不同提取方法對(duì)正常小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響

不同提取方法對(duì)正常小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響

第五磨飲子源于明代著名醫(yī)生王三福的《醫(yī)學(xué)大便》。它由木香、檀香山、檳榔、止痛藥、五味中藥組成。臨床應(yīng)用廣泛。所有由肝臟和胃氣量不調(diào)引起的胃痛、腹痛、腰痛、傷口等疾病都可以使用。愈合效果顯著。本研究觀察了不同劑量五磨飲子水提和醇提藥液對(duì)正常小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響并探討其部分作用機(jī)理,報(bào)告如下。1實(shí)驗(yàn)材料1.1中藥制備工藝木香、沉香、檳榔、枳實(shí)、烏藥:均購(gòu)于云南鴻翔中草藥有限公司;水提、醇提浸膏:均在云南中醫(yī)學(xué)院中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提取制備;莫沙必利:魯南貝特制藥有限公司,批號(hào):100802。營(yíng)養(yǎng)半固體糊制作:奶粉16g、葡萄糖8g、淀粉8g、活性碳末3g,加入蒸餾水定容至300ml,稍加熱至該混合物變稠即可,冷卻后待用。1.2云南省云南省scxk-SPF級(jí)KM種小鼠,雌雄各半,體重18～22g,購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué),合格證號(hào):SCXK(滇)2011-0004。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物先適應(yīng)性飼養(yǎng)3天,給予標(biāo)準(zhǔn)普通飼料和充足的飲用水,自由飲食,實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1生藥濃度的受試藥物80只小鼠,隨機(jī)分為8組,分組及給藥見(jiàn)表1,各組分別灌胃給予不同生藥濃度的受試藥物。給藥30分鐘后各鼠均灌服黑色半固體糊0.5ml/只,詳細(xì)記錄每只小鼠灌糊時(shí)間,給藥后各鼠分別置于鋪有濾紙的透明燒杯內(nèi),觀察小鼠排便情況,準(zhǔn)確記錄排出第一粒黑便時(shí)間,計(jì)算小鼠消化時(shí)間。2.2胃內(nèi)殘留率%實(shí)驗(yàn)分組和給藥劑量見(jiàn)表1。給藥30分鐘后各鼠均灌服黑色半固體糊0.5ml/只,15分鐘后頸椎脫臼處死小鼠,剖腹,迅速結(jié)扎賁門及幽門,自賁門部至回盲部將胃及小腸一并取出,再剪斷幽門部,將胃和小腸分離開(kāi),用濾紙輕擦胃體表面稱其全重,然后沿胃大彎剪開(kāi)胃體,洗去胃內(nèi)容物再用濾紙擦干水分稱胃凈重。以胃全重和胃凈重之差為胃內(nèi)殘留物重量,計(jì)算胃內(nèi)殘留物占所灌服半固體糊重量的百分比為胃內(nèi)殘留率。胃內(nèi)殘留率(%)=胃內(nèi)殘留物/所灌半固體糊×100%。同時(shí),迅速取出小腸(幽門至回盲部),輕輕分離相連的腸系膜后直鋪于盛有少量生理鹽水的托盤中,用直尺測(cè)量小腸全長(zhǎng)及幽門至黑色半固體糊前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊前沿的距離占小腸全長(zhǎng)的百分比為小腸推進(jìn)率。炭末推進(jìn)百分率(%)=炭末到推進(jìn)前沿的移動(dòng)距離/小腸總長(zhǎng)×100%。2.3連續(xù)給藥及劑量實(shí)驗(yàn)前各小鼠準(zhǔn)確記錄體重,分組及給藥量同上。每天給藥1次,連續(xù)給藥7天,給藥后小鼠自由飲食。末次給藥后禁食8小時(shí),檢測(cè)小鼠體重,計(jì)算小鼠體重增加值。2.4小鼠血清學(xué)檢測(cè)取小鼠50只,隨機(jī)分為5組,分組情況見(jiàn)表3,給藥劑量同上。每天給藥1次,連續(xù)給藥7天,給藥期間小鼠自由飲食。末次給藥后禁食4小時(shí),摘眼球取血,肝素抗凝試管中搖勻,4℃低溫高速離心15分鐘(2000r/min),取上層血漿,于-20℃冰箱凍存,檢測(cè)前速融。放免法檢測(cè)血漿中胃動(dòng)素(MTL)與血管活性腸肽(VIP)含量,試劑盒購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所,按試劑盒說(shuō)明操作。2.5標(biāo)準(zhǔn)差分析計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(xˉ)±(xˉ)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析;計(jì)量資料不符合正態(tài)分布,則用秩和檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1各組大鼠的屠宰時(shí)間、胃內(nèi)殘留率和加強(qiáng)率的比較結(jié)果見(jiàn)表1。3.2各組大鼠體重增長(zhǎng)情況見(jiàn)表2。3.3各組均測(cè)定了大鼠血漿輸入和血管活性腸蛋白的含量結(jié)果見(jiàn)表3。4藥物致小鼠體重的影響五磨飲子方中木香行氣止痛,入脾、胃、大腸、膽、三焦經(jīng),用于脾胃氣滯等證;檳榔辛溫降泄、破積下氣,既破三焦氣滯,又可導(dǎo)氣下行;烏藥辛溫香竄,行氣止痛、溫腎散寒,用于寒凝氣滯所致的胸腹諸痛證;沉香行氣止痛、溫中止嘔,用于胸腹脹痛,胃寒嘔吐等證;枳實(shí)破氣除痞、化痰消積,用于食積、胃腸熱結(jié)氣滯證。全方配伍,共奏行氣降逆、寬胸散結(jié)之功。本實(shí)驗(yàn)選用的對(duì)照藥物莫沙必利為選擇性5-羥色胺4(5-HT4)受體激動(dòng)藥,能促進(jìn)乙酰膽堿的釋放,刺激胃腸道而發(fā)揮促動(dòng)力作用,從而改善功能性消化不良患者的胃腸道癥狀。本實(shí)驗(yàn)中,莫沙必利對(duì)增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)、促進(jìn)胃排空、降低小鼠胃內(nèi)殘留率、促進(jìn)小腸推進(jìn)有明顯作用,連續(xù)給藥7天對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)沒(méi)有明顯的影響,能明顯降低血漿VIP、升高血漿MTL。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)五磨飲子水提和醇提藥液均能明顯促進(jìn)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng),表現(xiàn)為:(1)縮短正常小鼠消化時(shí)間:水提劑隨著劑量的增加,縮短小鼠消化時(shí)間效果更加明顯;醇提劑在低劑量時(shí)效果不顯著,但達(dá)到一定濃度后,作用效果卻十分明顯。(2)增強(qiáng)小鼠胃腸蠕動(dòng),促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn):水提藥液比醇提藥液效果明顯,尤其中、低劑量的五磨飲子效果更明顯,這可能與高劑量藥液黏稠度較高,對(duì)胃、小腸壁的附著較強(qiáng)有關(guān)。(3)五磨飲子作為力大性猛的行氣、理氣峻劑,長(zhǎng)期大劑量服用易耗氣、破氣,實(shí)驗(yàn)表明不論是水提藥液還是醇提藥液,長(zhǎng)期給藥均