白藜蘆醇對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的影響

白藜蘆醇對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的影響

白俄羅斯托爾（res）化學(xué)名稱為三酚，結(jié)構(gòu)為3、5、4'二羥基二苯乙烯（3、5、4）和化合物c14h123。它是一種非黃酮類多酚化合物，廣泛存在于自然界種子植物中，具有許多常見的藥物和食用植物。白藜蘆醇口服后在腸道以葡萄糖醛酸酯形式易于吸收,大部分由腎經(jīng)尿排出。白藜蘆醇的生物學(xué)效應(yīng)主要有抗腫瘤、抗炎、心血管保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)作用等,其中最引人注目的是抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用。我們前期研究表明白藜蘆醇對(duì)正常機(jī)體具有增強(qiáng)免疫功能的作用,但其對(duì)免疫抑制機(jī)體是否起作用尚需要進(jìn)一步研究,故本實(shí)驗(yàn)主要研究其對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的影響,為大力開發(fā)富含白藜蘆醇的中草藥寶藏及植物保健食品提供更為有利的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.材料和方法1.1試劑及儀器方法白藜蘆醇、四氮唑溴鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、ConA、RNAaesA:Sigma公司;RPMI1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶、GIBCO公司;胎牛血清:杭州四季青生物制品公司;小鼠IL-2ELISA試劑盒:晶美生物工程有限公司;IL-8ELISA試劑盒:上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司;環(huán)磷酰胺(CY)(批號(hào)20020201):上海第十二制藥廠,其它試劑均為國產(chǎn)分析純。YJ-875型超凈工作臺(tái):蘇州凈化設(shè)備公司;DG-3022A型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀:國營華東電子管廠;752C型紫外可見分光光度計(jì):上海第三分析儀器廠;M-1815TC型細(xì)胞培養(yǎng)箱:美國Sheldon有限公司;NikonTMS-F倒置顯微鏡:日本尼康公司;PB303-S型電子天平:瑞士Mettler-Toledo儀器有限公司。1.2研究主題BALB/c純系小鼠,8周齡,雌雄各半,體重20±2g,西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證:醫(yī)動(dòng)字第08-004號(hào)。1.3dms0的濃度將白藜蘆醇溶于DMS0成1mg·ml-1,濾過除菌,4℃貯存,用時(shí)以含10%胎牛血清的培養(yǎng)基稀釋至所需濃度,DMS0終濃度不高于0.1%,此濃度對(duì)機(jī)體無影響。1.4白隴蘆口服用量試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為3組:正常小鼠組,環(huán)磷酰胺+生理鹽水組,環(huán)磷酰胺+白藜蘆醇組,每組10只。結(jié)合白藜蘆醇的藥理學(xué)特點(diǎn),參照小鼠口服用量,將白藜蘆口服用藥濃度定為5mg·kg-1·d-1。連續(xù)灌胃14天,實(shí)驗(yàn)第五天,皮下注射CY100mg·kg-1,建立免疫抑制模型。1.5血清igm類抗體檢測(cè)1.5.1參照用MTT法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞功能和NK細(xì)胞活性。1.5.2參照用溶血分光光度法測(cè)定B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgM類抗體的能力。1.5.3參照用改良Mayer法測(cè)定血清總補(bǔ)體溶血活性(CH50)。1.5.4參照用ELISA雙抗體夾心法測(cè)定IL-2、IL-8含量。1.6統(tǒng)計(jì)處理所有數(shù)據(jù)用Xˉˉˉ±SXˉ±S表示,用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。2.結(jié)果2.1表1顯示了各組大鼠免疫指數(shù)的變化與環(huán)磷酰胺+生理鹽水組比較,**P<0.01。2.2表2顯示了各組大鼠高度的變化與環(huán)磷酰胺+生理鹽水組比較,**P<0.01。3.白隴蘆醇對(duì)免疫調(diào)節(jié)的影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明應(yīng)用白藜蘆醇后,免疫抑制小鼠的NK細(xì)胞殺傷力、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抗體釋放量、CH50活性均增加;IL-2含量顯著提高,IL-8分泌減少。說明白藜蘆醇能提高免疫抑制小鼠的細(xì)胞、體液免疫應(yīng)答水平,調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌,從多方面有效地增強(qiáng)免疫功能。實(shí)驗(yàn)中白藜蘆醇可以提高NK細(xì)胞殺傷率,與對(duì)照組有顯著性差異,還可以上調(diào)T淋巴細(xì)胞增殖,使ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化提高,刺激指數(shù)較對(duì)照顯著增加(P<0.01),同時(shí)誘導(dǎo)CTL細(xì)胞增殖,這與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。實(shí)驗(yàn)中免疫抑制小鼠的抗體形成細(xì)胞抗體量釋放增加(P<0.01),血清總補(bǔ)體活性增強(qiáng)(P<0.01),說明白藜蘆醇能夠提高體液免疫應(yīng)答水平,發(fā)揮正常免疫調(diào)節(jié)作用。另外白藜蘆醇能夠提高IL-2含量,同時(shí)減少IL-8分泌,兩種細(xì)胞因子的含量在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間有顯著性差異(P<0.01)。IL-2由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生,可誘導(dǎo)CTL、NK和LAK等多種殺傷細(xì)胞的分化和效應(yīng)功能,干預(yù)IL-2或IL-2R會(huì)影響到NK細(xì)胞的效應(yīng)功能。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):白藜蘆醇能夠提高免疫抑制小鼠NK細(xì)胞殺傷率,使免疫抑制小鼠生存狀態(tài)得到改善。由此提示,白藜蘆醇一方面可以通過提高IL-2含量,增強(qiáng)NK細(xì)胞自身的活性,間接促進(jìn)NK細(xì)胞殺傷率;另一方面,白藜蘆醇也可能刺激NK細(xì)胞增殖,直接提高其殺傷率,具體作用機(jī)理尚待進(jìn)一步研究闡明。免疫抑制機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能常常發(fā)生障礙,正常細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)態(tài)平衡遭到破壞,加重機(jī)體免疫功能紊亂。白藜蘆醇