鐵皮石斛離體培養(yǎng)研究

鐵皮石斛離體培養(yǎng)研究

又名紅景天科灰屬、紅景天科黑科、蘭科附生蘭科。這是一種稀有藥物和珍貴的室內(nèi)觀賞植物。貝殼石斛的自然繁殖力很低，很難傳統(tǒng)繁殖。多年來，生長量遠高于貝殼石斛。野生紅景天的自然繁殖已經(jīng)消失。近年來，關(guān)于貝殼石斛的快速繁殖報道很多，但這些報道主要僅限于對培訓(xùn)過程中誘導(dǎo)、殖長、壯苗、根管理等方面的研究，而對整個鐵砧栽培過程的研究很少。作者以無感染鐵石斛無苗莖段為外植體，研究了基本培養(yǎng)基、天然固定物和植物生長調(diào)節(jié)的選擇，提高了鐵屑組織培養(yǎng)的誘導(dǎo)率、生殖率和生根率，為其進行了工藝育苗。1材料和方法1.1試驗材料為云南野生鐵皮石斛瓶栽苗,由廣州市花卉研究中心惠贈.1.2生長性狀觀測(1)在MS、M6、KC和B5等4種基本培養(yǎng)基中分別添加NAA0.5mg/L、6-BA0.5mg/L、蔗糖20g/L,調(diào)pH至5.8.在超凈工作臺上,將鐵皮石斛試管苗切成1～2cm的莖段,在以上培養(yǎng)基上接種進行芽誘導(dǎo).每組各接種25瓶,隨機抽取其中20瓶進行生長性狀觀測.培養(yǎng)時間均為1個月,培養(yǎng)溫度(25±1)℃,光照強度1500～20001x,每天光照12h,下同.(2)在B5基本培養(yǎng)基中分別添加6-BA0.1、0.5、1.0、1.5mg/L和NAA0.5mg/L,接種培養(yǎng)莖段.(3)在B5基本培養(yǎng)基中分別加入椰子汁、香蕉泥、馬鈴薯泥(香蕉泥用新鮮果實打漿而成,馬鈴薯泥用新鮮塊莖去皮打漿而成)各150mg/L.切取已分化的芽接種到繼代培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng).(4)在B5基本培養(yǎng)基中分別添加NAA1.0、1.5、2.0mg/L,接種莖段后進行培養(yǎng).(5)在B5基本培養(yǎng)基中分別添加NAA0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/L和6-BA0.1mg/L,當(dāng)繼代培養(yǎng)的芽苗長到4～5cm后,分株接種,每瓶接5株,誘導(dǎo)生根時間為2個月.1.3數(shù)據(jù)分析的方法數(shù)據(jù)采用STATISTICA/w5.0軟件進行統(tǒng)計分析,統(tǒng)計測驗均為99%水平.2結(jié)果與分析2.1不同增殖類型互之間的增殖比較4種基本培養(yǎng)基對鐵皮石斛芽誘導(dǎo)效果,相互之間的比較差異極顯著(表1),其中以B5的增殖效果最好,增殖率達到498.90%,N6次之,MS較差,KC最差.2.2-ba濃度對增殖效果的影響不同濃度的6-BA對鐵皮石斛不定芽的增殖率差異極顯著(表2),其中以0.1mg/L的增殖效果最好,增殖率高達391.90%,健壯度也最好,隨著6-BA濃度的增加,增殖效果呈下降趨勢.2.3椰子汁添加量對鐵皮石斛芽增殖的影響3種天然附加物對鐵皮石斛芽增殖率的影響差異極顯著(表3),其中以椰子汁對鐵皮石斛芽的增殖促進作用最大,增殖率達到434.88%,而且苗粗壯,葉色濃綠,生長整齊.馬鈴薯泥和香蕉泥的增殖效果相近,但在培養(yǎng)中后期均會出現(xiàn)黃化現(xiàn)象,需要及時轉(zhuǎn)瓶.2.4兩種原球莖增殖增殖結(jié)果及比較不同濃度NAA對鐵皮石斛原球莖的增殖均有促進作用,且差異極顯著(表4),其中以1.0mg/L的增殖效果最好,增殖率為351.45%,原球莖健壯且顏色濃綠,而其它兩種濃度處理效果相近,原球莖較纖弱,顏色也較淺黃.2.5不同濃度NAA對鐵皮石斛單株生根數(shù)的影響差異極顯著(表5),其中以NAA1.0mg/L處理的效果最明顯,其單株生根數(shù)達3.05,而且根系粗壯,特別發(fā)達;NAA1.5和2.0mg/L處理組效果次之,其余各濃度處理組對生根效果較不理想.隨著NAA濃度的遞增,單株生根數(shù)呈拋物線分布,但高濃度的效果又優(yōu)于低濃度.3植物生長調(diào)節(jié)劑對不斷增殖鐵皮石斛的影響用于石斛類植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基有MS,Nitch,KnudsonC(KC),N6,B5,C17,SH,Kn,VacinWent(VW),Winber(W),1/2B5,1/2N6,1/2SH,1/2C17,1/2MS,1/2VW等[5,6,7,8,9,10,11,12],但使用最多的是MS.本試驗比較了MS、N6、KC和B5等4種基本培養(yǎng)基對鐵皮石斛芽誘導(dǎo)和增殖的效果,發(fā)現(xiàn)B5優(yōu)于其他基本培養(yǎng)基.楊聯(lián)河等用曲莖石斛的莖段和種子在附加適量NAA,6-BA的MS、B5和KC培養(yǎng)基中進行離體培養(yǎng),結(jié)果也發(fā)現(xiàn)B5對芽增殖效果最好,與劉驊等報道一致.因此,我們認為,MS培養(yǎng)基可能是由于無機鹽濃度偏高的緣故,不適合包括石斛蘭在內(nèi)的附生蘭的組織培養(yǎng),而B5和N6無機鹽濃度適中,能滿足其生長的要求,KC營養(yǎng)則偏低,不能滿足鐵皮石斛生長的需要.植物生長調(diào)節(jié)劑對鐵皮石斛的組織培養(yǎng)起著重要的作用.6-BA對不定芽增殖的影響以低濃度較好,這與張明等的報道相似.但王春認為6-BA濃度以2.0mg/L的增殖效果好于0.5mg/L;黃萍萍等使用的6-BA濃度高達4mg/L,可能與石斛種類不同有關(guān).NAA對石斛蘭原球莖的增殖以低濃度(1.0mg/L)的效果為好.在附加BA0.1mg/L的情況下,NAA對鐵皮石斛芽生根以1.0mg/L處理的效果最好,這與周華偉等的報道有差異,這可能是因為石斛蘭種類不同或基本培養(yǎng)基不同的緣故.天然附加物對鐵皮石斛增殖的影響差異很大,椰子汁對鐵皮石斛增殖的效果優(yōu)于香蕉泥和馬鈴薯泥,與張明等的結(jié)果相似.雖然香蕉泥可以促進石斛幼苗的生長與分化,但對原球莖的增殖與分化則有一定的抑制作用.在生產(chǎn)上,建議采用B5作基本培養(yǎng)基附加6-BA0.1mg