3種拮抗菌制劑對西瓜枯萎病的拮抗作用

3種拮抗菌制劑對西瓜枯萎病的拮抗作用

西瓜萎縮是西醫(yī)最重要的疾病之一。近年,由于西瓜種植面積不斷擴(kuò)大,造成輪作困難,致使枯萎病的為害也逐年加重。重茬地一般發(fā)病率在30%左右,嚴(yán)重地高達(dá)80%以上,甚至絕產(chǎn)。目前,化學(xué)防治仍是控制西瓜枯萎病的主要措施,但由于長期大面積連續(xù)使用,防效已日漸降低。利用拮抗菌防治西瓜枯萎病越來越受到重視,國內(nèi)已進(jìn)行了用非致病鐮刀菌、熒光假單胞菌、綠色木霉以及哈茨木霉等防治該病害的試驗(yàn),但尚無聯(lián)合利用拮抗真菌和拮抗細(xì)菌防治西瓜枯萎病的報道。本文對綠色木霉TR-8和芽孢桿菌B67聯(lián)合防治西瓜枯萎病進(jìn)行了初步研究。1材料和方法1.1微生物可濕性制劑西瓜枯萎病菌由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物農(nóng)藥工程中心分離;50%多菌靈可濕性粉劑,江蘇省新沂農(nóng)藥廠生產(chǎn);0.5%施特靈水劑,河北省南宮生物化工廠生產(chǎn);西瓜品種為鄭雜九號,合肥豐樂種業(yè)股份有限公司繁育。1.2生長抑制率測定在遼寧省各地采集健康西瓜或黃瓜的根際土壤及幼根,分別采用土壤稀釋法和根組織分離法,于PDA、NA和選擇性培養(yǎng)基cPCAT上進(jìn)行分離。分離得到的木霉菌和細(xì)菌經(jīng)反復(fù)純化,轉(zhuǎn)移到斜面(PDA或NA)上,4℃下保存。將木霉菌和西瓜枯萎病菌擴(kuò)繁,打取直徑6mm的菌餅,PDA平板上于25℃下對峙培養(yǎng)5d后,測量菌落半徑,計(jì)算病原菌生長抑制率。用接種環(huán)取一環(huán)分離得到的細(xì)菌,在PDA平板中間劃一直線,于直線兩側(cè)相距2cm處分別接一直徑為6mm的西瓜枯萎病菌菌餅,以只接病原菌者作對照,于27℃下培養(yǎng)3d后,測量病原菌向細(xì)菌方向生長的距離,以R值表示拮抗作用的大小。1.3tr-8、s1e-7e-7e-d的配制將拮抗木霉和拮抗細(xì)菌在各自特定發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)恒溫振蕩培養(yǎng)7d后,取發(fā)酵物與營養(yǎng)載體混合,分別配制成108cfu/g的TR-8制劑、1010cfu/g的B67制劑和109cfu/g的健根寶粉劑(TR-8∶B67=1∶1)。1.4西瓜幼苗期枯渙病西瓜枯萎病菌用玉米砂培養(yǎng)基于25℃培養(yǎng)10d后,與滅菌細(xì)土等比例混合制成菌砂土。取老菜田土,過篩滅菌后,以藥∶土=1∶60的比例拌入TR-8制劑、B67制劑、健根寶粉劑和多菌靈可濕性粉劑,裝入分苗營養(yǎng)缽中。每缽均勻拌入菌砂土3g,并移栽健康西瓜(1片真葉)幼苗1株,正常栽培管理。每處理30株,重復(fù)4次,以不拌藥者作對照。25d后取出西瓜苗,調(diào)查發(fā)病情況,計(jì)算病情指數(shù)和病指防效。西瓜幼苗期枯萎病分級標(biāo)準(zhǔn):0級為莖內(nèi)維管束正常,外部無癥狀;1級為莖內(nèi)維管束1/4以下變色;3級為莖內(nèi)維管束1/4～1/2變色;5級為莖內(nèi)維管束1/2～3/4變色;7級為莖內(nèi)維管束3/4以上變色,部分葉片萎蔫;9級為整株枯死。1.5條田塊、田塊設(shè)置田間試驗(yàn)分別在沈陽市新城子區(qū)道義鎮(zhèn)和新民市柳河溝鎮(zhèn)進(jìn)行。在道義鎮(zhèn)選擇連續(xù)三年種植西瓜的田塊,設(shè)健根寶1∶50、1∶60和1∶70拌過篩細(xì)土3個處理,以多菌靈1∶50拌過篩細(xì)土作藥劑對照,以不拌藥過篩細(xì)土作空白對照。將藥土均勻撒在播種穴內(nèi)之后播種,每穴撒藥土100g。每處理15m2,重復(fù)3次。播種55d后調(diào)查發(fā)病情況,計(jì)算相對防效。在柳河溝鎮(zhèn),選擇連續(xù)兩年種植西瓜的田塊,設(shè)健根寶400倍、500倍和600倍液灌根3個處理,以施特靈500倍液灌根作藥劑對照,以清水作空白對照。分別于5月20日和6月2日灌根,每株200ml。每處理20m2,重復(fù)3次。6月20日調(diào)查發(fā)病情況,計(jì)算相對防效。2結(jié)果與分析2.1細(xì)菌分離結(jié)果從分離的菌株中,共篩選出對西瓜枯萎病菌具有較強(qiáng)拮抗作用的木霉菌9株、細(xì)菌10株。拮抗作用測定表明,TR-8菌株對西瓜枯萎病菌的抑制作用最強(qiáng);其次是TR-3菌株,培養(yǎng)5d后的生長抑制率分別達(dá)到39.47%和31.59%(表1)。經(jīng)鑒定,TR-8菌株屬綠色木霉(Trichodermaviride)。TR-8生長速度極快,氣生菌絲茂盛,產(chǎn)孢量大。當(dāng)將TR-8和西瓜枯萎病菌在同樣條件下分別純培養(yǎng)時,TR-8的生長速度略快于西瓜枯萎病菌;但當(dāng)將兩者對峙培養(yǎng)時,TR-8生長速度基本正常,而西瓜枯萎病菌卻明顯受到抑制。在TR-8與西瓜枯萎病菌的菌絲交接處,后者菌絲變黃并停止生長。隨著TR-8的擴(kuò)展,逐漸將西瓜枯萎病菌覆蓋,并產(chǎn)生大量木霉菌分生孢子。被全部覆蓋后,西瓜枯萎病菌停止生長,并漸漸干枯死亡。在分離篩選的細(xì)菌中,B67和B71菌株對西瓜枯萎病菌抑菌效果最明顯。對峙培養(yǎng)3d后R值分別為0.2222和0.3333(表2)。B67菌株繁殖生長速度最快,接種幾小時即可形成明顯菌落。經(jīng)初步鑒定,B67屬芽孢桿菌(Bacillussp.)。觀察發(fā)現(xiàn),西瓜枯萎病菌向拮抗細(xì)菌生長一定距離后停止生長,兩者之間形成明顯的拮抗帶。2.2根寶粉的病指防效室內(nèi)人工接菌防治試驗(yàn)結(jié)果(表3)表明,TR-8制劑、B67制劑和健根寶粉劑對西瓜枯萎病均具有一定的防治作用。尤以健根寶粉劑的病指防效最為突出,達(dá)到76.78%,顯著高于其它所有處理,與對照化學(xué)殺菌劑多菌靈的防效達(dá)極顯著差異水平。TR-8制劑和B67制劑與多菌靈的防效相當(dāng)。試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn),經(jīng)拮抗菌制劑尤其是健根寶粉劑和B67制劑處理的西瓜幼苗,不但枯萎病發(fā)病率明顯降低,而且幼苗長勢明顯健壯,葉色濃綠,根系發(fā)達(dá)。說明健根寶粉劑和B67制劑有促進(jìn)植株生長的作用。2.3健根寶粉對西瓜生長和抗菌材料效果的影響在新城子區(qū)道義鎮(zhèn)進(jìn)行的健根寶粉劑拌土于西瓜播種時穴施,健根寶粉劑1∶50和1∶60拌土穴施對西瓜枯萎病的相對防效比較理想,分別達(dá)84.20%和76.79%,顯著高于多菌靈的相對防效(表4)。拌土穴施健根寶粉劑處理的西瓜植株生長旺盛、健壯,葉片呈深綠色,這與室內(nèi)防治試驗(yàn)結(jié)果相似,進(jìn)一步證明健根寶有促進(jìn)植株生長的作用。在新民市柳河溝鎮(zhèn),于發(fā)病前和發(fā)病初期連續(xù)用健根寶粉劑400倍或500倍液灌根兩次,對西瓜病枯萎病的相對防效可達(dá)78%以上,顯著高于對照藥劑施特靈(表5)。3健根寶制劑對西瓜枯渙病的防治西瓜枯萎病是一種典型系統(tǒng)性侵染的土傳病害,此病有潛伏侵染現(xiàn)象,幼苗感病多數(shù)表現(xiàn)不明顯,到成株開花結(jié)果期陸續(xù)顯癥,有的感病株甚至終年不顯癥。該病在西瓜重茬栽培情況下,發(fā)病更為嚴(yán)重。國內(nèi)外雖已進(jìn)行了大量的綜合防治技術(shù)研究,但直到目前為止,仍無根治良方。健根寶粉劑對西瓜枯萎病的防效高達(dá)80%以上,為防治西瓜枯萎病提供了一條新途徑。大量研究已經(jīng)證明拮抗菌的作用機(jī)制主要有競爭作用、重寄生作用、抗生溶菌作用、促進(jìn)植物生長及