氯化鋰-匹魯卡品對(duì)大鼠癲癇模型的影響

氯化鋰-匹魯卡品對(duì)大鼠癲癇模型的影響

氯化鋁-考慮到癲癇動(dòng)物模型的行為、eeg。病理和藥理學(xué)特征與i型癲癇相似，且癲癇發(fā)作程度清晰。同時(shí)，它對(duì)癲癇的病因機(jī)制進(jìn)行了研究，提出了治療策略，并對(duì)抗癲癇藥物進(jìn)行了新的審查。但此模型病死率過(guò)高,不利于構(gòu)造慢性癲癇的動(dòng)物模型。國(guó)外有些學(xué)者提出重復(fù)注射低劑量匹魯卡品可以降低病死率,但使用這種方法后致癲大鼠的比率(63%)較低。故本研究的目的是要尋求一種方法:在保證高的致癲大鼠比率的同時(shí)最大限度的降低其病死率。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及致癲行為1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康雄性SD大鼠48只,2~3個(gè)月,體重220~250g。根據(jù)匹魯卡品劑量和干預(yù)措施隨機(jī)分為5組:實(shí)驗(yàn)1組:5只匹魯卡品100mg/kg;實(shí)驗(yàn)2組:7只匹魯卡品50mg/kg;實(shí)驗(yàn)3組:5只匹魯卡品10mg/kg;實(shí)驗(yàn)4組:8只匹魯卡品50mg/kg(n=8)。前兩組使用地西泮終止發(fā)作,后兩組使用水合氯醛終止發(fā)作。另選一組為對(duì)照組:7只以同等體積的生理鹽水代替匹魯卡品。2實(shí)驗(yàn)藥品(1)匹魯卡品(溶于生理鹽水中,Sigmap6503);(2)氯化鋰(溶于生理鹽水,生物工程上海公司);(3)硫酸阿托品;(4)地西泮;(5)10%水合氯醛。3實(shí)驗(yàn)方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癲癇發(fā)作Racie分級(jí)0級(jí):無(wú)抽搐發(fā)作;1級(jí):面部肌肉痙攣表現(xiàn)為咀嚼運(yùn)動(dòng);2級(jí):頸部肌肉痙攣表現(xiàn)為點(diǎn)頭運(yùn);3級(jí):一側(cè)前肢陣攣;4級(jí):站立伴雙前肢陣攣;5級(jí):在4級(jí)基礎(chǔ)上身體向后倒下。3.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具體致癲步驟(1)氯化鋰3mEq/kg腹腔注射;(2)14~17h之后腹腔注射硫酸阿托品1mg/kg;(3)30min之后按照分組情況腹腔注射不等劑量的匹魯卡品或生理鹽水;(4)若注射40min后仍然未誘發(fā)發(fā)作,可重復(fù)給于匹魯卡品10mg/kg;(5)癲癇發(fā)作60min后根據(jù)分組情況腹腔注射地西泮(10mg/kg)或10%水合氯醛(300mg/kg)終止發(fā)作,注射止痙劑30min仍沒(méi)有終止發(fā)作,可原劑量重復(fù)注射1次;(6)對(duì)照組除以生理鹽水代替匹魯卡品外,其他處理措施同實(shí)驗(yàn)1組。觀察實(shí)驗(yàn)鼠致癲及致死情況。4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS10.0Windows統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)來(lái)表示,比較率使用Fisher確切概率法,方差不齊資料選用非參數(shù)檢驗(yàn)。結(jié)果1肢體肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌肌具體數(shù)量,先出現(xiàn)單、雙側(cè)肢體肌肌肌肌腹腔注射匹魯卡品15~39min后大鼠先后出現(xiàn)生物行為的改變:首先出現(xiàn)豎毛、流涎、流血淚、點(diǎn)頭、探索樣行為、目光呆滯、腹瀉等,繼而出現(xiàn)面肌痙攣,咀嚼樣運(yùn)動(dòng),點(diǎn)頭,單、雙側(cè)肢體痙攣,最后身體向后摔倒。在所有誘發(fā)出癲癇發(fā)作的大鼠中均可觀察到4級(jí)以上的發(fā)作。2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的誘發(fā)成功對(duì)照組:無(wú)1例誘發(fā)出癲癇發(fā)作,也無(wú)1例死亡;實(shí)驗(yàn)1組:腹腔注射匹魯卡品后16~35min后(27.60±7.23min)5只大鼠全部誘發(fā)出4級(jí)以上的癲癇持續(xù)狀態(tài)。3只動(dòng)物在注射完地西泮后仍然有點(diǎn)頭,一側(cè)肢體陣攣,呼吸不均勻、流涎等表現(xiàn),生存25~44h(34.67±10.60h)后死亡,病死率為60%;實(shí)驗(yàn)2組:腹腔注射匹魯卡品7~36min(20.14±11.02min)后7只大鼠全部誘發(fā)出4級(jí)以上的發(fā)作。注射地西泮到發(fā)作終止時(shí)間為56~72min(53.14±9.03min),大鼠表現(xiàn)同實(shí)驗(yàn)1組。6只動(dòng)物生存20~55h(33.4±15.49h)后死亡,病死率為85.7%。與實(shí)驗(yàn)1組比較,死亡時(shí)間和病死率均無(wú)顯著性差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)3組:首次給與10mg/kg匹魯卡品腹腔注射后無(wú)一只誘發(fā)成功,重復(fù)多次,總量達(dá)到100mg/kg時(shí)仍然沒(méi)有發(fā)作,致癲鼠比率與實(shí)驗(yàn)1、2組相比有顯著性差異(P<0.05)。原大鼠飼養(yǎng)兩周后按照實(shí)驗(yàn)4組要求處理。有3只誘發(fā)出3級(jí)以上的發(fā)作,存活,另兩只在籠中飼養(yǎng)兩周后,結(jié)合氯化鋰腹腔注射匹魯卡品55mg/kg,同樣誘發(fā)出3級(jí)以上的發(fā)作,發(fā)作60min后使用10%水合氯醛300mg/kg終止發(fā)作,全部存活;實(shí)驗(yàn)4組:腹腔注射匹魯卡品后16~25min(19.00±3.56min)后誘發(fā)4級(jí)以上的發(fā)作,共有7只大鼠誘發(fā)成功。注射水合氯醛后4~21min(12.14±6.67min)完全終止發(fā)作。完全終止發(fā)作后動(dòng)物進(jìn)入昏睡,呼吸均勻平穩(wěn),呼吸道分泌物較實(shí)驗(yàn)1、2組明顯減少。與實(shí)驗(yàn)2組的發(fā)作終止時(shí)間比較,P<0.05,有顯著性差異。7只動(dòng)物全部存活。病死率與實(shí)驗(yàn)2組比較有顯著性差異(P<0.05)。匹魯卡品在癲癇發(fā)作過(guò)程中會(huì)導(dǎo)致大鼠的病死率,在臨床匹魯卡品為節(jié)后擬膽堿藥,可直接興奮外周和中樞的M-膽堿能受體,產(chǎn)生擬膽堿能作用,腹腔注射后可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)激活膽堿能受體而產(chǎn)生驚厥發(fā)作。氯化鋰可以增強(qiáng)匹魯卡品的這種擬膽堿能作用從而減少其用量。成年大鼠匹魯卡品癲癇模型呈現(xiàn)3個(gè)時(shí)期:癲癇持續(xù)狀態(tài)期,靜止期,慢性期。其中慢性期的大鼠腦神經(jīng)元的損傷和苔蘚出芽類(lèi)似于人類(lèi)的癲癇腦組織病理改變。所以,若能保證大鼠有較長(zhǎng)時(shí)間的存活就可以為研究慢性癲癇提供時(shí)機(jī)。腹腔注射100mg/kg匹魯卡品病死率(60%)和50mg/kg病死率(87.5%)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著性差異。在實(shí)驗(yàn)中觀察到?jīng)]有誘發(fā)成功的大鼠,其匹魯卡品總量最高已達(dá)到400mg/kg,除了匹魯卡品的外周毒副作用(如:流涎、流血淚,豎毛等)外沒(méi)有其他異常,生存狀態(tài)良好,這說(shuō)明匹魯卡品只要沒(méi)有誘發(fā)癲癇發(fā)作就不會(huì)導(dǎo)致大鼠的死亡。Jope等人也發(fā)現(xiàn)幾乎所有的動(dòng)物都死于沒(méi)有控制發(fā)作持續(xù)時(shí)間。這說(shuō)明匹魯卡品誘發(fā)的癲癇發(fā)作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致動(dòng)物病死率的增加,有效的限制癲癇發(fā)作的時(shí)間可以增加存活大鼠的數(shù)量,與匹魯卡品的劑量(至少在400mg/kg以?xún)?nèi))似乎沒(méi)有相關(guān)性,而選擇迅速有效的止痙劑就顯得尤為重要。水合氯醛能有效的降低癲癇鼠的病死率。在本次實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)2組和實(shí)驗(yàn)4組所使用的匹魯卡品劑量一致(均為50mg/kg),動(dòng)物體重,飼養(yǎng)條件等因素均一致,使用水合氯醛終止和地西泮終止動(dòng)物的病死率(分別為0%和87.5%)存在顯著性差異,而且從使用水合氯醛到發(fā)作完全終止所需時(shí)間比地西泮顯著減少(分別為12.14±6.67min和53.14±9.03min,P<0.05),這和胡越等人控制氯化鋰-匹魯卡品誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。臨床上也經(jīng)常使用水合氯醛灌腸來(lái)急救處理癲癇持續(xù)狀態(tài)。水合氯醛迅速終止發(fā)作的機(jī)制尚不明,實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)地西泮可以增加呼吸道的分泌物,增強(qiáng)了匹魯卡品的擬膽堿能作用,從而造成呼吸困難,嚴(yán)重者造成急性肺水腫、死亡,使得致癲鼠的病死率居高不下。使用水合氯醛后可以在較短時(shí)間內(nèi)迅速終止發(fā)作,減輕呼吸困難,有效地降低致癲鼠的病死率。重復(fù)多次低劑量注射匹魯卡品后大鼠的致癲率較低。在本實(shí)驗(yàn)中5只大鼠重復(fù)10mg/kg腹腔注射匹魯卡品無(wú)1例誘發(fā)癲癇成功。國(guó)外Maike等采用10mg/kg匹魯卡品多次重復(fù)注射致癲大鼠的比率為63/103(61%),國(guó)內(nèi)閆衛(wèi)紅等用30mg/kg匹魯卡品多次重復(fù)注射致癲率為28%,這說(shuō)明重復(fù)低劑量注射雖然病死率低,但是致癲率也低,對(duì)于實(shí)驗(yàn)研究并沒(méi)有多大實(shí)際意義。另外,原大鼠飼養(yǎng)兩周后,換用單劑量50mg/kg既可誘發(fā)成功。這與Maike等研究相矛盾:他們指出:若大鼠在重復(fù)多次低劑量注射后不能誘發(fā)癲癇時(shí)說(shuō)明這種大鼠和誘發(fā)成功的大鼠存在基因變異,但這種說(shuō)法無(wú)法解釋實(shí)驗(yàn)中觀察到的