4）生物堿試劑

苦味酸、三氯乙酸、目酸、鎢酸等（與蛋白質(zhì)中帶正電荷的基團生成不溶性鹽）

六.

紫外吸收和顏色反應(yīng)1.紫外吸收

由于蛋白質(zhì)中的Tyr、Trp

和Phe

殘基在紫外區(qū)有光吸收，所以蛋白質(zhì)在280nm

的光波長處有最大光吸收這一特性可用于蛋白質(zhì)的檢測2.顏色反應(yīng)

反應(yīng)名稱試劑顏色參與反應(yīng)的基團有此反應(yīng)的蛋白質(zhì)或aa雙縮脲反應(yīng)NaOH溶液

+少量稀CuSO4溶液紫紅至藍紫2個以上相鄰的肽鍵所有蛋白質(zhì)米倫反應(yīng)HgNO3+Hg(NO2)2

+HNO3+HNO2紅色酚Tyr黃色反應(yīng)濃硝酸+氨黃色至橙色苯Phe、Tyr乙醛酸反應(yīng)乙醛酸試劑+濃硫酸紫色吲哚Trp茚三酮反應(yīng)茚三酮藍色游離氨基a-氨基Folin-酚反應(yīng)堿性CuSO4

+磷鉬酸-磷鎢酸藍色酚Ty