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文檔簡介
凋亡細胞的熒光標記形態(tài)觀察目的：
觀察細胞核形態(tài)，判別凋亡細胞。原理：DNA熒光染料Hoechst33258能透過完好細胞膜進入核內(nèi)，凋亡細胞染色質(zhì)致密，常呈月牙形斑塊或碎裂，并可見凋亡小體。非凋亡細胞核染色較均勻，熒光較淡，死亡細胞不染色。用品：
培養(yǎng)肺癌細胞(A549)
熒光染料Hoechst33258
PBS(無Ca++、Mg++)，PH7.2
4%甲醛，PBS配制；
熒光顯微鏡步驟
1、細胞培養(yǎng)于帶蓋玻片的培養(yǎng)皿中，制備單層培養(yǎng)細胞。給予不同處理，處理結束后，棄培養(yǎng)液，PBS洗2次；
2、4%甲醛固定10分鐘后，PBS洗1次
3、以5~10ug/mIHoechst33258染色約5分鐘，自來水沖洗；
4、取出蓋玻片，細胞面向下倒扣于載玻片上，熒光顯微鏡下觀察。結果
凋亡細胞核呈強亮的藍綠色熒光，活細胞的核僅呈弱熒光，死細胞一般不被Hoechst332染色。正常細胞
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