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文檔簡介

電泳技術(shù)及其應(yīng)用電泳原理及其分類SDS電泳技術(shù)等電泳聚焦電泳雙向電泳技術(shù)1電泳原理及其分類原理：帶電顆粒在作用下電場，向著與其電性相反的電極移動，稱為電泳(electrophoresis,EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達(dá)到分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。電泳分類：1依據(jù)支持物的性狀：紙質(zhì)電泳、粉末電泳、凝膠電泳、緣線電泳2依據(jù)支持物的裝置形式：平板電泳、垂直板電泳、柱狀（管狀）電泳3依據(jù)pH的連續(xù)性：連續(xù)pH電泳（無濃縮膠）、非連續(xù)pH電泳常用的電泳技術(shù)：聚丙烯酰胺凝膠電泳等電聚焦電泳雙向電泳瓊脂糖電泳（大分子核酸、病毒類物質(zhì)）2丙烯酰胺凝膠電泳原理：聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)在加速劑N，N，N

，N

—四甲基乙二胺(TEMED)和催化劑過硫酸銨(AP)或核黃素的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。分子量與凝膠濃度的關(guān)系丙烯酰胺濃度（%）線性分離范圍（kD）

1512～431016～687.536～945.057～212SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）：如果在丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(SDS)，則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量，而與所帶電荷和形狀無關(guān)。因此可以利用SDS測定蛋白質(zhì)分子量。

當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15KD—200KD之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系。依據(jù)分子量的大小確定濃縮膠和分離膠的濃度及標(biāo)準(zhǔn)蛋白。加入分離膠溶液pH8.8封水或飽和正丁醇溶液制備分離膠封水的目的是使分離膠上表面平直，并排除氣泡。凝膠聚合好的標(biāo)志是膠與水層之間形成清晰的界面。倒出水或正丁醇，并用濾紙吸干分離膠pH8.8加入濃縮膠溶液pH6.8制備濃縮膠插入樣品梳樣梳需一次平穩(wěn)插入,梳口處不得有氣泡,梳底需水平。加入電極緩沖液pH8.3濃縮膠pH6.8通電分離膠pH8.8加入樣品開始電流恒定在10mA，當(dāng)進(jìn)入分離膠后改為20mA，溴酚藍(lán)距凝膠邊緣約5mm時(shí)，停止

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